细胞概述5ppt课件

1,细胞生物学（27学时）,2,3,学时安排,第一章 绪论 2学时 第二章 细胞膜与细胞表面 3学时 第三章 物质的跨膜运输与信号传递 4学时 第四章 细胞质基质和内膜系统 4学时 第五章 细胞的能量转换线粒体和叶绿体 3学时 第六章 细胞骨架与细胞运动 2学时 第七章 核糖体和蛋白质合成 1学时 第八章 细胞核 2学时 第九章 细胞的增殖及其调控 2学时 第十章 细胞分化与肿瘤 2学时 第十一章 细胞衰老与凋亡 1学时 总结 1学时,4,第一章 绪论（2学时）, 细胞生物学研究的内容和现状 细胞生物学发展简史 细胞基本知识概要 细胞生物学的研究方法,5,细胞生物学研究的内容和现状,细胞生物学是现代生命科学的重要基础学科 细胞生物学的主要研究内容 当前细胞生物学研究的总趋势与重点领域 总趋势：细胞生物学与分子生物学(包括分子遗传学与生物化学) 相互渗透与交融是总的发展趋势。 重点领域： 染色体DNA与蛋白质相互作用关系主要是非组蛋白对基因组的作用 细胞增殖、分化、凋亡的相互关系及其调控 细胞信号转导的研究 细胞结构体系的组装,6,细胞生物学, 生命体是多层次、非线性、多侧面的复杂结构体系，而细胞是生命体的结构与生命活动的基本单位，有了细胞才有完整的生命活动。 细胞生物学是研究细胞基本生命活动规律的科学，它是在不同层次（显微、亚显微与分子水平）上以研究细胞结构与功能、细胞增殖、分化、衰老与凋亡、细胞信号传递、真核细胞基因表达与调控、细胞起源与进化等为主要内容。,7,细胞生物学发展简史,从研究内容来看细胞生物学的发展可分为三个层次，即：显微水平、超微水平和分子水平。 从时间纵轴来看细胞生物学的历史大致可以划分为四个主要的阶段： 第一阶段：从16世纪末-19世纪30年代，是细胞发现及细胞知识的积累阶段。 第二阶段：从19世纪30-20世纪中期，细胞学说形成后，主要进行显微形态的研究。 第三阶段：从20世纪30年代-50年代，以细胞超微结构、核型等研究为主要内容。 第四阶段：从20世纪50年代， J. Watson和H. Crick的DNA双螺旋模型的提出到70年代分子克隆技术的成熟到当前，细胞生物学与分子生物学的结合愈来愈紧密，基因调控、信号转导、细胞分化和凋亡、肿瘤生物学等领域成为当前的主要研究内容。,8,主要内容,细胞结构与功能、细胞重要生命活动： 细胞核、染色体以及基因表达的研究 生物膜与细胞器的研究 细胞骨架体系的研究 细胞增殖及其调控 细胞分化及其调控 细胞的衰老与凋亡 细胞的起源与进化 细胞工程,9,美国科学情报研究所（ISI）1997年SCI（Science Citation Index）收录及引用论文检索，全世界自然科学研究中论文发表最集中的三个领域分别是： 细胞信号转导（signal transduction）； 细胞凋亡（cell apoptosis）； 基因组与后基因组学研究（genome and post-genomic analysis）。,10,美国国立卫生研究院（NIH）在1988年底发表的一份题为什麽是当今科研领域的热门话题？（“What is popular in research today？”）的调查报告中指出，目前全球研究最热门的是 三种疾病： 癌症（cancer） 心血管病（cardiovascular diseases） 爱滋病和肝炎等传染病 （infectious diseases：AIDS，hepatitis） 五大研究方向： 细胞周期调控（cell cycle control）； 细胞凋亡（ cell apoptosis）； 细胞衰老（cellular senescence）； 信号转导（signal transduction）； DNA的损伤与修复（DNA damage and repair）,11,细胞的发现是和显微镜的发明分不开的。 1665 英国人Robert Hook用自己设计与制造的显微镜（放大倍数为40-140倍)观察了软木（栎树 皮)的薄片，第一次描述了植物细胞的构造，并首次用拉丁文cellar（小室)这个词来称呼他所 看到的类似蜂巢的极小的封闭状小室（实际上只是观察到到纤维质的细胞壁)。 1680 荷兰人A. van Leeuwenhoek成为皇家学会会员，一生中制作了200多台显微镜和500多个镜头。他是第一个看到活细胞的人，观察过原生动物、人类精子、鲑鱼的红细胞、牙垢中的细菌等等。,12,在18381839年，德国植物学家M. Schleidon和动物学家T. Schwann在总结前人工作的基础上提出了细胞学说。 “细胞学说”的基本内容 认为细胞是有机体，一切动植物都是由细胞发育而来,并由细胞和细胞产物所构成； 每个细胞作为一个相对独立的单位，既有它“自己的”生命,又对与其它细胞共同组成的整体的生命有所助益； 新的细胞可以通过老的细胞繁殖产生。,13,14,15,1. 1831 英国人Robert Brown 发现植物细胞核。 2. 1832 德国人？C. J. Dumortier 观察了藻类的细胞分裂，并认为细胞来源于原来存在的细胞。 3. 1835 德国人H. von Molh 仔细观察了植物的细胞分裂，认为是植物的根和芽尖极易观察到的现象。 4. 1835 法国人F. Dujardin 观察动物活细胞时发现“肉样质”（Sarcode)。 5. 1839 捷克人J. E. Pukinye 用prtoplasm这一术语描述细胞物质，“Protoplast”为神学用语，指人类始祖亚当。 6. 1841 波兰人R. Remak发现鸡胚血细胞的直接分裂（无丝分裂）。 7. 1846 德国人H. von Mohl研究了植物原生质，发表了“identifies protoplasm as the substance of cells”。,16,8. 1848 德国人W. Hofmeister 描绘了鸭跖草Tradescantia的花粉母细胞，明确的体现出染色体，但他没有认识到之一重要性，40年后德国人H. von Waldeyer因这一结构可被碱性染料着色而定名为Chromosome。 9. 1861 德国人M. Shultze 认为动物细胞内的肉样质和植物体内的原生质具有同样的意义。他给细胞的定义是：“the cell is an accumulation of living substance or protoplasm definitely delimited in space and possessing a cell membrane and nucleus。“ 10. 1864 德国人Max Schultze 观察了植物的胞间连丝。 11. 1865 德国人J. von Suchs 发现叶绿体。 12. 1866 奥地利人G. Mendel 发表了对豌豆的杂交试验结果，提出遗传的分离规律和自由组合规律。,17,13. 1868 英国人T. H. Huxley 在爱丁堡作题为“生命的物质基础”（the physical basis of life）的演讲报告时首次把原生质的概念介绍给了英国公众。 14. 1871 德国人F. Miescher 从脓细胞中分离出核酸。 15. 1876 德国人O.Hertwig发现海胆的受精现象，其论文题目为“observe the fertilization of a sea urchin egg“。 16. 1879 德国人W. Flemming观察了蝾螈细胞的有丝分裂，于1882年提出了mitosis 这一术语。后来德国人E. Strasburger(187680)在植物细胞中发现有丝分裂，认为有丝分裂的实质是核内丝状物（染色体)的形成及其向两个子细胞的平均分配，动植物的受精实质上是父本和母本配子核的融合，并于1984提出了Prophase和Metaphase的概念。 17. 1882 德国人E. Strasburger 提出细胞质（cytoplasm）和核质（nucleoplasm）的概念。,18,18. 1883 比利时人E. van Beneden 证明马蛔虫Ascaris megalocephala配子的染色体数目是体细胞的一半，并且在受精过程中卵子和精子贡献给合子的染色体数目相等。 19. 1883 比利时人E. van Beneden和德国人T. Boveri发现中心体。 20. 1884 德国人O.Hertwig和E. Strasburger提出细胞核控制遗传的论断。 21. 1886 德国人A. Weismann 提出种质论。 22. 1890 德国人Richard Altmann 描述了线粒体的染色方法，他推测线粒体就像细胞的内共生物，并认为线粒体与能量代谢有关。他还于1889年提出了核酸的概念。 23. 1892 德国人T. Boveri和O. Hertwig研究了减数分裂的本质，并描述了染色体联会现象。 24. 1898 意大利人C. Golgi 用银染法观察高尔基体。,19,25. 1900 孟德尔在34年前发表的遗传法则被重新发现。 26. 1905 美国人Clarence McClung shows that female mammals have 2 X chromosomes and that males have an X and a Y 27. 1908 美国人T. H. Morgan以Drosophila melanogaster为材料开始著名的遗传学实验，1910年提出遗传的染色体理论，1919年发表“遗传的本质“（Physical Basis of Heredity）。1926年发表“基因学说“（The Theory of the Gene） 28. 1910 德国人A. Kossel获得诺贝尔生理医学奖，他首先分离出腺嘌呤、胸腺嘧啶和组氨酸。 29. 1935 美国人W. M. Stanley 首次得到烟草花叶病毒的结晶体。 30. 1940 德国人G. A. Kausche和H. Ruska 发表了世界第一张叶绿体的电镜照片。,20,31. 1941 美国人G. W. Beadle和E. L. Tatum提出一个基因一个酶的概念。 32. 1944 美国人O. Avery等人通过微生物转化试验证明DNA是遗传物质。 33. 1945 美国的K. R. Porter、A. Claude 和 E. F. Fullam发现小鼠成纤维细胞中的内质网。 34. 1949 加拿大人M. Bar发现巴氏小体。 35. 1951 美国人James Bonner发现线粒体与细胞呼吸有关。 36. 1953 美国人J. D. Watson 和英国人F. H. C. Crick提出DNA双螺旋模型。 37. 1955 比利时人C. de Duve发现溶酶体和过氧化物酶体。,21,38. 1955 美国人Vincent Du Vigneaud因人工合成多肽而获诺贝尔奖。 39. 1957 J. D. Robertson 用超薄切片技术获得了清晰的细胞膜照片，显示暗-明-暗三层结构。 40. 1959年，蒋有兴（美籍华人）利用徐道觉发明的低渗处理技术证实了人的2n为46条，而不是48条。 41. 1961 英国人P. Mitchell 提出线粒体氧化磷酸化偶联的化学渗透学说，获1978年诺贝尔化学奖。 42. 196164 美国人M. W. Nirenberg破译DNA遗传密码。 43. 1968 瑞士人Werner Arber从细菌中发现DNA限制性内切酶。 44. 1970 美国人D. Baltimore、R. Dulbecco 和H. Temin由于发现在RNA肿瘤病毒中存在以RNA为模板，逆转录生成DNA的逆转录酶而获1975共享诺贝尔生理医学奖。,22,45. 1971 美国人Daniel Nathans 和Hamilton Smith发展了核酸酶切技术。 46. 1973 美国人S. Cohen和H. Boyer将外源基因拼接在质粒中，并在大肠杆菌中表达，从而揭开基因工程的序幕。 47. 1975 英国人F. Sanger设计出DNA测序的双脱氧法。于1980年获诺贝尔化学奖。此外Sanger还由于1953年测定了牛胰岛素的一级结构而获得1958年诺贝尔化学奖。 48. 1982 美国人S. B. Prusiner发现蛋白质因子Prion，更新了医学感染的概念，于1997年获诺贝尔生理医学奖。 49. 1983 美国人K. B. Mullis发明PCR仪，1987年发表了 “Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase-catalyzed chain reaction”，于1993年获诺贝尔化学奖。,23,50. 1984 德国人G. J. F. Kohler、阿根廷人C. Milstein 和丹麦科学家N. K. Jerne由于发展了单克隆抗体技术，完善了极微量蛋白质的检测技术而分享了诺贝尔生理医学奖。 51. 1989 美国人S. Altman和T. R. Cech由于发现某些RNA具有酶的功能（称为核酶)而共享诺贝尔化学奖。Bishop和Varmus由于发现正常细胞同样带有原癌基因而分享当年的诺贝尔生理医学奖。 52. 1997多利羊在卢斯林研究所诞生，成为世纪末的重大新闻。多利是Ian Wilmut领导的研究小组克隆的。,24,图1-9 多利和邦妮 图片来自http:/www.ri.bbsrc.ac.uk/,25,细胞基本知识概要,细胞的基本概念 细胞大小 非细胞形态的生命体病毒及其与细胞的关系 原核细胞与真核细胞 图 植物细胞与动物细胞,26,各类细胞直径的比较,27,细胞是生命活动的基本单位 一切有机体都由细胞构成，细胞是构成有机体的基本单位。 细胞具有独立的、有序的自控代谢体系，细胞是代谢与功能的基本单位。 细胞是有机体生长与发育的基础。 细胞是遗传的基本单位，细胞具有遗传的全能性。 没有细胞就没有完整的生命。,细胞的基本概念,28,细胞的基本共性 所有的细胞表面均有由磷脂双分子层与镶嵌蛋白质构成的生物膜，即细胞膜。 所有的细胞都含有两种核酸：即DNA与RNA作为遗传信息复制与转录的载体。 作为蛋白质合成的机器核糖体，毫无例外地存在于一切细胞内。 所有细胞的增殖都以一分为二的方式进行分裂。,29,病毒的基本知识,病毒（virus）核酸分子（DNA或RNA）与蛋白质构成的核酸-蛋白质复合体； 根据病毒的核酸类型可以将其分为两大类： DNA病毒与RNA病毒 病毒的多样性） 类病毒（viroid）仅由感染性的RNA构成；例如，马铃薯锤管类病毒 朊病毒（prion） 仅由感染性的蛋白质亚基构成；1982年SBPrusiner在患羊瘙痒病的羊体内发现了一种蛋白质因子，证明是羊瘙痒病的致病因子，他将其命名为PRION。Prusiner因此项重大发现而于1997年获得诺贝尔奖。 对于蛋白质感染因子引起的疾病，目前尚没有有效的治疗措施，据报道，自1996年以来，共有106人得了疯牛病，其中仅有七人还活着。,30,31,原核细胞与真核细胞的遗传结构装置和基因表达的比较,32,33,34,植物细胞与动物细胞的比较,细胞壁 液泡 叶绿体,35,病毒与细胞在起源与进化中的关系,病毒是非细胞形态的生命体，它的主要生命活动必须要在细胞内实现。病毒与细胞在起源上的关系，目前存在3种主要观点： 生物大分子病毒细胞 病毒 生物大分子 细胞 生物大分子细胞病毒,36,细胞生物学研究方法,细胞形态结构的观察方法 细胞组分的分析方法 细胞培养、细胞工程与显微操作技术,37,细胞形态结构的观察方法,光学显微镜技术（light microscopy） 电子显微镜技术 (Electro microscopy) 扫描探针显微镜（Scanning Probe Microscope） 扫描遂道显微镜 (scanning tunneling microscope ),38,细胞组分的分析方法,离心分离技术 细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等的显示方法 特异蛋白抗原的定位与定性 细胞内特异核酸的定位与定性 放射自显影技术 定量细胞化学分析技术,39,细胞培养、细胞工程与显微操作技术,细胞的培养 细胞工程,40,一、光学显微镜技术（light microscopy),普通复式光学显微镜技术 荧光显微镜技术（Fluorescence Microscopy） 激光共焦扫描显微镜技术（Laser Confocal Microscopy） 相差显微镜（phase-contrast microscope） 微分干涉显微镜 （differential interference contrast microscope, DIC） 录像增差显微镜技术（video-enhance microscopy）,41,二、 电子显微镜技术,电子显微镜的基本知识 电镜与光镜的比较 电镜与光镜光路图比较 电子显微镜的基本构造 主要电镜制样技术 负染色技术 冰冻蚀刻技术 超薄切片技术 电镜三维重构技术 扫描电镜（Scanning electron microscope，SEM） SPM(Scanning probe microscope),42,三、 扫描遂道显微镜,Scanning Probe Microscope,SPM (80年代发展起来的检测样品微观结构的仪器) 包括：STM、AFM、磁力显微镜、摩擦力显微镜等 原理：扫描探针与样品接触或达到很近距离时，即产生彼此间相互作用力，如 量子力学中的隧道效应（隧道电流）、原子间作用力、磁力、摩擦力等， 并在计算机显示出来，从而反映出样品表面形貌信息、电特性或磁特性等。 装置：扫描的压电陶瓷，逼近装置，电子学反馈控制系统和数据采集、处理、显示系统。 特点：（1）可对晶体或非晶体成像，无需复杂计算，且分辨本领高。 （侧分辨率为0.10.2nm，纵分辨率可达0.01nm）； （2）可实时得到样品表面三维图象，可测量厚度信息； （3）可在真空、大气、液体等多种条件下工作；非破坏性测量。 （4）可连续成像，进行动态观察 用途：纳米生物学研究领域中的重要工具,在原子水平上揭示样本表面的结构。,43,普通复式光学显微镜技术,光镜样本制作 显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数，还与显微镜的分辨力（resolution）有关。 分辨率是指区分开两个质点间的最小距离,n=介质折射率；=镜口角（聚焦点对物镜镜口的张角），N.A.=镜口率（numeric aperture）。,44,荧光显微镜技术（Fluorescence Microscopy）,原理： 细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜可对这类物质进行定性和定量研究。光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜。是目前在光镜水平用于特异蛋白质等生物大分子的定性定位最有力的工具。 应用 直接荧光标记技术 间接免疫荧光标记技术,45,激光共焦扫描显微镜技术 （Laser Scanning Confocal Microscopy）,原理和应用：激光共聚焦扫描显微镜（laser confocal scanning microscope）用激光作扫描光源，逐点、逐行、逐面快速扫描成像，扫描的激光与荧光收集共用一个物镜，物镜的焦点即扫描激光的聚焦点，也是瞬时成像的物点。由于激光束的波长较短，光束很细，所以共焦激光扫描显微镜有较高的分辨力，大约是普通光学显微镜的3倍。系统经一次调焦，扫描限制在样品的一个平面内，调焦深度不一样时，就可以获得样品不同深度层次的图像，这些图像信息都储于计算机内，通过计算机重新组合，就能显示细胞样品的立体结构，给出细胞内各部分之间的定量关系及各种结构线度。 激光共聚焦扫描显微镜既可以用于观察细胞形态，也可以用于细胞内生化成分的定量分析、光密度统计以及细胞形态的定量。 优点： 排除焦平面以外光的干扰，增强图像反差和提高分辨率(1.41.7)，可重构样品的三维结构。,46,相差显微镜（phase-contrast microscope） 将光程差或相位差转换成振幅差，可用于观察活细胞 微分干涉显微镜（differential-interference microscope） 偏振光经合成后，使样品中厚度上的微小区别转化成 明暗区别，增加了样品反差且具有立体感。适于研究 活细胞中较大的细胞器 图 录像增差显微镜技术（video-enhance microscopy） 计算机辅助的DIC显微镜可在高分辨率下研究活 细胞中的颗粒及细胞器的运动,47,电镜与光镜的比较,48,主要电镜制样技术, 超薄切片技术 用于电镜观察的样本制备。通常以锇酸和戊二醛固定样品，以环氧树脂包埋，以热膨胀或螺旋推进的方式推进样品切片，切片厚度20-50。 示意图 负染色技术（Negative staining）与金属投影 染色背景，衬托出样品的精细结构 冰冻蚀刻技术（Freeze etching） （技术示意图） 冰冻断裂与蚀刻复型：主要用来观察膜断裂面的蛋白质颗粒 和膜表面结构。 电镜三维重构技术 电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结合而形成的具有重要应用前景的一门新技术。 电镜三维重构技术与X-射线晶体衍射技术及核磁共振分析技术相结合，是当前结构生物学（Structural Biology） 主要研究生物大分子空间结构及其相互关系的主要实验手段。 ,49,扫描电镜 （scanning electron microscope，SEM）,原理与应用： 扫描电子显微镜于20世纪60年代问世，用来观察标本的表面结构。工作原理是用一束极细的电子束扫描样品，在样品表面激发出次级电子，次级电子的多少与电子束入射角有关，也就是说与样品的表面结构有关，次级电子由探测体收集，并在那里被闪烁器转变为光信号，再经光电倍增管和放大器转变为电信号来控制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步的扫描图像。图像为立体形象，反映了标本的表面结构。为了使标本表面发射出次级电子，标本在固定、脱水后，要喷涂上一层重金属微粒，重金属在电子束的轰击下发出次级电子信号。 CO 2临界点干燥法防止引起样品变形的表面张力问题。 图,50,人类血细胞SEM照片 图片来自/,51,一、 离心分离技术,用途： 离心是研究如细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体和微体等细胞器，以及各种大分子基本手段。一般认为，转速为10000-25000r/min的离心机称为高速离心机；转速超过25000r/min，离心力大于89K者称为超速离心机。目前超速离心机的最高转速可达80000r/min，离心力超过500Kg。 差速离心（Differencial centrifugation）： 在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。 密度梯度离心： 用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种。密度梯度离心常用的介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。 用于精细组分或生物大分子的分离。,52,二、 细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等的显示方法,原理：利用一些显色剂与所检测物质中一些特殊基团特异性结合的特征，通过显色剂在细胞中的定位及颜色的深浅来判断某种物质在细胞中的分布和含量。 1. 金属沉淀法：利用金属化合物在反应过程中生成有色沉淀，借以辨认所检查的物质或酶活性。如磷酸酶分解磷酸酯底物后，反应产物最终生成CoS或PbS有色沉淀，而显示出酶活性。 2. 偶氮偶联法：酚类化合物与偶氮染料结合后可以形成耐晒染料。 3. Schiff反应：细胞中的醛基可使Schiff试剂中的无色品红变为红色。这种反应通常用于显示糖和脱氧核糖核酸（Feulgen反应）。,53,4. 联苯胺反应：过氧化酶分解H202。产生新生氧，后者再将无色的联苯胺氧化成联苯胺蓝，进而变成棕色化合物。 5. 普鲁士蓝反应：三价铁与酸性亚铁氰化钾作用，形成普鲁士蓝。 6. Formazane反应：显示脱氢酶。 7. “Nadi”反应：显示细胞色素氧化酶。 8. 脂溶染色法：借苏丹染料溶于脂类而使脂类显色。 9. 茚三酮反应：显示蛋白质。,54,三、特异蛋白抗原的定位与定性,免疫荧光技术： 根据免疫学原理，利用抗体同特定抗原专一结合，并标上标记荧光素，对抗原进行定位测定的技术。 快速、灵敏、有特异性，但其分辨率有限 。 蛋白电泳(SDS-PAGE与免疫印迹反应(Western-Blot) 免疫电镜技术：能有效提高样品的分辨率，在超微结构水平上研究特异蛋白抗原的定位。 免疫铁蛋白技术 免疫酶标技术 免疫胶体金技术 应用：通过对分泌蛋白的定位，可以确定某种蛋白的分泌动态；胞内酶的研究；膜蛋白的定位与骨架蛋白的定位等,55,四、细胞内特异核酸的定位与定性,光镜水平的原位杂交技术（同位素标记或荧光素标记的探针） 电镜水平的原位杂交技术（生物素标记的探针与抗生物素抗体相连的胶体金标记结合） PCR技术 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）,56,五、放射自显影技术 （radioautography；autoradiography)）,原理及应用： 其原理是将放射性同位素（如14C和3H）标记的化合物导入生物体内，经过一段时间后，将标本制成切片或涂片，涂上卤化银乳胶，经一定时间的放射性曝光，组织中的放射性即可使乳胶感光。然后经过显影、定影处理显示还原的黑色银颗粒，即可得知标本中标记物的准确位置和数量，放射自显影的切片还可再用染料染色，这样便可在显微镜下对标记上放射性的化合物进行定位或相对定量测定。 还可实现对细胞内生物大分子进行动态和追踪研究。 图,57,六定量细胞化学分析技术, 细胞显微分光光度术（Microspectrophotometry） 利用细胞内某些物质对特异光谱的吸收，测定这些物质 （如核酸与蛋白质等）在细胞内的含量。 包括： 紫外光显微分光光度测定法 可见光显微分光光度测定法 流式细胞仪（Flow Cytometry） 主要应用： 用于定量测定细胞中的DNA、RNA或某一特异蛋白的含量； 测定细胞群体中不同时相细胞的数量； 从细胞群体中分离某些特异染色的细胞； 分离DNA含量不同的中期染色体。,58,一、细胞的培养,动物细胞培养 类型： 原代培养细胞（primary culture cell） 继代培养细胞（sub-culture cell） 细胞株（cell strain） 正常二倍体，接触抑制 细胞系（cell line） 亚二倍体，接触抑制丧失 植物细胞 类型： 原生质体培养 （体细胞培养） 单倍体细胞培养（花药培养）,59,二、细胞工程,细胞融合（cell fusion）与细胞杂交（cell hybridization）技术 单克隆抗体（monoclone antibody）技术 图 细胞显微操作技术（micromanipulation technique） 显微操作技术是指在高倍复式显微镜下，利用显微操作器（micrcmanipulator）进行细胞或早期胚胎操作的一种方法。 显微操作技术包括细胞核移植、显微注射、嵌合体技术、胚胎移植以及显微切割等。 细胞核移植技术已有几十年的历史，Gordon等人（1962）对非洲爪蟾进行核移植获得成功。我国著名学者