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文档简介
,基本要求 1.制作固定化-淀粉酶。 2.进行淀粉水解的测定。 发展要求 通过此实验探讨固定化酶的应用价值。,实验原理,固定化酶就是将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。 介质本身是不溶于水。,固定化酶的优点,管道化、连续化、自动化 酶不溶解在催化反应的溶液中，产物更易纯化 可反复使用 可较长时间地贮存和使用,固定化酶的固定方法,吸附法 偶联法 交联法 包埋法,吸附法,物理吸附法 酶蛋白分子吸附在惰性载体（不引起变性且能保持酶活力的载体） 离子交换法 利用蛋白质分子上带电荷基团（氨基、羧基）与离子交换剂形成离子键，再被交换结合至载体上 优点：适用的酶范围广，酶活性高 缺点：酶与载体的结合力较弱，酶容易脱落,偶联法（载体偶联法、共价偶联法）,酶蛋白上的一些基团（如羧基、巯基、咪唑基等）能在温和条件下与载体共价结合，从而被固定化。 结合部位必须不是酶的活性中心，也不是维持其空间结构的必需基团。 优点：结合稳定，适用范围广 缺点：操作复杂，条件不够温和，酶活性较低,交联法,交联法是指通过双功能试剂，将酶和酶联结成网状结构的方法。 结合部位也不是酶的活性中心，也不是维持其空间结构的必需基团。 优缺点与偶联法基本相同,包埋法,包埋法是将酶蛋白包埋在凝胶交联后的“格子”中 优点：适用范围不广，酶活性高，稳定性也较高。,-淀粉酶的固定化实验,载体：石英砂 固定原理：吸附法（物理吸附法） 淀粉：遇碘蓝色 （ 经-淀粉酶催化） 糊精：遇碘红色 （经-淀粉酶催化） 麦芽糖：遇碘不变色（棕黄色） （经糖化淀粉酶、麦芽糖酶催化） 葡萄糖 Ps：碘液是KI-I2的溶液,淀粉酶和石英砂混合后，搅拌30min。 加入注射器后，用大于10倍体积的蒸馏水洗涤注射器以除去未吸附的游离淀粉酶。 确定洗涤后收集到的液体中不再含有淀粉酶 放尽剩余的蒸馏水后关闭液体阀 控制流速加入可溶
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