食管癌组织和切缘P53蛋白表达及其与预后的关系.doc

食管癌组织和切缘P53蛋白表达及其与预后的关系 作者：程德志，蒋成榜，张虎祥，何志锋，池闯【摘要】 目的：检测食管鳞癌组织与切缘的P53蛋白表达情况，并分析其与预后的关系。方法：应用免疫组织化学方法检测癌组织及切缘的P53蛋白表达，并分析表达阴性与阳性之间的生存率。结果 ：癌组织P53阳性的患者5年生存率为25.0%，阴性的为43.8%。切缘P53阳性的患者生存率为11.1%，阴性的为39.2%。结论：食管鳞癌组织与切缘P53蛋白的表达可能对预后有影响。 【关键词】 食管鳞状细胞癌 手术切缘 预后 P53食管癌术后切缘癌是肿瘤局部复发的根源，其发生率为4.2%31.3%1，严重影响患者预后。传统方法对于手术切除是否干净的判断主要基于对切缘组织的细胞形态学观察，这种方法根据癌细胞和正常细胞在形态学上的差异进行区分，而对细胞内部是否存在潜在变化无从知晓。P53基因是迄今为止发现的与人类肿瘤相关性最高的基因，P53蛋白是P53基因突变的产物，是一个促肿瘤生长因子，在30%50%的食管癌患者中，存在P53基因的突变2。本研究检测60例食管鳞癌组织与切缘P53蛋白的表达，并分析其对预后的影响。1 材料和方法1.1 一般资料 2002年1月-2003年6月在我科行食管癌手术的60例患者，其中男43例，女17例；年龄3275岁，平均（56.314.6）岁。病例入选标准：患者术前术后病理均为鳞癌，切缘病理检查示阴性；术前未行放化疗等辅助治疗；手术均为左进胸切除，左颈部吻合，胸内及腹腔内淋巴结清扫；有明确的病理分期；病理资料、随访资料齐全。术后病理分期I期5例，II期23例，III期32例；胸中段癌39例，胸下段癌21例。1.2 实验材料和方法1.2.1 材料：P53(D07)单克隆抗体购自Santa Cruz公司，LSAB试剂盒(K0681通用型) 购自Dako公司。1.2.2 免疫组化方法：常规切片，脱蜡水化。3% H2O2溶液作用5 min，微波炉抗原修复。加10%正常山羊血清，室温下孵育5 min。倾去血清，加入P53单克隆抗体工作液，置于4 冰箱中过夜。PBS液洗片后加入二抗，37 恒温箱中孵育20 min。洗片后加入LSAB复合物，37 恒温箱中孵育20 min。PBS液洗片，配制DAB显色液，加入切片中显色，封片。1.2.3 P53蛋白阳性标准：原发灶P53蛋白阳性标准是10%的癌细胞有明显的核棕黄色染色；阳性切缘染色标准是切缘黏膜的基底细胞中5%的细胞有相应的P53特征染色。1.2.4 阅片方法：每例标本均行HE染色和P53免疫组化染色。所有切片均采用双盲法，由三位病理科医生阅片，结论一致则记录结果，如有争议，以两个相同意见为准。1.3 统计学处理方法 采用x2检验。2 结果60例患者中癌组织P53阳性有28例(占46.7%)，切缘阳性9例(占15.0%)。5年生存率为35.0%，其中I期80.0%，II期43.5%，III期21.9%。癌组织P53阳性的生存率为25.0%，阴性的为43.8%。切缘P53阳性的生存率为11.1%，阴性的为39.2%。5年内死亡原因：吻合口复发3例，其中1例为I期患者，癌组织及食管切缘P53蛋白表达均示阳性；淋巴结转移(包括腹腔淋巴结、纵隔淋巴结及锁骨上淋巴结)25例，远处转移8例，其他3例。3 讨论食管癌是我国最常见的消化道肿瘤之一。手术切除是食管癌早期治疗的重要手段，切缘干净与否是肿瘤预后的主要因素，切缘癌复发是死亡的重要因素之一。传统方法对于手术切除是否干净的判断主要来自于病理组织切片HE染色后光镜下的观察结果。这种方法根据癌细胞与正常细胞在形态上的差异来进行区分，存在一定局限性，无法区分表型上与正常细胞无可见差异的癌前细胞或具有潜在转化能力的细胞。另一方面，当癌细胞数量只占正常细胞少量的时候或微癌灶只存在于切缘组织某个区域时，极易造成漏检，而病理检查时又不可能对切缘组织行连续切片检查。因此常规病理检查切缘阴性的患者也常常有吻合口癌的复发，切缘癌虽未纳入术后TNM分期的范畴，但其局部自然转归及预后极差3。肿瘤的发生和演进过程中，细胞将发生一系列遗传学的改变，如一些癌基因激活和抑癌基因失活，而其中某些基因的分子遗传学改变可能就是细胞癌变的标志。P53基因是一个肿瘤高度相关的基因，在食管癌中，有30%50%的患者存在P53基因的突变。P53基因突变可能是食管细胞癌变的一个早期事件，这在早期的研究中已经被证实。目前开展了多项针对P53基因的靶向治疗的研究4，但对食管切缘的P53表达却知之甚少。目前关于切缘对肿瘤预后的研究，在喉癌方面的较多，而喉癌与食管癌的生物学行为有较多相似之处，有一定借鉴意义。夏良平等5研究了喉鳞癌切缘P53的表达情况，并分析认为阴性患者预后较良性患者为好。但亦有不同的报道，Tuncan等6的报道表明，在头颈部鳞癌的研究中，切缘P53的变异与肿瘤复发无关，但增加了肿瘤转移及第二原发肿瘤的可能性。我们的研究表明，食管癌组织P53蛋白表达阳性的患者5年生存率为25.0%，而阴性的为43.8%，切缘P53蛋白表达阳性的患者5年生存率为11.1%，而阴性的为39.2%，统计学处理P值接近在于0.05，但考虑到例数较少，切缘阳性的仅为9例，如果增加研究样本量，极可能得出统计学处理有意义的结果。【参考文献】 1 林训生. 食管切除标本断端癌组织的意义J. 中华外科杂志,1985,23 (1)30-32.2 Sakaguchi S,Yokokawa Y,Hou J, et al. Environmental expo-sure and p53 mutations in esophageal cancer patients inareas of low and high incidence of esophageal cancer inChinaJ.Tohoku J Exp Med,2005, 207(4):313-324.3 邵令方,高宗人,李章才,等. 204 例早期食管癌和贲门癌切除治疗的远期结果J.中华外科杂志,1993,31 (3):131-133.4 Hoshino I, Matsubara H, Akutsu Y, et al. Role of histonedeacetylase inhibitor in adenovirus-mediated p53 genetherapy in esophageal cancerJ. Anticancer Res, 2008, 28(2A):665-671.5 夏良平, 曾宗渊, 郭朱明,等. 喉鳞癌原发灶及无瘤手术切缘组织P53蛋白表达及其与预后的关系J.癌症 ,2003, 22(1): 77-82.6 Tunca B, Erisen L, Coskun H, et al. P53 g