执业药师考试培训《药分》课件

2019/5/14,第一章,第一节 国家药品标准 第二节 中国药典 第三节 主要外国药典,药 典,2019/5/14,第一章 药 典,国家药品标准是国家为保证药品质量所制定的关于药品的规格、检验方法以及生产工艺的技术要求，是 药品生产、经营、使用、检验和监督管理部门共同遵循的法定依据。,一、国家标准的组成与效力 1、组成：中华人民共和国药典 药品标准 药品注册标准 2、效力：国家标准具有“法律效力”,第一节 国家药品标准,2019/5/14,二、药品的质量和质量标准, 二、药品质量标准的制定原则 1、检验项目的制定要有针对性； 2、检验方法的选择要有科学性； 3、标准限度的规定要有合理性；,2019/5/14,第二节 中国药典,一、中国药典的沿革 中华人民共和国药典简称中国药典，缩写为Ch.P；为国家药品质量标准，具有法律效力。 中国药典从建国以来已经出版了九版（1953、1963、1977、1985、1990、1995、2000、2005、2010年版）,二、中国药典基本结构和主要内容 药典组成：一部、二部、三部、增补本 药典内容：凡例 、品名目次 、正文、附录 、索引 。,2019/5/14,（一）凡例：是制定和执行药典必须了解和遵循的规则 （二） 正文：收载药品或制剂的质量标准 (1、名称；2、性状；3、鉴别；4、检查；5、含量测定；6、类别；7、贮藏） 6（三）附录：记载药品制剂通则、生物制品通则、一般杂质检查方法、一般鉴别方法、有关物理常数测定方法、试剂配制及色谱法、光谱法等内容。 、类别,（四）索引： 采用中文、英文收载药品名称，以便查阅。,2019/5/14,三、中国药典中常用专业术语,1、温度：常温（1030）；试验温度（252）； 2、贮藏方法：避光、密闭、密封、熔封或严封、阴凉处、凉暗处、冷处 3、固体或液体取量方法：称定（1/100）；精密称定（1/1000）；如：称取0.1g0.06g0.14g;称取2g1.5g2.5g；称取2.0g1.952.05；称取2.00g1.9952.005g 精密量取（符合国家标准中对该仪器的精密度要求）如移液管；滴定管；容量瓶） 约：不超过规定量的10,2019/5/14,三、中国药典中常用专业术语,5、恒重：实验条件下两次称重的差异小于0.3mg； 6、按干燥品计算； 7、空白试验：不加供试品或以等量溶剂代替供试品代替供试品进行的试验 8、原料药含量百分数(未规定上限：不超过101.0%） 9、制剂药含量百分数（标示量的百分比） 10、试验用水；（除另有规定，均指纯化水） 11、乙醇；（未标明浓度时，均为95%）,2019/5/14,第三节 主要的国外药典,（一）美国药典(The Pharmacopoeia of the United States of America） 简称USP。 （二）英国药典(Beitish Pharmacopeia) 简称BP （三）日本药局方 简称JP （四）欧洲药典 （European Pharmacopoeia） 简称Ph. Eur或E.P.）,2019/5/14,第二章, 第一节 药品检验工作的相关基础 第二节 药物分析数据处理 第三节 药品质量标准分析方法的验证,药物分析基础,2019/5/14,第一节 药品检验工作的相关基础,一、药品检验工作的基本程序,取 样分析检验记 录检验报告,（一）取样：科学性、真实性和代表性 当x3时，每件取样； 当3x300时， 按随机取样； 当x300时， 按随机取样。 一次取样量最少可供三次检验用量，同时还应保证留样观察的用量。,2019/5/14,第一节 药品检验工作的相关基础,1、鉴别 ：药品性状的观测及物理常数的测定，其次是依据药物的结构特征、理化性质采用灵敏度高、专属性强的反应对药品的真伪进行判断。,2、检查： 检查包括纯度检查和其他项目的检查，主要是按药品质量标准规定的项目进行“限度检查”。,3、含量测定： 药品的含量测定是指对药品中有效成分的含量进行测定，包括理化方法和生物学检测方法。,（二）分析检验：,2019/5/14,第一节 药品检验工作的相关基础,（三）检验记录及检验报告,1检验记录 ：必须做到真实、完整、清晰。,2检验报告,检验报告单主要内容包括物料名称、规格、流水号或批号、数量、生产单位、取样日期、检验日期、检验依据、检验结果、检验人、复核人、质检部经理签字等。,第一节 药品检验工作的相关基础,二、中国药品检验标准操作规范 1、简述：本法的定义、分类、适用范围 2、仪器与用具：本法所用仪器及用具的性能 3、试药与试液：本法使用的试药与试剂及其配制方法等 4、操作方法：本法的操作 步骤 5、注意事项：本法操作中的一些测定条件 6、记录与计算：本法的原始数据及计算公式 7、结果判断：依据质量标准规定对试验结果作出符合或不符合质量标准的判定。,2019/5/14,第一节 药品检验工作的相关基础,三、常用计量器的使用和校正 1、分析天平： （1）感量： 0.1mg； 0.01mg； 0.001mg （2）适用范围：100mg；10010mg；10mg （3）称量方法：减量法与增量法 （4）校正：按计量部门定期检定，专人保管维护 2、分析仪器 （1）旋光仪：标准石英选光管校正 （2）pH计：标准缓冲液校正 （3）紫外可见分光光度计：10高氯酸4氧化钬校正 （4）红外分光光度计：聚苯乙烯薄膜（厚度约0.04mm）校正,2019/5/14,第一节 药品检验工作的相关基础,3、玻璃仪器 （1）容量瓶：重量法 允许误差符合要求 校正时标线一下不能挂水珠。 （2）移液管：重量法 允许误差符合要求 （3）滴定管：重量法 允许误差符合要求,2019/5/14,第二节 药物分析数据处理,一、误差 （一）绝对误差和相对误差 1、绝对误差 2、相对误差 （二）系统误差和偶然误差 1、系统误差（可定误差） 方法误差、试剂误差、仪器误差、操作误差 对照试验或空白试验，减小系统误差 2、偶然误差（不可定误差或随机误差） 增加平行试验次数，减小偶然误差,2019/5/14,第二节 药物分析数据处理,二、有效数字 （一）有效数字：实际能测量到的数字 在药品分析工作中，数字记录中最末一位为可疑值 零在19个数之前不作为有效数，在19个数中间或后为有效数字 （二）有效数字修约 1、四舍六入五成双 2、不得连续修约 3、运算过程中多保留一位有效数，计算结果后再按规则修约,2019/5/14,第二节 药物分析数据处理,（三）有效数字运算法则 1、加减法：以小数点后位数最少的数为准，修约其他数，再加或减 2、乘除法：以有效数字位次最少的数为准，修约其他数，再乘或除 0.5362 10.0051 0.0014 1.97 4.2518 0.25 0.0003 4.25 0.79 0.12 9.678234,2019/5/14,11.98,0.00,0.129.7=1.2,2019/5/14,第三节 药品质量标准分析方法验证,一、准确度 准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，准确度应在规定的范围内测试。准确度也就是表示分析方法测量的正确性。由于真实值无法准确知道，一般采用回收率（）来表示。,二、精密度 精密度系指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。精密度也就是表示测量的重现性。 精密度一般用：偏差、标准偏差或相对标准偏差表示,2019/5/14,第四节 药品质量标准分析方法验证,三、专属性 专属性是指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的方法能正确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检查、含量测定方法均应考察其专属性。 如方法不够专属，应采用多个方法予以补充。,四、检测限 检测限是指试样中被测物能被检测出的最低量。是用来表示测定方法在新要求的条件下，对试样中供试物的最低检出浓度。药品的鉴别试验和杂质检查方法，均应通过测试确定方法的检测限。 常用方法：非仪器分析目视法；信噪比法；,2019/5/14,第四节 药品质量标准分析方法验证,五、定量限 定量限是指试样中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应具有一定准确度和精密度。杂质和降解产物用定量测定方法研究时，应确定方法的定量限。 定量限常用信噪比法来确定。 六、线性 线性是指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。也就是说供试物浓度的变化与试验结果呈线性关系。线性关系的测定应在规定的范围内测定。,2019/5/14,第四节 药品质量标准分析方法验证,七、范围 范围是指能达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。 八、耐用性 耐用性是指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为把方法用于常规检验提供依据。,2019/5/14,第四节 药品质量标准分析方法验证,九、不同检验项目的验证内容,2019/5/14,第三章,第一节熔点测定法,第二节旋光度测定法,物理常数测定法,第三节pH值测定法,2019/5/14,第一节 熔点测定法,一、基本概念 1、熔点：实验条件下固体药物由初熔到全熔时的温度变化。 2、初熔：固体开始液化的温度 3、全熔：固体全部液化的温度 4、熔融同时分解：药物开始液化同时发生分解的温度,2019/5/14,第一节 熔点测定法,二、测定方法 1、测定法：第一法（适用易碎药品） 第二法（适用不易粉碎药品） 第三法（适用凡士林及类似药品）,2、仪器用具： （1）容器（b形管、烧杯等） （2）搅拌器（磁力搅拌器） （3）温度计（分浸型、分刻度0.5） （4）毛细管（中性硬质玻璃、大小符合规定） （5）传温液（常用有水、硅油）,2019/5/14,第二节 旋光度测定法,一、基本原理 1测定原理 比旋度为旋光物质的特性常数。因此，测定物质的比旋度可以鉴别或检查某些药品的纯杂程度，亦可用以测定某些药物的含量。 2影响旋光度测定的因素： （1）药物的化学结构 ：具有手性碳原子，结构不对称 （2）溶液的浓度 （3）溶剂 （水；醇，其他有机溶剂） （4）光线通过液层的厚度： 药典规定1cm （5）光的波长 ：药典规定钠光D线，589.3nm （6）温度 ：药典规定20,2019/5/14,二、测定方法,1、仪器：自动旋光仪 2、测定方法：将供试品配制溶液置旋光仪内检测读数 3、注意事项： （1）用空白溶剂校正仪器 （2）测定温度控制在200.5 （3）测定液应澄清 （4）表示旋光度应注明测定波长、溶剂、温度,2019/5/14,第三节 pH值测定法,1、电极：指示电极（玻璃电极） 电位随溶液离子浓度变化而变化 参比电极（饱和甘汞电极）（SCE） 电位不随溶液离子浓度变化而变化 2、原理：玻璃电极与饱和甘汞电极组成原电池,一、基本原理,E-供试液电动势；Es-标准溶液电动势；k-与温度有关常数,2019/5/14,第三节 pH值测定法,二、测定方法：药典规定使用酸度计 1、pH-mv选择：选pH档 2、温度补偿：旋至测定溶液的温度 3、定位：用已知pH值标准溶液定位 4、测定：直接测定法,三、注意事项： 1、校正用标准缓冲液pH值约相差3个单位，且供试液的pH值应在两者之间 2、定位时用与供试液pH相近的缓冲液定位 3、测定pH值较高溶液时，最好采用锂玻璃电极 4、标准缓冲液配制最好用新沸后纯化水，且保存2-3月,（一）强酸强碱的相互滴定,强碱滴定强酸（NaOH滴定HCl),H3O+ + OH- 2H2O,第一节 酸碱滴定法,一、滴定曲线,第四章 滴定分析,H+ + OH- H2O,（一）强碱滴定强酸,NaOH（0.1000mol/L,V） 滴定 HCl（0.1000mol/L, 20.00ml）,1滴定过程中pH值的变化 2滴定曲线的形状 3滴定突跃与滴定突跃范围 4影响滴定突跃的因素和指示剂的选择,续强碱滴定强酸,1滴定过程中四个阶段溶液pH值的变化,（1）滴定开始前 （Vb = 0）：,（2）化学计量点前（Vb Va） SP前0.1% 时 ，加入NaOH 19.98mL,续前,（3）化学计量点时（Vb = Va）：溶液为中性,（4）化学计量点后（Vb Va ）：计量点 SP后0.1%， 加入NaOH 20.02mL,加入NaOH滴定液的体积与溶液酸度之间的变化情况： VNaOH (ml) 0.00 19.98 20.00 20.02 20.20 (-0.1%) SP (+0.1%) VNaOH (ml) 19.98 (ml) 0.04 (ml) 0.18 (ml) pH 1.00 4.30 (酸) 7.00(中) 9.70 (碱) 10.70 (-0.1%) SP (+0.1%) pH 3.30 5.40 1.00 从上数据所知，在计量点0.1%的范围内，由少量（1滴）碱滴定液的加入，引起溶液的酸度（pH）发生急剧的变化。此变化叫滴定突跃，滴定突跃所在的pH范围叫滴定突跃pH范围，简称滴定突跃范围。,续强碱滴定强酸,2滴定曲线的形状,滴定开始，强酸缓冲区，加入的氢氧化钠多，则pH改变微小 随滴定进行 ，HCl ，pH渐 SP前后0.1%， pH ， 溶液从酸中碱，发生质的飞跃。 pH=5.40 继续滴NaOH，强碱缓冲区，pH,续强碱滴定强酸,3滴定突跃与突跃范围,滴定突跃：化学计量点前后0.1%的范围内引起溶液pH值突然改变的现象 滴定突跃范围：滴定突跃所在的pH范围 滴定突跃范围的意义：滴定突跃范围是选择指示剂的依据,续强碱滴定强酸,4影响滴定突跃的因素和指示剂的选择,影响因素： 浓度C，pH，滴定突跃范围，可选指示剂越多 例：C10倍， pH2个单位 选择原则： 指示剂变色点的pH应处于滴定突跃范围内或者 指示剂变色范围部分或全部落在滴定突跃范围内,续强碱滴定强酸,讨论,甲基橙（3.14.4）pKIn =3.45 甲基红（4.46.2） pKIn = 5.1 酚酞（8.010.0） pKIn = 9.1,1.0 mol/L NaOH1.0 mol/L HCl pH=3.310.7 选择甲基橙，甲基红，酚酞 0.1mol/L NaOH0.1mol/L HCl pH=4.39.7 选择甲基红，酚酞，甲基橙（差） 0.01mol/L NaOH0.01mol/L HCl pH=5.38.7 选择甲基红，酚酞（差）,强酸滴定强碱,0.1000mol/L HCl标液 0.1000mol/L的 NaOH,滴定曲线形状类似强碱滴定强酸，pH变化相反 滴定突跃范围决定于酸标液浓度及被测碱浓度 指示剂的选择：甲基红，酚酞,（二）强碱滴定弱酸,NaOH（0.1000mol/L）HOAc（0.1000mol/L , 20.00mL）,1滴定过程中pH值的变化 2滴定曲线的形状 3影响滴定突跃的因素和指示剂的选择 4弱酸被准确滴定的判别式,滴定反应： OH- + HOA OA- + H2O,反应完全程度不高,续强碱滴定弱酸,1滴定过程中pH值的变化,（1）滴定开始前（Vb = 0 ）,（2）化学计量点前（Vb V）a ：HAc + NaAc 组成缓冲溶液，溶液pH应由缓冲公式计算。例如：在 SP前0.1% 时 ，已加入NaOH 19.98mL,2019/5/14,（3）化学计量点时（Vb = Va ）： HAc NaAc（ NaAc为一元弱碱）,续强碱滴定弱酸,续强碱滴定弱酸,（4）化学计量点后（Vb Va ）： NaOH + NaAc （此时酸碱性由过量NaOH 决定） SP后0.1% 时 ，已加入NaOH 20.02mL,续强碱滴定弱酸,2滴定曲线的形状,滴定前，曲线起点高 滴定开始， OAc- ，pH 随滴加NaOH，缓冲能力，pH微小 滴定近SP，HOAc，缓冲能力，pH SP前后0.1%，酸度急剧变化， pH =7.769.70 SP后，pH逐渐（与强碱滴强酸相同）,续强碱滴定弱酸,3影响滴定突跃的因素和指示剂的选择 影响因素：被滴定酸的性质和浓度 C一定， Ka，Kt，pH Ka一定，C，pH（滴定准确性越差） 指示剂的选择： pH =7.749.70，选碱性范围变色的酚酞，百里酚酞作为指示剂,4弱酸能被强碱准确滴定的判别式： Ca Ka 10-8,续强碱滴定弱酸,讨论,Ca Ka 10-8,Ka ，酸性，pH Ka10-9时无法准确滴定 C ，pH，滴定准确性差,（三）强酸滴定弱碱,HCL（0.1000mol/L）NH3H2O（0.1000mol/L,20.00mL）,1. 滴定曲线： 与强碱滴定强酸类似，曲线变化相反 2. 影响滴定突跃的因素和指示剂的选择： （1）影响因素：被滴定碱的性质，浓度 （2）指示剂选择：pH =6.344.30， 选甲基橙，甲基红 3弱碱能被准确滴定的判别式： Cb Kb 10-8,H3O+ + A- HA + H2O,反应完全程度不高,续强酸滴定弱碱,讨论,pH =6.344.30 选甲基橙，甲基红,二、酸碱指示剂,酸碱指示剂的变色原理 酸碱指示剂的变色范围 影响酸碱指示剂变色范围的因素 关于混合指示剂,（一）酸碱指示剂的变色原理,1. 指示剂的特点 a弱的有机酸碱 b酸式体和碱式体颜色明显不同可以相互转变 c溶液pH变化指示剂结构改变指示剂颜色变化指示终点,2. 常用酸碱指示剂的变色原理,见插图,（二）酸碱指示剂的变色范围,讨论：Kin一定，H+决定比值大小，影响溶液颜色,HIn H + + In -,酸式体,碱式体,（续前）,指示剂理论变色范围 pH = p Kin 1 指示剂理论变色点 pH = p Kin ，In- =HIn,注： 实际与理论的变色范围有差别，深色比浅色灵敏 指示剂的变色范围越窄，指示变色越敏锐,例： pKa 理论范围 实际范围 甲基橙 3.4 2.44.4 3.14.4 甲基红 5.1 4.16.1 4.46.2 酚酞 9.1 8.110.1 8.010.0 百里酚酞 10.0 9.011.0 9.410.6,（三）影响酸碱指示剂变色范围的因素,1指示剂的用量 2温度的影响 3溶剂的影响 4滴定次序,1指示剂的用量 尽量少加，否则终点不敏锐 指示剂本身为弱酸碱，多加增大滴定误差,2温度的影响 T Kin 变色范围 ！注意：如加热后的溶液，须冷却后滴定或再加指示剂 例：甲基橙 180C 3.14.4 1000C 2.53.7 灵敏度,3溶剂的影响 极性介电常数Kin 变色范围 4滴定次序 无色有色，浅色深色,三、酸碱滴定液的配制与标定,1盐酸标准溶液（浓度0.01mol/L1mol/L）,配制方法：间接法（HCl易挥发，） 标定方法： 基准物： 无水碳酸钠 易吸湿，3000C干燥1小时，干燥器中冷却 1:2反应 *pH 3.9 指示剂：甲基橙，甲基红,三、酸碱溶液的配制与标定,配制方法：间接法（H2SO4易吸湿） 标定方法 基准物： 无水碳酸钠 易吸湿，3000C干燥1小时，干燥器中冷却 1:2反应 *pH 3.9 指示剂：甲基橙，甲基红,2硫酸标准溶液,续酸碱溶液的配制与标定,3碱标准溶液NaOH,配制方法：间接法(提前配制成饱和NaOH溶液，再用新鲜纯化水稀释）（因为NaOH易吸收水和CO2） 标定方法 基准物 邻苯二甲酸氢钾 纯净，易保存，质量大 1:1反应 * pH 5.4 指示剂：酚酞,第一节 酸碱滴定法,2019/5/14,（四）应用 1、直接滴定法： 酸性药物可用强碱直接滴定必备条件： CKa10-8 例：阿司匹林原料含量测定 碱性药物可用强酸直接滴定必备条件： CKb10-8 2、间接定法： 当药物不满足上述条件或难溶于水的药物可采用间接滴定法。 例：磷酸可待因糖浆剂含量测定,第二节 非水酸碱滴定法,非水滴定法：在非水溶液中进行的滴定分析法 非水酸碱滴定法：在非水溶液中进行的酸碱滴定法 两种酸碱滴定法对比 1以水为溶剂的酸碱滴定法的特点： 优点：易得，易纯化，价廉，安全 缺点：当酸碱太弱，无法准确滴定 有机酸、碱溶解度小，无法滴定 强度接近的多元或混合酸碱无法分步或分别滴定 2非水酸碱滴定法的特点 非水溶剂为滴定介质增大有机物溶解度；改变物质酸碱性；扩大酸碱滴定范围,一、 非水碱量法,1.溶剂：冰醋酸、醋酐、冰醋酸-醋酐,为消除溶剂中少量水分的干扰，常加入定量醋酐,2.高氯酸滴定液（0.1mol/L）配制与标定 （1）配制：间接法 市售HClO4平均含量71.0%；相对密度1.75；取8.5ml间接法配制,需加入醋酐除水干扰，计算体积为,3.常用指示剂：结晶紫、,4、应用,（1）有机弱碱：胺类、生物碱类,（2）有机碱的氢卤酸盐：加入醋酸汞消除滴定过程中生成的HX的干扰。,（3）有机碱的硫酸盐：硫酸的酸性仅次于高氯酸，故用高氯酸滴定硫酸盐时，只能滴定成酸式硫酸盐。如：硫酸阿托品的含量测定,（4）有机碱的有机酸盐：马来酸氯苯那敏,本类药物碱性较弱，可采用冰醋酸-醋酐混合溶剂,（5）有机酸的碱金属盐：枸橼酸钾含量测定 有机酸酸性较弱，可采用冰醋酸作溶剂直接滴定,二、非水酸量法 1、溶剂：乙二胺、二甲基甲酰胺（DMF） 甲醇-苯、甲醇 丙酮,2、甲醇钠定液的制备与标定 （1）制备：间接法 （2）标定：苯甲酸为基准物,3、常用指示剂： 麝香草酚蓝；偶氮紫；溴酚蓝,一、碘量法,利用I2的氧化性和I-的还原性建立的滴定分析方法,注：pH 9 时，不受酸度影响，应用范围更为广泛,电对反应 I2 + 2e 2I-,I2 + I- I3- （助溶）,I3- + 2e 3I-,第三节 氧化还原滴定法的应用,（一）直接碘量法: 利用I2的氧化性质滴定还原物质,测定物：具有还原性物质,可测：S2-，Sn2+，S2O32-，SO32- 酸度要求：弱酸性，中性，或弱碱性(pH小于9) 强酸性介质：I-发生氧化导致终点拖后； 淀粉水解成糊精导致终点不敏锐 强碱性介质：I2发生歧化反应,3I2 + 6OH- 5I- + IO3- + 3H2O（歧化反应）,4I-+O2 + 4H+ 2I2 + 2H2O（氧化反应）,（二）间接碘量法： 利用I-的中等强度还原性滴定氧化性物质,测定物：具有氧化性物质,可测：MnO4-，Cr2O7-，CrO4-，AsO43-，BrO3-， IO3-，H2O2，ClO-，Cu2+ 酸度要求：中性或弱酸性 强酸性介质：S2O32-发生分解导致终点提前； I-发生氧化导致终点拖后 碱性介质： I-与S2O32-发生副反应，无计量关系,S2O32- + 2H+ SO2 + S+ H2O（分解）,4 I2 + S2O32- + 10 OH- 8I- + 2SO42-+5H2O,续前,1碘标准溶液(0.05mol/L),（1）配制: 避光，防止I-I2;加盐酸，除去碘酸盐干扰和防止碘在碱性下发生歧化反应 （2）标定： As2O3基准物质标定法 NaS2O3标准溶液比较法,As2O3 + 6OH - 2AsO33- + 3H2O AsO33- + I2 + 2H2O H3AsO4 + 2 I - + H+,2NaS2O3 滴定液配制与标定,（1）配制：新沸冷后的纯化水作溶剂；放置一月后再标定；加少量碳酸钠； 不稳定原因 a水中溶解的CO2易使NaS2O3分解 S2O32- + CO2 + H2O HSO3- + HCO3-+ S b空气氧化：2S2O32-+ O2 SO42- + S c水中微生物作用： S2O32- Na2SO3 + S 配制方法：煮沸冷却水，加入NaCO3使 pH=910， 放置78天，过滤,（2）标定,续前,Cr2O72-+ 6I- （过量）+ 14H+ 2Cr3+ 3I2 + 7H2O（酸度高） I2 + 2S2O32- 2I-+ S4O62- （加水稀释弱酸性）,I2 + 2S2O32- 2I-+ S4O62- （加水稀释弱酸性）,K2CrO7基准物标定法 I2标液比较法,（三）应用与示例,1直接碘量法： 指示剂加入时间：滴定前加入 终点：无色深蓝色 例：Vc的测定,2间接碘量法 指示剂加入时间：近终点加入 终点：深蓝色消失 1）剩余碘量法(返滴定法) 例：葡萄糖的测定 2）置换碘量法 例：CuSO4的含量测定,二、铈量法：利用Ce4+的强氧化性测定还原性物质 （一）滴定方法 （二）硫酸铈滴定液（0.1mol/L）配制与标定 1.配制：间接法 2.标定：,As2O3 + 6OH - 2AsO33- + 3H2O AsO33- + 2Ce4+ + H2O H3AsO4 + 2Ce3+ + 2H+,（mol/L）,2019/5/14,三、氧化还原滴定法,（三）铈量法：,常用操作方法：剩余滴定法 1.滴定液： 硫酸铈滴定液； 2.测定条件：酸性下（稀盐酸）；新沸过的冷水 3.指示剂： 邻二氮菲指示液 4.终点颜色：显淡蓝色 （四）应用：硫酸亚铁片含量测定,2019/5/14,三、亚硝酸钠滴定法：,1、测定原理：,2019/5/14,三、亚硝酸钠滴定法：,2、测定操作条件： （1）加入过量的盐酸：可加快反应的速度；形成稳定的偶氮氨基化合物。 （2）在室温条件（1030）下滴定：温度太高，可使亚硝酸逸失；温度过低，反应的速度太慢。 （3）加入溴化钾：作为催化剂以加快滴定反应的速度。 （4）滴定的方式： 快速滴定法。 （5）指示终点的方法：永停滴定法指示终点,2019/5/14,三、亚硝酸钠滴定法：,3、亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）的配置与标定 （1）配制：间接法 （2）标定：对氨基苯磺酸为基准物质,4、应用 亚硝酸钠滴定法，主要用来测定具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基有机药物含量。,（mol/L）,2019/5/14,第一节 紫外-可见分光光度法,一、基本原理： 朗伯-比尔定律 ：,二、紫外-可见分光光度计基本结构： 有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环等发色基团，均可在紫外区（200400nm）或可见光区（400760nm）产生吸收。很多药物在可见光区本身并没有吸收，但在一定条件下加入显色试剂或经过处理显色后，能对可见光产生吸收。,第五章 分光度法,二、紫外-可见分光光度计基本结构：,1、光源： 氘灯（紫外光区） 钨灯（可见光区） 2、单色器：光栅 3、吸收池：石英比色皿（紫外光区） 玻璃吸收池（可见光区） 4、检测器：光电倍增管检测器 硅光二极管阵列检测器,2019/5/14,三、测定方法,1、对溶剂的要求： =220-240nm；A0.40 =241-250nm； A0.20 =251-300nm； A0.10 300nm； A0.05,2019/5/14,2、空白对照校正：常用空白溶剂校正仪器 紫外光区：误差1nm 可见光区：误差2nm,三、测定方法,4、供试品溶液浓度 浓度大小应满足：A=0.3-0.7 5、仪器狭缝宽度选择： 狭缝宽度吸收带半高宽度的1/10 四、应用 （一）在鉴别中的应用 1、吸收光谱的特征参数 2、比较吸光度比值 3、比较吸收光谱 （二）在杂质检查中的应用：药物与杂质的吸收光谱的差异进行检查,2019/5/14,2019/5/14,（三）含量测定常用测定方法 1对照品比较法 ： 2吸收系数法 ： 3计算分光光度法 ：（本法不宜做含量测定） 4比色法 ：,2019/5/14,（四）操作注意事项 1波长 ：测定前校正测定波长 。 2吸光度的准确度 ：吸收系数合符规定。 3杂散光的检查 ：应合符规定。 4溶剂的选择：应合符测定要求。,第二节 红外分光光度法,一、基本原理 （一）红外光谱的产生 分子的振动、转动能级跃迁引起的光谱 红外吸收光谱以透光率为纵坐标，波数为横坐标 图形与 紫外图谱相反 （二）红外吸收光谱与物质结构的关系 特征谱区：特征峰（由分子中主要官能团产生） 指纹谱区：（由分子的伸缩振动、弯曲振动产生）,2019/5/14,第二节 红外分光光度法,二、红外分光度计的基本结构 1、光源：能斯特灯、硅碳棒 2、吸收池：固体供试品采用红外透明KBr压片制备 3、单色器：傅里叶变换型红外分光光度计采用迈克尔逊干涉仪 光栅型红外分光光度计采用光栅 4、检测器：真空热电偶、高莱池等,2019/5/14,三、测定方法与注意事项,（一）测定方法 气体药物：装入已抽真空的封闭式吸收池中测定 非挥发性液体药物：置两块盐片之间，并压紧，形成薄层液膜进行测定 固体药物：通常采用压片法进行测定 （二）注意事项 1、仪器校正：聚苯乙烯薄膜（厚度0.04mm) 分辨率2cm-1 2、原料药物鉴别： 3、制剂药物的鉴别： 4、多组分药物鉴别： 5、晶型、异构体限度检查或含量测定：,2019/5/14,第六章 色谱法,第一节 色谱基础 一、常用术语 1、色谱图和色谱峰 （1）峰高或峰面积：用于定量 （2）峰位或保留值：用于定性 （3）峰宽：用于衡量柱效 2、基线 反映色谱系统（检测器）的噪音水平 ，基线为一条平行直线,2019/5/14,第一节 色谱法基础,3、保留值 （1）保留时间：组分进样开始到色谱峰最高点所需要的时间 （2）死时间：不被保留的组分的保留时间 （3）调整保留时间：保留时间与死时间差 （4）相对保留值：两组分保留时间的比值 4、色谱峰区域宽度： 色谱柱的柱效参数，宽度越小，流出组分越集中，越有利于组分之间的分离 标准差（）；半高峰宽（Wh/2)；峰宽（W）,2019/5/14,第一节 色谱法基础,二、基本理论 1、分配系数与色谱分离,2019/5/14,2、塔板理论 色谱柱塔板数大于103，流出曲线趋于正态分布曲线,n越大，柱效越高 L长度相同，H越小， n越大，柱效越高,第一节 色谱法基础,3、速率理论 速率理论说明了导致色谱峰扩张而减低柱效的因素 三、分类 1、按分离原理分类： 2、按分离方式分类：,2019/5/14,吸附色谱法 分配色谱法 离子交换色谱法 分子排阻色潽法,平面色谱 柱色谱 电泳法,第二节 薄层色谱法,薄层色谱法属于平面色谱法一种， 按分离原理分为：,2019/5/14,吸附色谱法 分配色谱法 分子排阻色潽法,一、仪器与材料 1、常用固定相：硅胶、硅藻土、氧化铝、微晶纤维 2、薄层板： （1）自制薄层板；（2）市售薄层板 3、点样器：常用微量注射器或定量毛细管 4、展开容器：玻璃材质层析缸 5、显色剂：采用喷雾显色；浸渍显色；蒸熏显色 6、显色装置： 7、检视装置：,第二节 薄层色谱法,二、操作方法 1、薄层板的制备： 2、点样与展开： 3、检视： 三、色谱系统适用性试验 1、检测灵敏度： 2、比移值： 3、分离效能：,2019/5/14,Rf= 0.2-0.8；最佳0.3-0.5,第二节 薄层色谱法,四、测定法与应用 （一）药物的鉴别： 1、与对照品比较Rf值 2、与结构相似的物质比较Rf值 （二）药物杂质检查： 1、与标准对照试验比较（对照法） 2、自身稀释对照法 3、其他方法,2019/5/14,2019/5/14,一、仪器的基本结构： 高效液相色谱法是采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱分析方法。药物分析 中最常用的是反相分配色谱法,第三节 高效液相色谱法,1.高压输液泵：输送流动相 2色谱柱 ：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶（ODS） 3. 进样阀：六通进样阀 4检测器 ：紫外检测器（常用）,第三节 高效液相色谱法,二、检测器 （一）选择性检测器,2019/5/14,紫外检测器 光电二极管阵列检测器 荧光检测器 电化学检测器 质谱检测器,（二）通用型检测器,蒸发光散射检测器 示差择光检测器,三、固定相与流动相 （一）固定相 （二）流动相：有机相5% 采用紫外检测器时，首选乙腈-水,非极性键合相 极性键合相,2019/5/14,第三节 高效液相色谱法,四、高效液相色谱系统适用性试验 ：,1色谱柱的理论板数（n） ：,2分离度（R）：,定量分析时分离度（R）一般应大于1.5,3重复性 ：相对标准偏差应不大于2.0%。,4拖尾因子（T）：,T应在0.951.05之间,2019/5/14,第三节 高效液相色谱法,五、测定方法 1内标法加校正因子测定法 ：,2外标法测定：,3加校正因子的主成分自身对照法：,4不加校正因子的主成分自身对照法：,5面积归一化法 ：,2019/5/14,第四节 气相色谱法,一、基本原理 气相色谱法系采用气体为流动相（载气）流经装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。,二、应用 （一）对仪器的一般要求 1载气源 ：氦、氮和氢可用作载气。常用载气为氮气。 2进样部分： 进样方式一般可采用溶液直接进样或顶空进样。 3色谱柱： 色谱柱为填充柱或毛细管柱。,2019/5/14,第四节 气相色谱法,二、应用 （一）对仪器的一般要求 4柱温箱 ：柱温箱控温精度应在l，且温度波动小于每小时0.1。温度控制系统分为恒温和程序升温两种。 5检测器： 火焰离子化检测器（FID）、热导检测器（TCD）、氮磷检测器（NPD）、火焰光度检测器（FPD）、电子捕获检测器（ECD）、质谱检测器（MS）等。 一般常用火焰离子化检测器，用氢气作为燃气，空气作为助燃气。在使用火焰离子化检测器时，检测器温度一般应高于柱温，以免水汽凝结，通常为250350。,2019/5/14,第四节 气相色谱法,二、应用 （二）系统适用性试验 除另有规定外，应照“高效液相色谱法”项下的规定。,三、测定方法： 1内标法加校正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量 2外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量 3面积归一化法 4标准溶液加入法测定供试品中某个杂质或主成分含量,2019/5/14,第五节 电泳法,一、基本原理 在相同的电场强度下，两组分分离程度取决于二者淌度之差 影响电泳分离的因素,溶液离子强度和pH 电场强度 样品溶液浓度,二、平板电泳法,纸电泳法 醋酸纤维素薄膜电泳法 凝胶电泳法,琼脂糖凝胶电泳法 聚丙烯酰胺凝胶电泳法 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法,第五节 电泳法,三、毛细管电泳法,2019/5/14,毛细管区带电泳（CZE） 毛细管凝胶电泳（CGE） 毛细管等速电泳（CITP） 毛细管等电聚焦电泳（CIEF） 胶束电动毛细管电泳（MEKC或MECC） 毛细管电色谱（CEC）,主要分离方法,四、应用 鉴别、分子量测定、纯度检查、等电点测定、 分子组分比测定,2019/5/14,第七章 体内药物分析,第一节 体内样品种类 第二节 体内样品处理 第三节 体内样品测定,2019/5/14,一、血样： 血样包括血浆、血清和全血，是体内药物分析中最常用的样品。 （1）血浆 ；（2）血清 ；（3）全血 二、唾液 唾液的pH约在6.90.5，个体差异较大，此外尚受到一些其他因素，如有无刺激、剌激类型、强度与持续时间，年龄、性别、疾病、药物等的影响。唾液中含有体液中的电解质，主要的有机成份是粘液质和淀粉酶。,第一节 常用样品的种类、采集和储蔵,返回,2019/5/14,第一节 常用样品的种类、采集和储蔵,三、尿液 测定尿药浓度主要用于药物的剂量回收、肾清除率和生物利用度的研究以及药物代谢类型的测定。体内兴奋剂检测的样品主要是尿液。 尿液的pH值=4.8-8.0,2019/5/14,一、去除蛋白质 在测定血浆、血清、全血和组织匀浆等样品中药物浓度时，首先的处理步骤是去除蛋白质。 1加入沉淀剂和变性试剂 通常除去蛋白质的方法是加入沉淀剂或变性试剂。其作用机理是使蛋白质形成不溶性盐而沉淀。 （1）加入中性盐 ; （2）加入酸 ; （3）加入金属离子 2加入可与水混溶的有机溶剂 甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、四氢呋喃 3酶消化法 在测定某些与蛋白质结合强，且对酸不稳定的药物，尤其是测定组织中的药物时，常采用酶消化法，此法不仅可使组织分解，还可使药物释放出来。,第二节 体内样品处理,2019/5/14,溶剂提取是体内药物分析中应用最多的分离和净化方法。提取的目的是要从大量共存物中分离出所需要的药物及其代谢物，并将溶剂蒸发，使样品得到浓集。 1、液-液提取法：选择适当的有机溶剂及溶液的PH值；提取1-2次； 2、液-固提取法：将具有吸附分配或离子交换性质的、表面积大的担体作为填充剂，装于小分离管中，使生物样品的干扰物或药物保留在担体上而进行分离的方法。也可认为固相分离法是微型柱色谱法。,第二节 体内样品处理,二、分离、纯化与浓集,第三节 体内样品测定,一、常用方法 1、免疫分析方法：荧光免疫法、酶免疫法等 2、色谱分析方法：GC、HPLC、GC-MC 二、定量分析方法验证 特异性、标准曲线与线性范围、定量下限 精密度与准确度、样品稳定性、提取回收率 指控样品、质量控制、测试结果 三、应用 1、治疗药物监测的对象 2、在药代动力学研究中的应用,2019/5/14,2019/5/14,第八章 药物的杂质检查,一、杂质来源与分类 二、杂质的限量检查与计算,第一节 杂质的限量检查,返回,2019/5/14,药物纯度的概念 药物的纯度是指药物的纯净程度。 临床用药的纯度又称药用纯度或药用规格，与化学试剂的纯度或试剂规格不能混淆。 药品只有合格品与不合格品， 化学试剂可根据杂质的含量高低分为不同级别（如色谱纯、基准试剂、优级纯、分析纯和化学纯等）。,第一节 杂质的限量检查,返回,2019/5/14,第一节 杂质的限量检查,返回,1生产过程引入 原料不纯、反应不完全、副反应的发生、加入的试剂和溶剂等,2贮存过程中引入 药物发生水解、氧化、分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解和发霉等变化而产生杂质。,一、杂质来源,2019/5/14,第一节 杂质的限量检查,返回,按来源分类 1一般杂质 ：指在自然界中分布比较广泛，在多种药物的生产和贮存过程中容易引入的杂质。 2特殊杂质： 特殊杂质是指药物在生产和贮存过程中，由于药物本身的性质、生产方法和工艺的不同，可能引入的杂质。,二、杂质的分类,2019/5/14,第一节 杂质的限量检查,二、杂质限量检查与计算 （一）对照法 指取一定量待检杂质的对照溶液与一定量供试品溶液在相同条件下加入一定的试剂处理后，比较反应结果，从而判断供试品中所含杂质是否超过限量。使用本法检查药物的杂质，须遵循平行原则。,2019/5/14,第一节 杂质的限量检查,对乙酰氨基酚中氯化物的检查 取本品2.0g，加水100ml,加热溶解后，冷却、滤过，取滤液25ml，依法检查，与标准氯化钠溶液5.0ml（每1ml相当于10g的 ）制成的对照液比较、浊度不得更大。计算氯化物的限量。 解：已知,案例分析,2019/5/14,第一节 杂质的限量检查,案例分析 葡萄糖中重金属的检查 方法：中国药典2010年版规定取葡萄糖4.0g，依法检查，重金属不得超过百万分之五，应取标准铅液多少毫升（每ml相当于10g的pb）? 解：已知：,2019/5/14,第一节 杂质的限量检查,溴化钠中的砷盐检查 中国药典2010年版规定氯化钠中的砷盐检查时，规定取标准砷溶液2.0ml（每1ml相当于1g的As）制备标准砷斑，要求含砷量不得超过0.0004%。应取供试品多少克? 解：已知,案例分析,2019/5/14,第一节 杂质的限量检查,（二）灵敏度法 灵敏度法是以在检测条件下反应的灵敏度来控制杂质限量的一种方法。一般来说，灵敏度法比对照法对杂质的要求更为严格。 特点：不需要对照品，检验结果用“有”或“无”判断。,（三）比较法 取一定量供试品依法检查，测得待检杂质的结果与质量标准规定的限量比较，然后作出判断。 特点：不需要对照品，但需要质量标准的数据。,2019/5/14,第八章,一、氯化物检查 二、硫酸盐检查 三、铁盐检查 四、重金属检查法 五、砷盐检查法 五、酸碱度检查 六、干燥失重测定法检查 七、炽灼残渣检查法 八、易碳化物检查 九、残留溶剂测定法 十、溶液颜色检查 十一、溶液澄清度检查,第二节 一般杂质检查,返回,2019/5/14,一、氯化物检查,（一）检查原理 利用氯化物在硝酸酸性条件下与硝酸银试液作用，生成氯化银白色浑浊，与一定量标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银浑浊比较，以判断供试品中的氯化物是否超过了限量。,杂质检查方法：对照法 试验分析方法：比浊法,2019/5/14,（二）操作方法 取规定量的供试品，加水使溶解成25ml（溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10ml，溶液如不澄清，应滤过，置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，摇匀，即得供试品溶液。 另取药品项下规定量的标准氯化钠溶液，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成40ml，摇匀，即得对照品溶液。于供试液与对照液中，分别加入硝酸银试液1.0ml，用水稀释使成50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比浊。,一、氯化物检查,2019/5/14,（三）注意事项,1检测中加入硝酸是为了去除 、 、 等杂质的干扰，同时还可以加速氯化银沉淀的生成并产生较好的乳浊液。 2、暗处放置5分钟，避免光线使氯化银分解。 3检查碘化物或溴化物中氯化物时，应采用适当的方法去除干扰后再检查。,一、氯化物检查,2019/5/14,（一）检查原理,杂质检查方法：对照法 试验分析方法：比浊法,二、硫酸盐检查,（二）操作方法 取规定量的供试