Survivin、Livin在脑胶质瘤组织中的表达及意义.doc

Survivin、Livin在脑胶质瘤组织中的表达及意义【摘要】 目的：探讨Survivin、Livin在人脑胶质瘤组织中的表达及临床意义。方法：收集52例人脑胶质瘤组织标本，另取30例正常脑组织为对照组。应用免疫组织化学方法分别检测52例脑胶质瘤组织和30例正常脑组织中的Survivin、Livin蛋白的表达，并测定52例不同病理分级的脑胶质瘤组织中Survivin、Livin蛋白表达。利用HPIAS-2000图像分析系统测定Survivin、Livin在各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。 结果：Survivin、Livin在30例正常脑组织中均不表达，而在52例脑胶质瘤组织中呈高阳性表达，两者之间差异均具有显著性（P<0.01）。图像分析结果显示，脑胶质瘤组织Survivin、Livin蛋白表达的平均光密度和平均阳性面积率均明显高于正常脑组织，脑胶质瘤组织与正常脑组织之间平均光密度和平均阳性面积率的差异有显著性（P<0.01）。级脑胶质瘤中Survivin、Livin蛋白表达的平均光密度和平均阳性面积率均显著高于级脑胶质瘤，级脑胶质瘤与级脑胶质瘤之间平均光密度和平均阳性面积率的差异亦具有显著性（P<0.05）。结论：Survivin、Livin的表达上调在人脑胶质瘤的发生、发展中起重要作用，并且其表达强度与脑胶质瘤的恶性程度呈明显正相关。Survivin、Livin基因可能成为脑胶质瘤基因治疗的有效靶点。 【关键词】 Survivin； Livin； 脑胶质瘤； 免疫组化Abstract Objective： To explore the expression of Survivin、Livin in human gliomas and its implication. Methods： Fifty-two samples of gliomas were divided into four groups by WHO standard and thirty normal brain samples were seemed as control group. All the samples were stained with SP immunohistochemistry to observe the expression of Survivin, Livin and the gliomas malignancy. Image analysis system was applied to measure the expression level of Survivin, Livin at different stage of gliomas and in normal brain tissues. Results： No positive staining was found in normal brain samples, while the expression rate in gliomas was very high. The image analysis indicated that the average optical density of Survivin, Livin protein positive immunostaining in gliomas was significantly higher than in normal brain tissues, and the positive area rate of Survivin, Livin protein positive immunostaining in gliomas was obviously higher than in normal brain tissues. Furthermore, compared with that in degree of gliomas, the average optical density of Survivin, Livin protein positive immunostaining in degree of gliomas increased markedly, and the positive area rate of Survivin, Livin protein positive immunostaining in degree of gliomas increased remarkably. Conclusions： Survivin, Livin play an important role in the development of gliomas. The Survivin, Livin protein expression level increased with the degree of malignancy. Survivin and Livin were supposed to be the new targets for gene therapy of gliomas. Key words Survivin； Livin； gliomas； immunohistochemistry 脑胶质瘤是最常见的颅内肿瘤，其发生、发展是一个多步骤、多因素参与的过程，除了原癌基因的激活，抑癌基因的失活外，某些凋亡调控基因的异常表达也促使细胞恶性转化1。Survivin、Livin是新近发现的凋亡抑制基因，其表达产物具有独特的结构，能够保持特定的细胞抵抗一系列刺激原诱导，抑制细胞凋亡2,3。本研究采用免疫组织化学链霉素亲和素-过氧化物酶-生物素（streptavdin-peroxidase-biotin，SP）法，检测Survivin、Livin在人脑胶质瘤组织中的表达，探讨其与肿瘤发生、发展及病理学分级之间的关系，为脑胶质瘤的基因治疗提供新的理论依据。1 材料与方法1.1 材料来源及分组 选择我院1998年1月2006年12月间手术切除后经病理证实的人脑胶质瘤组织标本52例，其中男32例，女20例，年龄1967岁，平均38.63.5岁。按WHO病理分级，级12例，级10例，级15例，级15例。另随机选取30例同期颅脑损伤患者手术获得的无神经系统肿瘤的正常脑组织标本作正常对照，对照组男18例，女12例，年龄1765岁，平均37.73.2岁。所有脑组织标本均以10福尔马林固定，常规石蜡包埋。1.2 方法1.2.1 主要试剂鼠抗人Survivin单克隆抗体购自北京中山生物技术有限公司，鼠抗人Livin单克隆抗体购自美国Imgenex公司，SP试剂盒购于北京中山生物技术有限公司，显色试盒及多聚赖氨酸购于北京中山生物技术有限公司。1.2.2 主要仪器YWY781型医用微波议（250W，50Hz），浙江临安电子器材厂生产；家用高压锅。1.2.3 HE染色常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片及HE染色。1.2.4 免疫组织化学SP法检测Survivin、Livin蛋白相关抗原主要步骤：5m组织切片常规脱蜡至水，3过氧化氢处理10min以抑制内源性过氧化物酶活性，Survivin、Livin分别采用高压抗原修复，正常羊血清处理10min以减少非特异性背景，一抗4孵育过夜，生物素标记的二抗处理10min，链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶复合物处理10min，DAB显色液显色，自来水冲洗终止反应，苏木精复染，脱水，透明，封片。用PBS代替一抗作为阴性对照组。1.2.5 免疫组织化学结果判断在组织切片中，细胞胞浆染为黄色至棕黄色为阳性细胞。阴性对照除细胞核染成蓝色外，胞浆内无棕黄色反应物。利用HPIAS-2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统（同济千屏影像公司）对表达进行定量分析，每张切片随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野（400），测定每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积，计算阳性面积率。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值（阳性面积率=单位面积中阳性反应的总面积/单位面积中细胞的总面积100%）。1.3 统计学分析 对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率作单因素方差分析和SNK-q检验，检验水准为0.05。2 结果2.1 Survivin、Livin在脑胶质瘤和正常脑组织中的表达 所有的胶质瘤显示了不同程度的Survivin、Livin蛋白表达，而在正常脑组织中Survivin、Livin表达均为阴性。图像分析结果显示，脑胶质瘤组织与正常脑组织之间Survivin蛋白表达的平均光密度分别为0.44780.0356、0.11350.0052，阳性面积率分别为0.52370.0402、0.16720.0082，脑胶质瘤组织与正常脑组织之间平均光密度及阳性面积率的差异有显著性（P参考文献】 1 邓艳春，王吉村，刘新平，等.基于PCR的消减杂交法克隆脑胶质瘤肿瘤相关基因和抑癌基因.癌症，2005，24（6）：680684.2 Jin Sung Jang, Kyung Mee Kim, Kyung Hee Kang, et al. 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