课件：液质联用仪 .ppt

,4500 用户培训,用液相或注射泵将样品注 入质谱.,1. 样品注入,系 统 组 成,样品注入方式,连续注射 样品放在注射器中或静态的针内 用注射泵或电场引力, 样品流连续并恒定地流入离子源喷口 通常用于安装时调谐, 质量校正 和标准样品质谱方法的优化 流动注射分析 用手动进样器和液相泵,注入样品,由流动相带入离子源喷口 通常安装5ul的定量环 液质联用 用液相的泵,流速从 nL/min 到 mL/min 样品可能是纯品或者是混合物 流动相带着样品经过色谱柱分离后进入质谱的离子源,Turbo Vtm 离子源,Turbo VTM 离子源,TurboV 离子探头,在使用时调节喷雾针出套管1-3mm,电喷雾 - TurboIonSpray,从进样口进来的样品液体被雾化气吹成雾滴，加于喷嘴上的高压电使雾滴带电，带电雾滴去溶剂后生成样品离子。辅助加热气(GS2)可加快去溶剂的速度，可用于比较大的液体流量。,APCI 三步离子化的过程: 电晕针放电使离子源内的 N2 或 O2 带电 N2 或 O2 转移电荷到气态溶剂分子上 带电的气态溶剂分子转移电荷到气态样品上,大气压化学电离源 (APCI) 又叫:加热雾化源 Heated Nebulizer,Turbo VTM 离子源的APCI,API3200, 4000,5000和4500的离子源体是TIS 和APCI共用的,TIS和APCI的互换不用工具,只用手就可以完成. 放电针位置调节钮,单手操作即可 放电针一直在离子源体内,Interface,API 4000,4500,Orifice,Qjet,Orifice和QJet,四极杆的工作原理,不稳定的离子,稳定的离子,离子源,检测器,直流和交流控制电信号,在四极杆上加有三种电压 RF 固定频率的交流电 (1MHz on API 2000;816 Khz on API 4000; 1.2288Mhz on API 5000) Filtering DC (FDC) 在每组杆之间的电压差. 用于选择离子 决定分辨率. Rod Offset Voltage (ROV) 低的直流电定义了离子轴向飞行的动力. “RF Only” 的意义: 没有FDC; 只有RF, & Rod Offset 只是传输离子,没有分辨率,四极杆的工作原理,180 phase shift电信号180度相移,= ions离子簇,1. 离子簇被吸引到 “B” 极. 2. RF 电压极性反转, 所有的离子簇被吸引到 A 极. 3. RF 电压极性反转, 所有的离子簇被吸引到 B 极. 4. RF 电压极性反转, 所有的离子簇被吸引到 A 极. .,RF,RF,180 phase shift电信号180度相移,End View后视图,四极杆工作原理之RF ONLY,RF only-A rods & B rods are 180 out of phase 只加交流信号-A杆与B杆信号 强度相同,相位差180度,*Q0, Q2 ,ST,ST2,ST3 一直工作于 RF only. *选用Q1单级工作时Q3工作于 RF only *选用Q3单级工作时Q1工作于 RF only,离子簇在离子通道的运动模式 A极和B极上的RF交流电压及ROV直流偏置 电压使离子簇以螺旋运动的方式前进,RF only-A rods & B rods are 180 out of phase 只加交流信号-A杆与B杆上 加的电压强度相同,相位差180度,四极杆的工作原理RF+DC,四极杆原理之FDC,2019/8/4,20,可编辑,四极杆工作原理之ROV(IE),离子能量(IE) 影响分辨率和峰形 降低IE = 分辨率变好,灵敏度降低 提高IE = 分辨率变差,灵敏度提高 Q1离子能量= n(Q0 - RO1);n电荷数 Q1 IE1 =Q0-RO1= 0.5-2eV Q3离子能量= n(RO2 - RO3); n电荷数 Q3 IE3 =RO2-RO3= (1-6eV),Q1 的离子能量(IE1),IE =0.5 V 分辨率好而灵敏度差,IE = 2.0 V 分辨率差而灵敏度好.,分辨率的定义,FWHH:半峰高处的峰宽 AB分辨率的定义 Unit = 0.7 (0.1 amu FWHH) High = 0.5 (0.1 amu FWHH) Low = 1.1 (0.1 amu FWHH) Open= 3-5 amu 在调节完分辨率后需要做质量校正,四极杆原理之灵敏度和分辨率,灵敏度和分辨率是相互影响,相互制约的. 分辨率差则灵敏度高 分辨率好则灵敏度低,Low 低分辩,半峰宽: 1.5-2 amu,Unit 单位分辩,半峰宽: 0.7 amu,High 高分辩,半峰宽: 0.5 amu,离子检测器 (Channel Electron Multiplier),检测器电压的调节,如果检测器电 压增加100V, 信号至少增加 2030%.则需 要增加检测器 电压,右图情况 下:用2500v,扫描方式,Q1 单级扫描模式,Q1质量扫描 (Q1 Scan): Q1 作为单级质量分析器 Q1 scan 主要用于确定母离子的m/z(质荷比) 单个宽范围质量扫描 多个小范围质量扫描 Q1 多离子信号监测 (Q1 Multiple Ion ) 对感兴趣的多个离子进行信号监测 用于单级定量 在两种 Q1 工作模式下, Q3 处于 RF-only 模式 Q3 只传输所有的Q1出来的离子到检测器,Q3 单级扫描模式,Q3质量扫描 (Q3 Scan): Q3 可用来做单级质量分析器 单个宽范围质量扫描 多个小范围质量扫描 Q3 scan 不用于确定母离子的m/z(质荷比),仅用于做Q3质量校准 Q3 多离子信号监测 (Q3 Multiple Ion ) 对感兴趣的多个离子进行信号监测 在两种 Q3 工作模式下, Q1 处于 RF-only 模式 Q1 只传输所有的离子到Q2,Q3,Q1 Scan,Q3 Scan,Q1 质量分析器 Q2 RF Only Q3 RF Only,Q1 和 Q3 Scan,质谱图,Q1 RF Only Q2 RF Only Q3 质量分析器,质谱图,强度,强度,质荷比amu,质荷比amu,Q1 质量分析器 Q2 RF Only Q3 RF Only,Q1 MI,Q3 MI,Q1 和 Q3 Multiple Ion Mode,信号图,信号图,Q1 RF Only Q2 RF Only Q3 质量分析器,强度,强度,时间,时间,MS/MS 二级质谱联用的扫描方式,MS/MS二级质谱联用的扫描方式 Product Ion产物离子扫描 分析母离子的碎片离子信息 Precursor Ion母离子扫描 分析产生特定子离子的母离子的信息 Neutral Loss中性丢失扫描 分析产生特定中性丢失碎片的母离子的信息 MRM (Multiple Reaction Monitoring)多反应离子监测 对多对母离子/子离子信号进行监测 用于定量,具有高灵敏度和高选择性 在所有的 MS/MS 模式中,Q1 Q3 处于质量分析器模式 Q3 能够扫描，或者固定在某几个质量数 Q2 产生的离子进入 Q3,产物离子扫描Product Ion Scan,CAD gas,923,Q1 选定母离子 Q2 与气体碰撞产生碎片 Q3 扫描子离子,226,497,502,质荷比amu,502,497,226,母离子,与气体碰撞产生碎片,质谱图,强度,200,800,母离子扫描Precursor Ion Scan,1289,923,609,532,Q1扫描离子