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文档简介

体外抗体形成细胞的检测,定量溶血分光光度计法 Quantitative Hemolytic Spectrophotometric determination （QHS）,SRBC免疫小鼠 获取小鼠脾细胞 SRBC (Ag) + spleen cell (Ab) +Complement MAC 裂解SRBC 释放出血红蛋白 分光光度计定量测定,Principle,anti-SRBC Ab,IMMUNIZE MOUSE,SRBC制备 以NS洗涤防凝SRBC两次 以 NS稀释成1.5108/ml Complement制备 豚鼠血清 (5) + SRBC (1) 4吸收 30 min 3000rpm离心15min，上清 1:10 稀释备用 脾细胞制备 2107/ml 脾细胞 (见步骤),Procedure,脾细胞的制备 SRBC免疫小鼠 4天后拉颈处死，取脾 200目铜网上研磨脾脏，收集脾细胞悬液 2000rpm离心5min，弃上清 加4.5 ml DDW，振荡45秒,加入0.5ml 9%NaCL, 2000rpm 离心 5min,弃上清 （加5ml Hanks 液，混匀 2000rpm 离心 5min，弃上清） 加 1 ml Hanks 液 (计数，调整细胞浓度为2107/ml),Procedure,混匀，37 孵育 1 h 3000rpm 离心 5 min，取上清 721分光光度计测413nm处OD值（Hb量）,Procedure,抗体形成细胞检测,1mm1mm0.1mm=0.1mm3=0.110-3ml =10-4ml,细胞浓度:,细胞数/ml =5个中格的细胞数 x 5x 104（RBC计数法
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