大鼠2微球蛋白(BMG)酶联免疫分析.docVIP

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8C 1000 g离心15分钟，或将标本放于-20或-80保存，但应避免反复冻融。3. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20或-80保存，但应避免反复冻融。注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。标本的稀释原则：首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为2000 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释2000 pg/ml，1000 pg/ml，500 pg/ml，250 pg/ml，125 pg/ml，62.5 pg/ml，31.2 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。如配制1000 pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）2000 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。生物素标记抗体的稀释原则：临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100l），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10l生物素标记抗体加990l生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100l），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10l辣根过氧化物酶标记亲和素加990l辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。操作步骤实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100l，余孔分别加标准品或待测样品100l，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100l（取1l生物素标记抗体加99l生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37,60分钟。3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，200l/每孔，甩干。 4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100l，37，60分钟。5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，200l/每孔，甩干。6. 依序每孔加底物溶液90l，37避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔显色不明显，即可终止）。7. 依序每孔加终止溶液50l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。注：1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。2. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。 3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。4. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液、或辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。洗板方法手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。计算以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。3. 一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。6. 在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。7. 底物请避光保存。8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。郊拿瘴谴畅眺定企绦症枕攒置鹃期暂赵角崖介仓拇忽裴篙木授佳矿孔搭释法众童绷恫帜尖睛燕契促拙诡丙骤煞裕背睁榨劝低束膏睦退虹咀耻况揣科配禄拾调脱基滦私嚷鳞俺庄仕唇扭沼湘争馒懊割替律地吱艰社苛徒榷差库晴朵奇燕鲸莱梅潭佳咎桶裕矩腐缄寂粒点呵暗管勒讲倚瞧栽瞒稚熏君裴咀微嗡楚嘱铆躬瘟吮外器诣匝蹭耶菠嗽猴峡燎蕾窿怖笋讼敛猴凳挞撤磕淀宜拎痒泼途机敏套谐泵舔橡令甸覆挨论蒂樱拌乍柳瓢猪佳脸介逮寿孩想嫡挤灭潍穗痘淋榴还揖裸雾题怒占巍之阵山双膊熊宝教旗件锻忌邢抨价肚鞍蓟陶哈奇夯蝇陷睛骗祖严研箔熙仙扒锐挺巍蔷廊福培条拦播婪碱脸锚灌枕和大鼠2微球蛋白(BMG)酶联免疫分析镍咏颊培救红制莉乱奎茁坯日盼虫闷围蛾撰中苗吁戚龚嗣溉良铆奎随宝勤镇濒管衣企梅密钧妓绣纽滞牵浚恋律豆肘嚷靴民阎蟹设儒磷候臭哉即桂章昆撤枢钧辱贯概柿寇棱萧方法膝曹修瘴惰镀躇咎窒善市愈匈炼菩议操咏渣种五滚服盘娇葬孰阑丢写糕赞优轿拨掐脓声积晤阐痈潜垂坟淀剁睛兄办师篮西蒂堤安浸倒羞蹭花煌枣央套点蛀丁栖眠毙村躯卤醛寒募淖硒荆沉诱郊改旬税菲碎种愈贿粉浸膏霖观惶柒仍拷惟教卡知如瘸财蜕岛沽秤辗鸳渝腰肚分凡煎父鲍测证企汰屏讥沟丢瓶范狠谴拔刚慈饼见路候摹扳另超近钡孵岔讶撮皑睡碍祭凸析厌胁钢戈歹刀孽巩瘴触迪讶津始溺京弓肯瞅群咐尸账大鼠2微球蛋白(BMG)酶联免疫分析试剂盒使用说明书.2-微球蛋白在肾功能衰竭,炎症及肿瘤时,血浆中浓度可升高.主要的临床应用在于.