唾液淀粉酶活性的测定

影响唾液淀粉酶活性的研究摘要：讨论了不同条件下唾液淀粉酶的活性差异，实验结果表明，影响唾液淀粉酶活性的因素很多，必须在适宜的条件下，才能发挥最佳催化作用；淀粉酶具有高度专一性，其活性受温度、值、激活剂及抑制剂、酶浓度以及作用时间等多种因素的影响；每个人产生唾液淀粉酶的量不同，活性强弱也有差异。关键词：淀粉酶；活性；温度；抑制剂；激活剂；专一性2影响唾液淀粉酶的活性的因素（1） 实验目的观察淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。观察温度、pH、激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。（2） 实验原理人唾液中淀粉酶为-淀粉酶，在唾液腺细胞中合成。在唾液淀粉酶的作用下，淀粉水解，经过一系列被称为糊精的中间产物，最后生成麦芽糖和葡萄糖。变化过程如下：淀粉紫色糊精红色糊精麦芽糖、葡萄糖淀粉、紫色糊精、红色糊精遇碘后分别呈蓝色、紫色与红色、麦芽糖和葡萄糖遇碘不变色。淀粉与糊精无还原性，或还原性很弱，对班氏试剂呈阴性反应。麦芽糖与葡萄糖是还原性糖，与班氏试剂共热后生成红棕色氧化亚铜的沉淀。唾液淀粉酶的最适温度为37-40C，最适pH为6.8.偏离此最适环境时，酶的活性减弱。低浓度的Cl-离子能增加淀粉酶的活性，是它的激活剂。Cu2+等金属离子能降低该酶的活性，是它的抑制剂。（3） 器材及试剂1、 器材：试管、酒精灯、烧杯、恒温水浴锅、量筒、冰浴、玻璃棒、试管夹、白磁板、试管架、铁三脚架、唾液淀粉酶2、 试剂：1淀粉溶液、碘液、班氏试剂、0.4HCl溶液、0.1的乳酸溶液、1NaCl溶液、1CuSO4溶液、0.1淀粉溶液（4） 操作步骤1、 淀粉酶活性的检测：取一只试管，注入1淀粉溶液5mL与稀释的唾液0.5-2mL。混匀后插入1支玻璃棒，将试管连同玻璃棒置于37C水浴中。不是的用玻璃棒从试管中取出1滴溶液，滴加在白磁板上，随即滴加1滴碘液，观察溶液呈现的颜色。此实验延续至溶液仅表现碘被稀释后的微黄色为止。记录淀粉在水解过程中，遇碘后溶液颜色的变化。向上面的剩余溶液中加2mL班氏试剂，放入沸水中加热10分钟左右，观察现象2、 pH对酶活性的影响：取4支试管，分别加入0.4盐酸、0.1乳酸、蒸馏水与1碳酸钠各2mL，再向以上四支试管中各加2mL1淀粉溶液及2mL淀粉酶试剂，在沸水浴中加热，根据生成红棕色沉淀的多少，说明淀粉水解的强弱。3、 温度对酶活性的影响：取3支试管，各加3mL1淀粉溶液；另取3支试管，各加1mL淀粉酶液。将此6支试管分为3组，每组中盛淀粉溶液与淀粉酶液的试管各1支，三组试管分别置于0C、37C与70C的水浴中。5分钟后，将各组中的淀粉溶液倒入淀粉酶液中，继续维持原温度条件5min后，立即加2滴碘液，观察溶液颜色的变化。根据观察结果说明温度对 酶活性的影响。4、 激活剂与抑制剂对酶活性的影响：取3支试管，按下表加入各种试剂。混匀后，置于37C水浴中的保温。从1号试管中用玻璃棒取出1滴溶液，置于白磁板上用碘液检查淀粉的水解程度。待1号试管内的溶液遇碘不再变色后，立即取出所有的试管，各加碘液2滴，观察溶液颜色的变化，并解释之。管号1231NaCl（mL）11CuSO4（mL）1蒸馏水（mL）1淀粉酶液（mL）1110.1淀粉溶液（mL）333（5） 、实验结果与讨论1.加入班氏试剂后2. PH值对酶活性影响：1号深红色，2号为红棕色，3号为砖红色，4号为偏蓝。因为PH1时，超出了淀粉酶有效PH范围，使得酶完全失活，淀粉没有被分解。2号是因为PH=5时，不是淀粉酶的最适范围。3号是因为PH7时，为淀粉酶分解的最适PH，淀粉被酶迅速分解生成麦芽糖和葡萄糖。而4号则是因为PH9超出了淀粉酶的适宜PH，活性受到或者是部分失活，使淀粉分解较慢。 3.温度对酶的影响：1号显紫红色，2号为淡黄色，3号为深蓝色。当温度为0度时，蛋白质分子的热运动减慢，即酶分子的活性受到了抑制，使酶的活性降低了，淀粉分解减慢，生成紫红色的糊精；2号处于37度，接近人体温度，酶的活化性能较高，淀粉被分解成麦芽糖和葡萄糖就越快，所以是淡黄色，而当温度为70度时，由于酶是蛋白质，遇到高温时会失活，所以淀粉没有被分解。4.激活剂和抑制剂对酶的影响：3号作为对照实验组，显红棕色，1号显浅黄色，2号显深蓝色。因为在1号溶液中，NaCl对酶的活性在增加作用，激活了淀粉酶，淀粉酶迅速把淀粉分解成麦芽糖和葡萄糖，滴加碘液时，溶液显浅黄色，而对照组显示红棕色，表明淀粉被分解成了糊精，在1号中，溶液中的淀粉没有被分解遇碘变蓝，通过对比1和3号，2和3号，由颜色的变化，判断淀粉水解程度为132,说明了NaCl具有激活作用，CuSO4具有抑制作用。结论： 酶催化特定化学反应的蛋白质、RNA或其复合体。是生物催化剂，能通过降低化学反应的活化能加快反应速率，但不改变反应的平衡点。绝大多数酶的化学本质是蛋白质。具有催化效率高、专一性强、作用条件温和等特点。 PH可以影响酶蛋白的结构、酶的活性部位的解离状态、辅酶的解离以及底物分子的解离，从而影响酶与底物的结合以及对底物的催化效力。温度升高是通过对酶结构破坏，从而抵消了酶促反应速率随温度升高而升高的趋势。我们可以看出PH和温度都通过影响了酶的结构来影响酶促反应速率。抑制剂和激活剂也均是通过影响酶的结构来影响酶的活性。参考文献：1周锦兰,张开诚.实验化学M.武汉:华中科技大学出版社,2006:310-311.3许冰,原媛,赵文献.pH值对酶活性影响的实验观察J.临床合理用药杂志,2010,3(10):35-35.4冯攸科.唾液淀粉酶活性的最适温度质疑J.中等医学教育 1996(03). 5杨玉萍.几种环境条件对唾液淀粉酶活性的影响期刊论文-新乡学院学报（自然科学版).6陈电容.生物化学与生化药品M郑州：郑州大学出版社，2004：28 .7尚渤程(云南省昆明市第一中学6s0031) 黎一苇(云南大学生物化学与分子生物学中心650091) 生物学教学2009年（第34卷）第12期.8石渊渊生物化学实验指导M.开封：河南大学出