发菜论文：发菜 海藻糖 麦芽寡糖基海藻糖水解酶 胁迫

发菜论文：发菜中麦芽寡糖基海藻糖水解酶基因的克隆及其在胁迫条件下的响应【中文摘要】发菜是一种极端环境下生长的陆生蓝藻,对逆境具有极强的适应力,因此是抗逆性研究中一种典型的植物资源,对其抗逆性研究具有重要的意义。目前人们对发菜适应极端环境的研究已经受到人们的广泛关注,但是还没有突破性的进展。本研究以发菜这一具有很强抗逆性的丝状蓝藻作为研究材料,应用基因工程技术,从发菜中克隆得到合成海藻糖途径的一个重要酶:麦芽寡糖基海藻糖水解酶MTH,转入大肠杆菌中进行重组表达,并对蛋白进行了纯化和酶活测定。同时,通过干旱和盐胁迫发菜,检测其NfMTS和NfMTH酶的表达量及相同条件下海藻糖和蔗糖的含量情况。得到以下结果和结论:通过设计简并引物,从发菜(Nostoc flaglliforme)中克隆出MTH的基因TreZ,对该基因序列测序表明开读框全长1848 bp,编码的蛋白质有615个氨基酸。生物信息学分析得到该基因编码的氨基酸序列包含四个麦芽寡糖基海藻糖水解酶的高度保守区域。将该基因在大肠杆菌中进行表达,通过SDS-PAGE检测到在0.5 mM IPTG诱导条件下该基因在大肠杆菌中有很高的表达量,分子质量约为70 kD。所得的重组蛋白经过纯化后,用麦芽六糖作为底物进行酶活反应,能水解麦芽.【英文摘要】Nostoc flaglliforme which distributed in west and northwest of China widely is one of valuable terrigenous cyanobacterias. Itsliving envioroment is extremely atrocious.A genomic DNA fragment encoding a putative maltooligosyltrehalose trehalohydrolase (NfMTH) for trehalose biosynthesis was cloned by the degenerate primer-PCR from cyanobacterium Nostoc flagelliforme. The ORF of NfMTH is 1,848 bp in length and encodes 615 amino acid residues constituting a 70 kDa protein.The deduced amino acid sequenc.【关键词】发菜 海藻糖 麦芽寡糖基海藻糖水解酶 胁迫【英文关键词】Nostoc Flagelliforme Trehalose Maltooligosyltrehalose trehalohydrolase Stress【索购全文】联系Q1：138113721 Q2：139938848 同时提供论文写作一对一辅导和论文发表服务.保过包发【目录】发菜中麦芽寡糖基海藻糖水解酶基因的克隆及其在胁迫条件下的响应摘要6-8Abstract81. 综述11-261.1 发菜的概述11-161.2 海藻糖概述16-241.3 发菜中海藻糖的研究24-251.4 本论文的研究目的和意义25-262. 材料与方法26-422.1 材料26-282.2 方法28-422.3 技术路线423. 结果与分析42-623.1 发菜总DNA 的提取42-433.2 TreZ 目的基因的克隆43-453.3 生物信息学分析45-513.4 pET22b-TreZ 基因载体的构建51-523.5 pET22b-TreZ 在大肠杆菌中的表达和纯化52-533.6 pET22b-TreZ 基因产物的酶活性测定53-543.7 TreZ-main 基因的克隆、表达及纯化54-583.8 胁迫条件下发菜中NfMTH 表达