培养基适用性检查验证方案.doc

编号: AB/06-31-B 培养基适用性验证方案 计数培养基 *药厂有限公司 培养基适用性验证方案标题培养基适用性验证方案编 号AB/06-31-B页 码共5页、第1页执 行200 年 月 日颁发部门GMP综合办公室分发部门行政管理办公室分发数起草人起草日期审核人审核日期批准人批准日期目 录1. 概述.22. 验证目的23. 验证的范围24. 验证人员及职责25. 验证程序和方法26. 验证可接受的标准37. 验证步骤38. 结果分析及评价：49. 验证报告510. 建议.511. 最准批准.512. 所使用的记录.61. 验证目的：细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。本次验证的目的是确认营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基适合细菌、霉菌及酵母菌数测定。2. 参照标准：2010版中国药典二部附录XI J微生物限度检查法。3. 验证项目：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查。4.验证小组人员及职责：4.1验证小组人员:小组人员职务姓 名所在部门职 务组 长质量部经 理组 员质量部QC主任组 员质量部检验员4.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。4.2.2认真观察并做好验证原始记录。4.2.3对实施验证的结果负责。4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。4.3.1.3负责验证方案的批准工作。4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。4.3.1.5负责验证报告的批准工作。4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。4.3.2.3负责验证方案的实施。4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。4.3.2.5参与验证结果的评价工作。4.3.3质量部职责4.3.3.1负责公司验证日常管理工作。4.3.3.2负责验证方案的审核工作。4.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。4.3.3.4负责检验仪器及检验方法的验证。4.3.3.5负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程中的各项检验工作负责。4.3.3.6负责对验证人员的培训、考核工作。4.3.3.7负责验证资料和报告的审核工作。4.3.3.8负责验证文件回收、归档管理工作。5. 合格标准：被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。6. 试验材料：6.1. 被验证产品：营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基6.2. 仪器设备：6.2.1. SYQ-DSX-280B型手提式压力蒸汽灭菌器6.2.2. SW-CJ-2A双人净化工作台 6.2.3. XSW-CJ-1A单人净化操作台 6.2.4. HZMJ型霉菌培养箱 (2328)6.2.5. JC303-4电热恒温培养箱 (3035)6.2.6.不锈钢远红外烘箱6.2.7 101-2A电热鼓风干燥箱6.2.8微波炉6.3. 验证用培养基 名称生产厂家批号营养琼脂培养基营养肉汤培养基玫瑰红钠琼脂培养基改良马丁培养基改良马丁琼脂培养基营养琼脂对照培养基玫瑰红钠琼脂对照培养基酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基6.4. 验证用菌株：(第 代)验证菌株培养基培养温度培养时间（小时）大肠埃希菌营养肉汤30351824金黄色葡萄球菌营养肉汤30351824枯草芽孢杆菌营养肉汤30351824白色念珠菌改良马丁培养基23282448黑曲霉菌改良马丁琼脂培养基232857（天）7. 菌液制备 7.1. 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、与枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于3035培养1824小时。取经3035培养1824小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、与枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-610-7约为50100cfuml的菌悬液备用。7.2.接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，于2328培养2448小时。取经2328培养2448小时的白色念珠菌改良马丁液体培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-5约为50100cfuml的菌悬液备用。7.3.接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于2328培养57天，加入35ml含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50100cfuml的菌悬液备用。8.菌液计数：（每种菌液接种2个平皿）大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌分别取1ml接种至营养琼脂培养基中，置3035培养48小时；白色念珠菌、黑曲霉分别取1ml接种至玫瑰红钠琼脂培养基，置2328培养72小时。菌落计数结果（2个平皿计数取平均值）见下表菌落计数结果（cfuml）试验次数10-5稀释10-6稀释10-7稀释123123123大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉9.适用性检查： 9.1.取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液（50100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置3035培养48小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉菌的菌液（50100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置2328培养72小时，计数。9.2取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液（50100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置3035培养48小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉菌的菌液（50100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置2328培养72小时，计数。 9.3. 结果见附表10. 结论：附表1：计数培养基适用性检查验证记录试验时间 年 月 日 完成时间 年 月 日验证菌株平皿号供试品组c