自身抗体的检测及应用

自身抗体的检测 及应用,谷俊莹,一、概述,自身免疫耐受。 自身免疫（autoimmunity） 自身抗体（autoantibody）或自身致敏淋巴细胞 自身免疫性疾病,二、自身抗体的检测 （一）抗核抗体 （antinuclear antibody，ANA）,泛指抗各种细胞核成分（DNA，RNA，蛋白质和酶）的抗体。,1、ANA的类型,（1）抗核蛋白抗体 （2）抗DNA抗体 抗双链DNA抗体（抗dsDNA） 抗单链DNA抗体（抗ssDNA）。 （3）抗ENA抗体 可提取性核抗原（extractable nuclear antigens，ENA）,2、ANA的检测方法 间接免疫荧光法,用小鼠肝切片或印片作为细胞核基质，还可用核质丰富的培养细胞如Hep-2，作为抗原。 用荧光显微镜观察ANA荧光着染强度和免疫荧光图形。 稀释待检血清可检测ANA效价。,3.常见的ANA图形及临床意义,均质型（homogeneous，H）,斑点型（speckled，S）,核膜型（membranous，M）,核仁型（nucheolar，N）,4.抗dsDNA的检测,常用间接免疫荧光法检测，常用的抗原基质是马疫锥虫或绿蝇短膜虫。,（二）抗ENA抗体谱,不同的自身免疫病可产生不同的抗ENA抗体。通过检测抗ENA抗体的类型及其组合，可综合诊断自身免疫病的类型。,1、检测方法,双向免疫扩散 对流免疫电泳 斑点酶免疫技术 免疫印迹技术,免疫印迹技术（最常用）,先将ENA混合抗原作凝胶电泳，分离开不同的区带，然后把这些区带转印到硝酸纤维膜上，加入待检血清，最后用酶标抗体使相应的抗原带显色,2、抗ENA抗体的主要类型及 临床意义,（1）抗Sm抗体 抗Sm是SLE的特异性标志之一,（2）抗核RNP抗体（抗nRNP抗体）又称抗U1RNP抗体。 抗U1RNP抗体是诊断混合性结缔组织病（ MCTD）的重要血清学依据，是MCTD的诊断标准之一。,（3）抗SSA/Ro和抗SSB/La 这两种抗体是干燥综合症（SS）患者最常见的两种自身抗体,（4）抗J0 -1抗体 最常见于多发性肌炎（PM）患者。,（5）抗Scl-70抗体 几乎仅出现在PSS（进行性系统性硬皮病）患者体内，是PSS的特征抗体,（三）类风湿因子 （rheumatoid factor，RF）,RF是以变性IgG为靶抗原的抗体，它能与人或动物的变性IgG结合，而不与正常IgG结合，RF主要出现在类风湿关节炎患者。,RF的检测最常用IgG致敏的胶乳颗粒凝集试验，或速度散射比浊法，但只能检测IgM类的RF。IgG类，IgA类和IgE类RF需ELISA等方法检测。,（四）其他自身抗体 1.抗中性粒细胞胞质抗体 （anineutrophil cytoplasmic antibodies，ANCA）,以人中性粒细胞胞质为靶抗原，与临床多种小血管炎性疾病有关。分胞质型（cANCA）和核周型（pANCA）。可用ELISA或间接免疫荧光法测定。,2.抗心磷脂抗体（anti-phospholipid antibody，APLA）,靶抗原是血浆中的磷脂结合蛋白。APLA包括一组自身抗体，如抗心磷脂抗体（ACLA），抗磷脂酸抗体（APAA）和抗磷脂酰丝氨酸抗体等。,3.抗平滑肌抗体（anti-smooth muscle antibody，ASMA）,是自身免疫性肝炎的血清学标志性抗体。常用间接免疫荧光分析检测。,4.抗角蛋白抗体（anti-keratin antibody，AKA）,主要见于类风湿性关节炎患者，对于早期诊断RA有重要意义。可用间接免疫荧光法检测。但敏感性较低。与RF不平行。,5.抗乙酰胆碱受体抗体,是重症肌无力的标志性自身抗体，对重症肌无力的诊断有特异性。可用ELISA检测。,6