单克隆抗体在人体内的应用.pptVIP

,单克隆抗体在人体内的应用,HGPRT-,HAT培养基,单克隆抗体在人体内的应用,单克隆抗体在人体内的应用,鼠源性单抗应用于人体时具有较强的免疫原性，将诱发产生 人抗鼠抗体( human anti-mouse antibody, HAMA ) 反应； 鼠源性单抗通常不能有效地激活人体的免疫反应，如 补体依赖的细胞毒(CDC)作用 及 抗体依赖的细胞毒(ADCC)作用。,单克隆抗体在人体内的应用,解决上述问题的主要途径便是使 鼠源性单抗人源化 或 研制完全的人 源性抗体 鼠源单抗人源化（嵌合抗体，改型抗体，镶面抗体）、抗体库技 术 及 转基因小鼠技术 成为人源化和人源性抗体制备的三大主要技术， 在治疗性抗体的研制中起到关键作用,单克隆抗体在人体内的应用,鼠源单抗人源化,鼠源单抗人源化经历了如下历程： 恒定区人源化 可变区人源化 利用抗体库技术获得完全人源序列,单克隆抗体在人体内的应用,鼠源单抗人源化,恒定区人源化鼠/人 嵌合抗体 (chimeric antibody) 由于异源性McAb的免疫反应约有90%是针对 恒定区（C区），要降低McAb 的抗原性，必须对它的恒定区进行 人源化 。其原理是从分泌某McAb的杂交 瘤细胞基因组中分离和鉴别出重组的功能性 可变区（V区）基因，经基因 重组与 Ig恒定区基因 相拼接，插入到适宜的表达载体中，构成 鼠/人 嵌合的 轻重链基因表达质粒，经转染骨髓瘤细胞，通过筛选即可制备出鼠/人嵌合抗体。,单克隆抗体在人体内的应用,鼠源单抗人源化,2. 可变区人源化CDR移植Ab (CDR grafting antibody) 由于鼠/人嵌合抗体 保留了鼠可变区，仍引起 HAMA，因此有必要将可变 区也人源化。其原理是 将鼠源McAb的6个互补决定区的氨基酸序列 插 入到 人Ig的框架区，通常称为CDR移植。CDR移植技术的理论依据限于篇 幅，在此省略,单克隆抗体在人体内的应用,鼠源单抗人源化,2. 可变区人源化CDR移植Ab (CDR grafting antibody) 优点：CDR移植抗体中 非人序列含量低（约5%），研究已证实其免疫原性 大大减小。并且在人体内的 血清半衰期延长。 缺点：CDR移植抗体 与抗原结合的能力远不及其亲代鼠源McAb。为了恢 复其亲和力，研究人员已经对CDR移植Ab技术进行优化，改进，使其抗原决定 簇的结构更为完善。,单克隆抗体在人体内的应用,鼠源单抗人源化,3. 利用抗体库技术获得完全人源序列 噬菌体抗体库技术,噬菌体抗体库技术 的基本原理： 首先利用基因工程技术克隆 人抗体可变区的全套基因 ，然后将克隆的基 因插入噬菌体编码衣壳蛋白的基因中，建立噬菌体抗体文库，从而使该异源分 子呈现于 噬菌体表面。 制备时，将抗原包被在固项介质上，加入待筛选的噬菌体颗粒与固定的抗原 结合，获取结合的抗体，将未结合的抗体洗脱。从噬菌体库中筛选出针对特定 抗原的特异性抗体的可变区。 再用表达有相应抗体分子的噬菌体颗粒去 侵染宿主细胞，使该噬菌体颗粒得 到扩增，将抗体可变区与恒定区组合得到具有完整功能的全人单克隆抗体。 噬菌体抗体库技术 具有：能够得到完全人源性Ab、分离抗体速度快、简单易 行等优点。,单克隆抗体在人体内的应用,单克隆抗体在人体内的应用,转基因小鼠技术,单克隆抗体在人体内的应用,几种已被批准上市的McAb药物,1986年美国FDA批准抗CD3鼠单抗OKT3上市，改善了许多肾移植病人的存活。,1997年FDA批准Zenapax(daclizumab，PDL公司生产)上市。它是靶向为 CD25抗原的人源化单抗，是第1个无严重不良反应的免疫抑制剂，能有 效减缓器官移植所引起的免疫反应,Rituxan ( Rituximab,Mabthera，利妥昔单抗 )，Genentech公司生产，商品 名为美罗华。是1997年第一个被美国FDA批准用于人肿瘤治疗的基因工