血管内皮生长因子在胃癌患者血清中的表达及意义.doc

血管内皮生长因子在胃癌患者血清中的表达及意义【摘要】 目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)在胃癌患者血清中的表达及其临床意义。方法 应用ELISA法对52例胃癌患者血清中的VEGF表达进行测定,并与30名健康人VEGF水平对照。结果 胃癌患者血清中VEGF水平明显高于正常人(P<0.01);术后VEGF水平明显低于术前(P<0.01);VEGF水平与胃癌肿瘤大小、浸润深度、淋巴结受累程度密切相关,随着临床病理分期的上升,VEGF水平亦明显升高。VEGF水平与组织学分化程度及患者的性别等因素无关。结论 血清VEGF水平与胃癌的浸润程度密切相关,术前检测血清VEGF水平对预测胃癌的侵袭和转移情况具有重要意义。 胡敏(1981),女,汉族,湖北籍,青海大学医学院2005级研究生 【关键词】 胃癌 血管内皮生长因子 酶联免疫吸附测定 Abstract Objective To determine the serum vascular endothelial growth factor (VEGF) level in patients with gastric carcinoma and to analyze its clinical significance. Methods The levels of serum VEGF were measured by enzyme-linked immunosorbent assay in 52 patients with gastric carcinoma and 30 normal persons as the control group. Results The level of serum VEGF in gastric carcinoma was significantly higher than that of normal control(P<0.01).The level of postoperative serum VEGF was significantly lower than preoperative one(P<0.01). The level of serum VEGF was positively correlated with size of tumor, depth of invasion, lymph-node metastasis. With up-grading of clinical pathological stage, the level of VEGF increased significantly, but its relation to histological type and sex was not significant . Conclusion The level of serum VEGF is closely correlated to invasion of gastric carcinoma. Serum VEGF assay may be used to preoperatively predict invasion and metastasis of gastric carcinoma. Key words Gastric cancer Vascular endothelial growth factor Enzyme-linked immunosorbent assay 新生血管的形成是由于促血管生成因子增多所致,在这些因素中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)作用最强1。研究表明,肿瘤细胞能合成并周期性分泌VEGF,所分泌VEGF与血管内皮细胞上的VEGF受体结合,促进肿瘤新生血管形成2。而VEGF能特异性促使内皮细胞增殖及直接参与血管增生,它与肿瘤的生长、浸润和转移有密切关系3。我们采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测了52例胃癌初治患者术前、术后和30例健康献血者VEGF的含量,来探讨VEGF与胃癌的关系。 1 材料与方法 1.1 临床资料 胃癌病例52例,男38例,女14例;年龄4178岁,中位年龄59岁。病例为2006年4月至2007年3月在青海大学附属医院肿瘤外科治疗的住院患者,诊断均经内镜或病理检查证实。组织学类型:高中分化腺癌18例,低分化腺癌34例。分期按TNM分期(术后临床病理分期),期2例、期10例、A期22例、B期6例、期12例。对照组选择同期正常健康人30名,均为正常体检者。 1.2 主要试剂 人血清VEGF定量试剂盒(购于美国TPI公司)。 1.3 方法 全部患者(52例)均在术前1天及术后1周晨起自肘静脉处抽取空腹外周血3 ml(收集血液的试管应为无热原和内毒素试管)于室温下静置1 h,离心(3000r/min)10 min,分离血清后,放置于冰箱（-80）中保存待查。严格按照试剂盒操作说明采用双抗夹心ELISA法定量测定胃癌患者血清中VEGF的水平。 1.4 结果判定 加入底物待酶解反应终止后，阳性孔颜色明显深于阴性对照者或与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。以P(patient)/N(negative)值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1者为阳性;P/N值小于2.1,但大于1.5者为可疑;P/N小于1.5者为阴性。最终反应板放在ELx800型酶标定量测定仪中于450nm波长处读取OD值。所测值按标准曲线换算成VEGF含量。 1.5 统计学处理 采用SPSS软件包进行统计分析,数据均以均数标准差表示,采用t检验。 2 结果 正常健康人血清VEGF测定值为(170.4215.37)pg/L,胃癌患者血清VEGF测定值为(559.0492.16)pg/L,明显高于正常人,差异有统计学意义(P<0.01)。术后血清VEGF测定值为(483.7983.07)pg/L,较术前明显降低(P<0.01),结果详见表1。 表1正常人和胃癌患者VEGF(pg/ml)的关系 例数VEGF(pg/ml)正常30170.4215.37胃癌患者术前52559.0492.16胃癌患者术后52483.7983.07注: 胃癌患者术前与正常人比较P0.01; 胃癌患者术前与术后比较P0.01. VEGF水平与肿瘤大小、浸润深度有关(P<0.05);有淋巴结转移者VEGF水平明显高于无淋巴结转移者(P<0.01);VEGF水平随着胃癌临床病理分期的上升而升高,且差异有统计学意义(P<0.01)。VEGF水平与性别及组织学分化程度因素无明显相关性,结果详见表2。 3 讨论 肿瘤的生长有两个明显不同的阶段,即从无血管的缓慢生长期转为有血管的快速增殖期,血管的生长使肿瘤能获得足够的营养而完成血管切换期4。因此,血管形成在肿瘤的发生、发展、侵袭及转移中发挥着重要作用,已成为肿瘤治疗的新靶点之一。VEGF是二硫键连接的同源二聚体糖蛋白,通过内皮细胞的3种受体（FLT-1、KDR 和FLT-4）在肿瘤血管形成中起重要作用。最近有学者5采用ELISA方法检测肿瘤患者术前血清VEGF值,结果表明术前血清VEGF可作为一种新的肿瘤标志物,对肿瘤诊断及预后判断具有重要的临床价值。 表2胃癌患者临床病理参数与VEGF水平的关系 本实验采用ELISA法检测胃癌患者与健康人血清VEGF水平,结果显示胃癌患者VEGF水平较健康人明显为高(P<0.01),这可能是由于肿瘤细胞分泌的VEGF穿过血管壁进入血液循环, 或是由于VEGF使血管壁通透性增加所致,因此血清VEGF可作为一个早期预测指标。其表达水平与胃癌的肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、临床病理分期密切相关(P<0.05或0.01),提示血清VEGF的检测对预测胃癌的侵袭程度具有重要的临床意义。术后血清VEGF水平较术前明显降低(P<0.01),提示血清VEGF可作为胃癌恶性生物学行为的血清学参考指标。本次实验的结果显示VEGF与性别无关,但由于所取例数有限,此结论还需要进一步证实。大多数胃癌患者在诊断时已经处于疾病晚期。化疗仍是晚期胃癌的主要治疗方法,但是化疗的效果不明显。分子靶向治疗是近年来在治疗血液和实体肿瘤中涌现出的新治疗手段。VEGF是目前所知作用最强、特异性最高的一种促血管内皮生长的细胞因子,在胃癌等多种实体瘤组织中均有VEGF及其受体的表达。血管生成抑制剂可作用于肿瘤内皮细胞,阻止其增殖、迁移、出芽及形成新生血管,并诱导不成熟的内皮细胞凋亡,抑制肿瘤生长,尤其是胃癌6。本实验血清VEGF值与肿瘤分化程度无关,提示VEGF不参与肿瘤分化的调控,但本实验样本含量较少,缺少未分化组,此结论有待进一步证实。【参考文献】 1McNeish IA,Bell SJ,Lemoine NR.Gene therapy progress and prospects: cancer gene therapy using tumour suppressor genes.Gene Ther,2004,11:497-5032Brown LF,Yeo KT,Berse B,et al.Expression of vascular permeability factor (vascular endothelial factor)by epidermal keratinocytes during wound healing.J Exp Med, 1992, 176: 1375-13793徐彬.血管内皮生长因子及其受体与肿瘤J.国外医学临床生物化学与检验学分册,2002,23(6):320-3224Harlozinska A.Progress in molecular mechanisms of tumor metastasis and angiogenesis. Anticancer Res,2005,25:3327-33335Karayiannakis AJ,Bolanaki H,Syrigos KN,et al.Serum vascu