原癌基因Pim-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治.ppt

原癌基因Pim-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治疗药物的开发,复旦大学附属肿瘤医院实验研究中心 复旦大学上海医学院肿瘤学系,Pim-3激酶在胰腺癌发生中的作用机制 以Pim-3为靶向治疗分子的新型有效的 抗肿瘤药物的开发,报告内容,Pim-3激酶在胰腺癌发生中的作用机制,p34,p34,p34,p37,p40,Kinase Domain,Pim-1,Pim-2,Pim-3,Deneen B. et al. Mol Cell Biol 2003;23:3897,Mikkers H. et al. Mol Cell Biol 2004;24:6104,Pim-3 与恶性转化相关,Pim基因敲出的小鼠生命力旺盛且可繁殖后代,Pim-3是原癌基因。,研究背景,Pim-3 is a proto-oncogene with serine/threonine kinase activity.,Fujii C et al. Int J Cancer. 2005 Mar 20;114(2):209-18.,Pim-3激酶是否与肝脏以外的其它脏器肿瘤发生有关？ 我们聚焦在同是内胚层来源的器官，胰腺。,Normal Tissue,Cancer Tissues,Pim-3 蛋白在人胰腺癌组织和胰腺癌细胞株中高表达,PCI55,PCI35,-Pim-3,Actin,36,43,kDa,WCL,Pim-3,shRNA,Non Scramble Pim-3,PCI55,Pim-3 siRNA 干扰Pim-3蛋白表达，导致人胰腺癌细胞株细胞凋亡，从而降低细胞活力,Scramble shRNA,Pim-3 shRNA,DNA Content,No shRNA,SubG1,Annexin V,Pim-3 shRNA,Scramble shRNA,Pim-3 shRNA,Scramble shRNA,0 1 2 3 4 5,8 7 6 5 4 3 2 1 0,Cell viability ratio,Time after passage (days),*,*,*,*,Pim-1, Pim-2,Bad,Ser136, Survival Factor,PI3K,AKT,Bad,Ser112,Pim-1 and Pim-2 Can Inactiavte Pro-apoptotic Molecule, Bad, by Phosphorylating Its Serine Residues,Bad,Bcl-XL,+,Bcl-XL,Pim-3,Bad,Pim-3/Bad,PCI55,Pim-3 和 Bad 的相互作用,a-Pim3,HeLa,a-Bad,a-IgG,IP:,PCI35 PCI55 PCI55,25,26,kDa,Bad,IgG,Blot: anti-Pim3,Blot: anti-Bad,50,36,Pim-3,IgG,Immunoprecipitation with anti-Pim-3,Western blotting with anti-Bad,Washing with Stripping buffer,Western blotting with anti-Pim-3,Pim-3,pBad112,Pim-3/pBad112,PCI35 PCI55,20mm,Pim-3和磷酸化Bad在细胞质内共定位,Actin,Bad,pBad112,pBad136,pBad155,Pim-3,26,26,26,26,43,KDa,36,shRNA,Non Scramble Pim-3,PCI55,降低Pim-3 蛋白表达可以减少 Bad112磷酸化,小结（1）,Pim-3 对于难治性胰腺癌来说是一个很好的靶向治疗分子,以Pim-3为靶向治疗分子的新型有效的抗肿瘤药物开发,胰腺癌是我国十大恶性肿瘤之一 早期诊断困难 晚期患者手术治疗5年生存率低于5%，发病率等于死亡率 传统的化学治疗存在抗肿瘤能力低，杀伤指数过小，副作用大等缺点 分子靶向治疗具有特异性强，效果显著，正常组织损伤小等优点 现有的抑制增殖因子受体活性的分子靶向治疗缺乏肿瘤治疗的特异性，而且容易产生耐药性,研究背景,Pim-3作为药物靶点，特异性更强。,Pim-3与Pim-1具有高度的同源性（70%）和类似的生物功能,推测Pim-3的立体空间结构,低分子化合物-Pim-3激酶复合物立体空间结构,从DrugBank和PubChem数据库中筛选了23种类似低分子化合物,低分子化合物的筛选,选择并合成了对Pim-3有高亲和性的小分子化合物-蔓生百部碱（stemonamide）合成中间体,蔓生百部碱是百部属生物碱中的一种，其在中国和日本民间医学中作为镇咳药。,合成顺序：T-10 T-6, T-10 T-4 T-5, T-10 T-2 T-3,蔓生百部碱合成中间体结构,Pim-3,Pim-1,Pim-2,T2, T5体外抑制Pim激酶活性,IC50 (mmol/L),Pim-3 Pim-1 Pim-2 AKT-1 AKT-2,T2 T5 T10 AKT1/2,78 92 2000 nd,90 56 2000 nd,33 50 2000 nd,1934 2000, 2000 2000,31.58 72.47,345 462,T-2和T-5抑制Pim激酶活性，却不抑制AKT/PKB的活性,Times after treatment with inhibitor (days),Cell proliferation ratio,T-2,T-5,L3.6pl,T-10,Miapaca-2,T-2， T-5体外抑制人胰腺癌细胞株的细胞增殖,Cell line name,T-2 T-5,L3.6pl 6.6 26.1 MiaPaca-2 5.9 22.9,IC50 (mmol/L),过表达Pim-3可以部分逆转由T-2引起的细胞活力下降,MiaPaca-2,T-2 引起人胰腺癌细胞产生细胞凋亡,T-2抑制Pim-3激酶活性，阻止pBad112, 减少Bcl-XL的表达， 依赖细胞色素C和Caspase-3途径导致细胞凋亡。,pBad112,Bad,Bcl-XL,Cytochrome C,Cleaved-caspase-3,L3.6pl,Actin,pBad136,Caspase-3,Cdc25A,PIM-3,pBad155,5X105 L3.6pl Subcutaneous injection,36,15days,Sacrify,: Intraperitoneal injection,15,16,17,18,19,29,30,31,32,33,22,23,24,25,26,(days),T-2 (20mg/kg),T-2抑制裸鼠皮下胰腺肿瘤的生长,T-2引起裸鼠皮下胰腺肿瘤细胞凋亡和抑制细胞增殖,T-2 抑制肿瘤新生血管形成,*,T-2 对裸鼠血清中的一些生化指标没有影响,DMSO T2 (n=5) (n=6),Hematological parameters,9.30.07 8.080.33 49.883.06 46.721.90 30.043.84 9.91.70 84.21.90 81.171.10 00 0.170.07 00 00 13.401.83 16.671.00 2.400.46 2.000.15,RBC Platelets WBC Neutrophil Eosinophils Basophil Lymphocytes Monocytes,106/ml 104/ml 103/ml % % % % %,BALB/C裸鼠全血中白细胞正常值 3.841.64 103/ml ,T-2抑制荷瘤小鼠全血中白细胞的数量增多， 使其恢复到正常,蔓生百部碱可以作为设计Pim-3激酶抑制剂的先导化合物 开发新药，应用临床，为难治性胰腺癌提供新的治疗方法,小结（2）,线粒体,谢谢！,） “和而不同”，多元发展。近年来，中医药在防治非典、禽流感和艾滋病方面发挥的独特作用也证实了二者的有机结合，具有肯定的临床疗效。 编辑本段东西方医学交融（df高血压958心脏病983u6糖尿病87fr） 不管是中医学还是西医学，从二者现有的思维方式的发展趋势来看，均是走向现代系统论思维，中医药学理论与现代科学体系（45传染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh）之间具有系统同型性，属于本质相同而描述表达方式不同的两种科学形式。可望在现代系统论思维上实现交融或统一，成为中西医在新的发展水平上实现交融慢性胃炎分类 慢性胃炎的命名很不统一。依据不同的诊断方法而有慢性浅表性胃炎、慢性糜烂性胃炎、慢性萎缩性胃炎、慢性胆汁返流性胃炎、慢性疣性胃炎、药物性胃炎、乙醇性胃炎等等。 慢性胃炎大体可分为三种类型：慢性肥厚性胃炎、慢性浅表性胃炎以及慢性萎缩性胃炎。慢性肥厚性胃炎在临床上较为少见，一般也不会发生癌变。慢性浅表性胃炎主要是指胃粘膜的浅表性炎症，这类炎症主要表现为胃粘膜的固有膜宽度增大并伴有水肿，被炎症细胞浸润，但胃腺体多属正常这类胃炎在临床上较多见，一般也不会发生癌变。只要经过恰当治疗之后，炎症可消退，但如治疗不当，往往可发展成萎缩性慢性胃炎慢性萎缩性胃炎是指胃粘膜除有浅表性胃炎病变外，胃腺体明显减少，脉管间隙扩大，胃粘膜层有全层性细胞浸润，常伴有肠上皮化生，即胃型上皮变为肠型上皮这种性质的慢性胃炎与胃癌的关系密切，特别是有肠上皮化生者更是如此或统一的支撑点，希冀籍此能给（df高血压958心脏病983u6糖尿病87fr）中医学以至生命科学带来良好的发展机遇，进而对医学理论带来新的革命。 在胃镜问世以前，胃炎的主要诊断依据是依靠临床症状和上消化道钡餐检查。随着纤维胃镜的临床应用，特别是经胃镜对胃粘膜的活组织检查，对越来越多的胃炎有了较明确的认识。1982年，国内胃炎会议上根据国内外经验，将慢性胃炎分为浅表性和萎缩性两大类。而在浅表性胃炎的命名上，又常常使用病理、部位、形态等含义的词，如“慢性疣状胃炎”、“慢性出血性胃炎”、“慢性糜烂性胃炎”、 “慢性胆汁反流性胃炎”等等。1990年8月，在澳大利亚悉尼召开的第九届世界胃肠病学大会上，又提出了新的胃炎分类法，它由组织学和内镜两部分组成，组织学以病变部位为核心，确定3种基本诊断：急性胃炎；慢性胃炎；特殊类型胃炎。加上前缀病因学诊断和后缀形态学描述，并对炎症、活动度、萎缩、肠化、幽门螺杆菌感染分别给予程度分级。内镜部分以肉眼所见描述为主，分别区分病变程度。 1慢性糜烂性胃炎 内镜下常表现为多发性点状或阿弗他溃疡。慢性非糜烂性胃炎可为特发性，也可由药物(特别是阿司匹林和非甾体类消炎药，参见消化性溃疡的治疗部分)，克罗恩病或病毒感染所引起。幽门螺杆菌可能在此不发挥重要作用。 症状多为非特异性的，可包括恶心，呕吐和上腹部不适。内镜下显示在增厚的皱襞隆起边缘有点状糜烂，中央有白斑或凹陷。组织学变化多样。尚无某种方法具有广泛疗效或可治愈。 治疗多为对症治疗，药物包括制酸剂，H2拮抗剂和质子泵