基因工程乙肝疫苗.ppt

基因工程乙肝疫苗,生物技术及应用,什么是基因工程乙肝疫苗？,基因工程乙肝疫苗（酵母重组）是一种乙肝表面抗原（HbsAg）亚单位疫苗，它是采用现代生物技术将乙肝病毒表达表面抗原的基因进行质粒构建，克隆进入酵母菌中，通过培养这种重组酵母菌来表达乙肝表面抗原亚单位。这种乙肝表面抗原亚单位具有原料易得、产量大、安全、高效等特点。美国默克公司研究的此产品最早获美国FDA批准。国内生产此产品技术均从其引进。,用途 乙肝疫苗是用于预防乙肝的特殊药物。疫苗接种后，可刺激免疫系统产生保护性抗体，这种抗体存在于人的体液之中，乙肝病毒一旦出现，抗体会立即作用，将其清除，阻止感染，并不会伤害肝脏，从而使人体具有了预防乙肝的免疫力，从而达到预防乙肝感染的目的。接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效方法。 应用学科 免疫学（一级学科）；应用免疫（二级学科）；免疫预防（三级学科）,发展概况 重组酵母乙肝疫苗首先在美国默克公司研制成功，并于1986年被美国FDA批准通过。1991年，我国自行研制的第一个基因工程疫苗哺乳动物细胞生产乙肝疫苗获准生产。我国当前已能大规模生产乙型肝炎表面抗原重组疫苗，分别称酵母重组和CHO（中国仓鼠卵巢细胞）重组疫苗，免疫效果比同剂量的血源疫苗优良，并且十分安全，可以放心使用。,应用前景,基因工程乙肝疫苗较之于血液乙肝疫苗主要区别之一在于它生产来源不同。它有着许多血源乙肝疫苗不可比拟的优势。 自1985年以来，我国一直采用接种血源乙肝疫苗预防乙肝，血源乙肝疫苗对控制我国乙肝大面积流行曾起了很大作用，但是，由于血源乙肝疫苗需用乙肝病毒表面抗原携带者的血浆为原料，它具有一些自身无法克服的缺点： 其一，乙肝表面抗原携带者由于已感染乙肝病毒，在此情况下，再抽取其血浆作为乙肝疫苗原料，对携带者的身体健康有损害； 其二，疫苗的生产受到乙肝病毒表面抗原携带者血浆来源和质量限制，无法大规模稳定生产； 其三，在表面抗原阳性血浆的采集、运输和加工过程中，存在着引发血源性传染病流行的可能性； 其四，在血源乙肝疫苗的生产过程中，虽采用三步灭活工艺，但三步灭活不足以将血源中所有已知和未知的潜在致病因子全部灭活，难以最大限度地保证血源乙肝疫苗受种者绝对安全； 其五，如上所述，为了灭活乙肝病毒，需采用三步灭活工艺，但三步灭活对疫苗的免疫原性有影响。因此，由于血源乙肝疫苗的内部矛盾性，决定了血源乙肝疫苗只能作为一种过渡性疫苗，1997年卫生部专门下发57号文件，具体部署用基因工程乙肝疫苗取代血源乙肝疫苗事宜。,乙肝疫苗的制备,目的基因的获取 编码乙型肝炎表面抗原的基因的获取 一般的目的基因的获取方法有： 反转录法 化学合成法 反转录聚合酶链反应法 工程菌的构建 CHO(中国仓鼠卵巢）细胞的特点 具有准确的转录后修饰功能 ,表达的糖基化药 物蛋白在分子结构、理化特性和生物学功能方面最 接近于天然蛋白分子 具有产物胞外分泌功 能 ,便于下游产物分离纯化; 具有重组基因的高效 扩增和表达能力; 具有贴壁生长特性 ,且有较高的 耐受剪切力和渗透压能力 ,可以进行悬浮培养 ,表达 水平较高; CHO 细胞属于成纤维细胞 (fibrob2last) ,很少分泌自身的内源蛋白 ,利于外源蛋白的后分离 目的基因的表达 蛋白质的分离纯化 细胞破碎固液分离浓缩与初步纯化高度纯化成品加工,生产工艺控制,生产工艺 基因工程乙肝疫苗（酵母重组）的生产工艺包括发酵、提取、纯化、吸附、配制、分装等工序。生产工艺中采用世界一流的发酵罐，通过全自动控制，提供酵母菌最优生长条件，发酵后经过细胞破碎和一系列微滤、超滤、硅胶吸附、洗脱等工序，再经过疏水层析，可使产品抗原蛋白纯度达99%以上。所有工艺设备可自动清洗、自动灭菌，有效地减少了种种人为因素的干扰，确保生产稳定和质量一致性。 质量控制 基因工程乙肝疫苗（酵母重组）严格按照美国默克公司质量标准进行质量控制，生产单位建立了全面质量管理体系，产品原辅材料、半成品、成品检测和环境检测等方面均有严格质控标准和检定程序。,基因工程乙肝疫苗的安全性,基因工程乙肝疫苗（酵母重组）的有效成分来自能表达乙肝表面抗原的酵母工程菌，之所以选择酵母这种宿主是因为酵母菌较其他宿主有更高的安全性和稳定性。这种酵母工程菌源自于啤酒酵母菌，几千年来，人类利用啤酒酵母生产啤酒的历史表明啤酒酵母是非常安全的。 基因工程乙肝疫苗（酵母重组）的安全性还取决于最后产物的纯度，即取决于来自宿主细胞或生产过程中所使用的原辅材料中残余污染物，该疫苗生产中所用的原辅材料对人体无害，由于采用了先进的纯化技术，按默克工艺生产的基因工程乙肝疫苗抗原蛋白的纯度在99%以上，基因工程乙肝疫苗（酵母重组）中酵母DNA含量极低，并且该DNA无法在浦乳细胞中整合表达。,乙肝疫苗的使用,基因工程乙肝疫苗(酵母重组)的使用：基因工程乙肝疫苗(酵母重组)的接种对象、用法、贮存条件和有效期等方面均同于血源乙肝疫苗，但其规格则不同于血源乙肝疫苗。 基因工程乙肝疫苗(酵母重组)规格为5g/0.5ml。之所以采用此规格的主要原因是基因工程乙肝疫苗的免疫原性优于血源乙肝疫苗的免疫原性。,接种乙肝疫苗,接种程序：共3 针，按照0、1、6 个月程序，即接种第1 针疫苗后，间隔1 或6 个月注射第2 及第3 针疫苗。新生儿接种乙型肝炎疫苗越早越好，要求在出生后24 h 内接种。接种部位新生儿为大腿前部外侧肌肉内，儿童和成人为上臂三角肌中部肌肉内注射 由于婴幼儿和成人的免疫应答敏感性不同，所以有的人打疫苗容易产生抗体，而部分人不会产生抗体。乙肝疫苗第一针后大概有30%左右的人产生抗体，而第二针后有50%70%左右，第三针后90%左右产生抗体。,打乙肝疫苗前的注意事项有以下几点,1、有支气管哮喘和血清病的人、对青霉素等药物过敏者和过敏性荨麻疹患者不能接种乙肝疫苗 2、成年人接种乙肝疫苗最好注射在上臂三角肌处，此处的接种成功率最高 3、乙肝患者和乙肝病毒携带者不需要接种乙肝疫苗 4、非正常出生的婴儿(包括剖腹产)和出生后体质较差的婴儿最好推迟接种时间 5、发烧患者和先天性免疫疾病患者或某些重症患者，应根据医院判断是否接种乙肝疫苗 6、新生儿第一针必须在出生后24小时以内接种，越早越好；除新生儿外，打乙肝疫苗需先做乙肝五项检查，根据检查结果确定是否需要注射乙肝疫苗。 7、打乙肝疫苗时，应做好登记，因乙肝疫苗需按接种程序注射。 8、乙肝疫苗注射时一定要放松心情和保持肌肉不紧张，否则可能会导致注射不顺畅，吸收不好等问题，以及药物进入体内不适应而产生眩晕，脸色苍白，也就是俗称的晕针。 9、注射后局部应保持卫生，最好三天内不要擦洗，以免抓破引起局部感染。 10、目前一般按照0-1-6方法注射，即第一针后1个月接种第二针，6个月后接种第三针。为达到最佳的效果，应按时全程接种。,接种乙肝疫苗的人群,处于HBV感染高度危险状态的易感者（未感染过HBV的人）应接种乙肝疫苗。主要包括： 全部新生儿及幼儿园未接种过乙肝疫苗的孩子； 传染科、口腔科、血液室、透析室和经常接触血液的工作人员； 新加入某一群体的人员，如新入伍的战士、新入学的大学生； 从事食品服务行业者及保育工作人员； 发育障碍者，收容所中的患者和工作人员； 血液透析患者； 使用血液制品者； 器官移植前的患者；需长期应用免疫抑制剂者； 乙肝病毒携带者的家庭接触者； 注射毒品成瘾者；长期教养机构中的犯人。,一般情况下，打了乙肝疫苗后不会影响日常工作和生活，至今尚未见有关于注射后引起严重副作用的现象，只有少数人出现接种部位红肿、硬结、疼痛，手臂酸重或发热、恶心、呕吐、乏力、皮疹等与一般疫苗接种大致相仿的轻微反应，多在13天内不治自愈。,预防乙肝从新生儿开始,乙肝疫苗可以成功预防乙肝病毒的感染，新生儿一出生就接种乙肝疫苗，基本可以确保将来不得乙肝。,不良反应,乙肝疫苗自1979年问世以来，经过20多年的大规模应用和观察，至今尚未见到有关注射后引起严重不良反应的报道，只有少数人出现接种部位红肿、硬结、疼痛、手臂酸重或发热、恶心、呕