离子色谱法测定乳制品中的三聚氰胺含量.doc

离子色谱法测定乳制品中的三聚氰胺含量摘要：本文建立了牛奶和奶糖等乳制品中三聚氰胺含量测定的离子色谱方法。方法的线性范围为0.3-5.0 mg/L，检出限为0.2 mg/L，RSD为2.8%。采用该方法测定了市售6种牛奶和奶糖样品中三聚氰胺的含量，回收率在92%-107%之间，RSD为1.0%-3.9%。结果表明该方法简单快速、灵敏度高，适合乳制品等复杂基体中三聚氰胺的分析测定。 关键词：离子色谱法，乳制品，乳制品 前 言 三聚氰胺（Melamine, Mel），俗称“蛋白精”，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，分子式为C3N6H6或C3N3(NH2)3。三聚氰胺生产成本较低，可以显著提高蛋白质食品的蛋白质检出值、增加食品的黏度，提高口感，这些因素驱动着不法厂商往蛋白质食品中添加三聚氰胺。/Product.asp?action=search&dq=1860&proClass=0&textitle=三聚氰胺2008年底三鹿奶粉事件引起了社会各界对蛋白食品中三聚氰胺的广泛关注，卫生部等五部门立即颁布了“2008年第25号乳制品及含乳食品中三聚氰胺临时管理限量值规定”的公告，规定婴幼儿配方乳粉中三聚氰胺的限量值为1 mg/kg，液态奶(包括原料乳)、奶粉及其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值为2.5 mg/kg。因此建立快速的检测方法以确保食品的安全是十分有必要的。 目前食品中微量三聚氰胺的分析方法有质谱（MS）、高效液相色谱、离子交换色谱、离子对色谱、气相色谱、毛细管电泳、电喷雾串联质谱等。离子色谱法具有分析速度快、灵敏度高、选择性好、多离子同时分析等优点，广泛应用于不同基体中阴阳离子的分析检测中。本文建立了牛奶等乳制品中三聚氰胺含量测定的离子色谱方法，测定了市售6种乳制品中三聚氰胺的含量。中国色谱网 1 实验部分 1.1 仪器 882型离子色谱仪（瑞士万通，配有思维电导检测器、低脉冲串联式双活塞往复泵和色谱数据处理工作站），高速离心机等，Anpelclean MCX混合型强阳离子交换固相萃取小柱(60 mg/3 mL)。 1.2 试剂 分析纯浓硫酸，甲醇，NaOH，醋酸，酒石酸，2,6-吡啶二羧酸，三聚氰胺（Melamine, Mel）标准品，优级纯硝酸，水为超纯水。市售牛奶、奶糖和奶片样品。1000 mg/L Mg2+和Ca2+储备液。 1.3 样品处理 量取5.0 mL牛奶（或1.0 g奶糖溶于5 mL水），加入2 mL 3(v/v)的醋酸，摇匀后于4000 r/min下离心10 min。过滤，于上清液中加入0.5 mL 3 mol/L的NaOH，混匀，离心10 min，用0.45 m滤膜过滤。 依次用3 mL甲醇活化、3 mL水平衡MCX固相萃取柱，滤液完全上样后，分别用3 mL水、3 mL甲醇淋洗，用3 mL 5%(v/v)氨化甲醇洗脱，收集洗脱液待测。 1.4 色谱条件 分离柱：Metroscp C2 (250 mm4.0 mm)；淋洗液：硝酸 (1.05 mmol/L)-酒石酸 (1.0 mmol/L)-吡啶二羧酸（1.5 mmol/L）；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；进样量：20 L。 2 结果讨论 2.1 淋洗液优化 淋洗液是离子色谱分析中最重要的一步。酒石酸、吡啶二羧酸等是常用的阳离子分析淋洗液。 由于Ca2+、Mg2+容易对三聚氰胺的分离产生干扰，考察了不同浓度的硝酸、酒石酸和吡啶二羧酸淋洗液体系对Ca2+、Mg2+和Mel离子分析的影响。结果表明，采用1.05 mmol/L HNO3 -1.0 mmol/L 酒石酸-1.5 mmol/L吡啶二羧酸淋洗液时，Ca2+、Mg2+和Mel离子能得到较好分离。 2.2 样品处理条件优化 牛奶等乳制品中富含蛋白质、脂肪，容易影响分离。乙酸既有沉淀蛋白质的作用，且在色谱柱上保留较弱。因此，本文采用乙酸溶液作为蛋白质的沉淀剂，以氢氧化钠作为脂肪的沉淀剂。/Product.asp?action=search&dq=1860&proClass=0&textitle=色谱柱分别加入1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL的3%(v/v)乙酸溶液入5 mL样品溶液中，考察乙酸沉淀剂用量对乳制品中蛋白质的沉淀效果。结果表明醋酸沉淀剂的加入量在2.0 mL时较为适合。分别考察了0.3，0.5，0.8 mL 3 mol/L氢氧化钠溶液对样品中脂肪的去除效果，其中0.5 mL 3 mol/L氢氧化钠溶液的沉淀效果较好。因此，本文选择2.0 mL的3%(v/v)醋酸为蛋白质沉淀剂，0.5 mL 3 mol/L氢氧化钠溶液为脂肪沉淀剂，1 mg/mL的Ca2+，Mg2+对三聚氰胺分析无干扰。 2.3 分析方法建立 配制0.3-5.0 mg/L系列浓度的标准溶液，在优化条件下对其进行分析定量，根据峰面积(Y)与浓度(X)的关系计算工作曲线，方法的线性方程为Y=4.5210-3+3.4110-2 X，线性范围0.5-5.0 mg/L，相关系数r为0.9995，检出限0.2 mg/L和精密度RSD(n=6)为2.8%。 2.4 实际样品测定 测定了市售2种牛奶、3种奶糖和1种奶片共6种不同乳制品中三聚氰胺的含量，实际样品中检测到的三聚氰胺在2 mg/L以下。图1为0.5 mg/L 三聚氰胺标准样品及添加5 mg/L三聚氰胺的牛奶样品的色谱图。三聚氰胺的回收率为回收率在92%-107%之间，RSD为1.0%-3.9%，满足分析要求。 3 结论 本文建立了牛奶等乳制品中三聚氰胺的离子色谱方法。测定了6种乳制品中三聚氰胺的含量，回收率在92%-107%之间，RSD为1.0%-3.9%。结果表明该方法简单快速、灵敏度高，适合乳制品等复杂基体中三聚氰胺的分离分析。 参考文献： 1李良，王晴，江勇等. 离子色谱法同时测定奶粉中亚硝酸根、硝酸根、氯离子和磷酸根. 理化检验化学分册. 2007，43(10)：835-837. 2 Huang GM, Xu W, Visbal-Onufrak, et al. Direct analysis of melamine in complex matrices using a handheld mass spectrometer, Analyst, 2010, 135(4): 705-711. 3 Ibanez M, Sancho JV, Hernandez F. Determination of melamine in milk-based