HBV感染者血清IL10水平检测及临床意义.doc

HBV感染者血清IL-10水平检测及临床意义 作者：马丽娜 王 麟 杨柳絮 刘明社 赵中夫 【摘要】 目的：检测HBV感染者血清IL-10水平，探讨其在HBV持续感染及肝细胞损伤过程中的作用。方法：分离54例HBV感染者临床血清标本，其中无症状携带者21例，慢性乙肝患者33例（轻度12例，中、重度21例）。用双抗体ELISA夹心法定量检测血清IL-10水平，以10例健康献血者的血清为正常对照。结果：HBV感染者血清IL-10浓度明显高于正常对照组(P<0.05)；无症状携带者及中、重度慢性乙肝患者组的明显高于轻度组(P<0.05)；血清HBV-DNA高载量者明显高于低载量者 (P<0.05)。结论：慢性乙肝患者血清IL-10浓度升高与HBV持续感染、HBV-DNA高载量复制及肝损伤有关；无症状携带者IL-10浓度升高可能与其诱导的免疫耐受有关。 【关键词】 乙型肝炎病毒无症状携带者白细胞介素10 Abstract Objective:To ascertain the significance of serum IL-10 level in patients with Hepatitis B Virus persistent infection.Methods:The serum IL-10 level of 54 patients who had infected with Hepatitis B, including 21 HBV carriers and 33 chronic HBV patients (12 patients with mild degree，21 patients with moderate or serious degree), were detected by ELISA.Serum IL-10 level of 10 health people were detected as control group.Results:The serum IL-10 level in patients with hepatitis B were significantly higher than that in the control group (P<0.05).Both HBV carriers group and patients with moderate or serious degree group were evidently higher than mild degree group (P<0.05);The patients of high virus load group were obviously higher than that of low virus load group (P<0.05).Conclusions:The serum IL-10 level in chronic patients was related with Hepatitis B Virus persistent infection, HBV-DNA replication and the damage of liver.The higher serum IL-10 level in HBV carriers may induce immune tolerance. Key words Hepatitis B Virus；HBV carriers；IL-10 机体对HBV的清除主要依赖于细胞免疫，IL-10是美国学者于1989年发现的第一个具有下调作用的Th2型细胞因子，IL-10的合成增加可抑制机体细胞免疫，。HBV感染者类型多样，无症状携带者和慢性乙型肝炎患者是其中最主要的人群。本研究对HBV感染者及健康献血者的血清IL-10进行检测，以探讨其在HBV持续感染中的意义。 1 材料和方法 1.1 研究对象 54例HBV感染者来自我院传染科。其中男36例，女18例，年龄6岁60岁，平均年龄33.5岁，无症状携带者21例, 慢性乙肝患者轻度12例（ALT120 U/L)，中、重度21例（ALT120 U/L)。诊断标准符合1995年北京传染病及寄生虫病会议修订的病毒性肝炎诊断分型标准。所有感染者均排除合并HAV、HCV、HDV、HEV感染。各种肝炎病毒血清标志物均为阴性的10例健康献血者组成正常对照组。 1.2 方法 1.2.1 标本采集：取54例HBV感染者和10例健康献血者清晨空腹外周静脉血2 mL3 mL，离心后分离血清按每次用量分装于0.5 mL EP管，-20保存待测。 1.2.2 HBV-DNA载量检测：美国MJO Pticon荧光定量PCR仪，深圳匹基生物工程股份有限公司生产的FQ-PCR检测HBV-DNA试剂，并严格按说明书操作。 1.2.3 IL-l0水平检测：采用ELISA双抗体夹心法检测54例HBV感染者和10例健康献血者血清IL-l0的水平,以pg/mL为单位。IL-10试剂盒由深圳晶美生物有限公司提供。 1.3 统计学处理 数据采用SPSS110统计软件行方差分析，P<0.05为显著差异。 2 结果 2.1. HBV感染者血清IL-l0浓度与HBV-DNA复制水平的关系(见表1)表1 HBV感染者血清IL-10浓度与ALT水平的关系*与正常对照组和低载量组相比P<0.05 HBV高载量组感染者血清IL-10浓度明显高于正常对照组和低载量组 (P<0.05)。 2.2. HBV感染者血清IL-10浓度与ALT水平的关系(见表2)表2 HBV感染者血清IL-10浓度与ALT水平的关系*与正常对照组相比P<0.05；*与轻度组和正常对照组相比P<0.05 无症状携带者组和中、重度组分别与轻度组和正常对照组比较差异有显著性(P<0.05)。 3 讨论 乙型肝炎的发病机制与HBV抗原和机体免疫系统的相互作用有关，清除HBV主要依赖细胞免疫。介导细胞免疫应答的是Th1细胞，Th2细胞介导的是体液免疫应答，机体的细胞免疫应答利于病毒的清除，而体液免疫主要与组织损伤及感染的慢性化作用有关3，4。研究发现，在慢性乙型肝炎感染者体内，存在Th1/Th2 失衡，这种失衡又体现在细胞因子失调，表现形式为Th2应答占有优势。Th2类细胞因子IL- 4, IL-10均显著高于正常对照组。IL-10主要由Th2细胞产生，Th0细胞，单核-吞噬细胞， Kupffer细胞，肝细胞等也能产生。它在免疫反应中主要起抑制作用，通过抑制Th1细胞产生细胞因子IL-2，IL-3，IFN- ，TNF-，GM-CSF等，抑制Th1细胞应答；并有抗炎和诱导免疫耐受的作用。优势Th2型细胞因子IL-10介导体液免疫使机体不能有效清除受病毒感染的肝细胞，造成HBV感染的持续。本实验表明，HBV感染者血清IL-10浓度明显高于正常对照组(P<0.05)，HBV高载量组感染者血清IL-10浓度明显高于正常对照组和低载量组(P<0.05)，提示HBV感染者体内Th1/Th2 失衡，主要表现为IL-10表达增强，与Tsai等的结果相一致6，7，8。 近年来的研究证实，IL-10是一个多效性细胞因子，具有广泛的生物学作用。一般认为，IL-10在免疫应答中对肝损伤有保护作用。Louis等报道，C3H/HeJ小鼠被注射ConA 1 h后肝内即有IL-10的产生并进行性升高，其水平的高低在一定程度上反映了机体对致伤因子自然抵抗能力的强弱。用anti-IL-10 McAb中和IL-10，8h后TNF-、IFN-、IL-12分别增加111%、92%和73%，肝损害随之加重；预先注射重组IL-10，则能显著抑制上述炎性介质产生，降低血清ALT水平，减轻肝细胞变性、坏死和嗜中性粒细胞浸润。说明不论是内源性还是外源性IL-10，均能通过抑制炎性介质的产生而发挥对ConA诱发性肝炎的保护作用。然而本组结果则显示慢性乙肝中、重度组患者的IL-10水平显著高于轻度组，似乎与上述结果相矛盾，但因为体内的Th1/Th2 平衡可能在病程的进展过程中是处于一个动态的平衡， 并且平衡是相对于Th1细胞因子的水平的。因此，本组中、重度组患者的IL-10水平增高，可能正是机体为保护肝损伤的反应。进一步的研究应当同时监测中、重度慢性乙肝患者Th1/Th2两种细胞因子的表达水平和动态平衡与肝损伤的关系。【参考文献】 Bertoletti A, DElios MM，Boni C，et alDifferent cytokine profiles of intraphepatic T cells in chronic hepatitis B and hepatitis C virus infections Gastroenterology,1997,112(1):193199 Schlaak JF，Tully G，Lohr HF，et alHBV-specific immune defect in chronic hepatitis B is correlated with a dysregulation of pro-and anti-inflammatory cytokines.Clin Exp Immunol,1999,115(3):508514 Kobayashi M, Fitz L,Ryan M, et al.Identification and purification of natural killer cell stimulatory factor (NKSF), a cytokine with multiple biologic effects on human lymphocytes.J Exp Med,1989,170(3):827. 孟 泽，李晓军.免疫学检验的热点与难点.临床检验杂志,2000,18(1):60. Fukuda R, Ishimura N, Nguyen TX, et al.The expression of IL-2,IL-4 and interferon-gamma (IFN-gamma) mRNA using liver biopsies at different phases of acute exacerbation of chronic hepatitis B.Chin EXP Immunol,1995,100(3): 446451. Tsai SL, Liaw YF，Chen MH，et aLDetection of type-2-like T-helper cells in hepatitis C virus infection：implications for hepatitis virus chronicityJ. Hepatology,1997,25(2)：449458 吴戌年.慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA含量与IL-8、IL-10水平检测及临床意义兰州