课件：结核病防治实验室痰检工作——一讲痰涂片镜检.ppt

第一节 结核病防治实验室痰检工作,第三章 结核病管理及最新进展,第一讲 痰涂片镜检,本节内容导航,痰检工作的目的和意义 国家结核病规划（NTP） 与结核病细菌学实验室网络 检查对象 结核菌的形态和结构,电子显微镜下的结核分枝杆菌 染色特性 萋尼氏染色镜下形态,本节内容导航,痰涂片操作程序 常见标本的收集及处理 痰标本的采集容器 痰标本的采集 留取标本 痰标本的运送 标本的性状 直接涂片的步骤 染色的步骤,痰检工作的目的和意义,在结核病控制工作中痰结核菌涂片镜检对于发现传染源、确定诊断和化疗方案、考核疗效、评价防治效果具有重要意义 是国家结核病控制规划(NTP) 的重要组成部分，在现代结核病控制工作中起着不可缺少的重要作用,1,2,国家结核病规划（NTP）与 结核病细菌学实验室网络,结核病细菌学实验室通过日常、有效的细菌学（病原学）诊断，发现传染源、决定化疗方案和评价治疗效果为实现NTP的重要目标服务 痰涂片镜检服务必需在健全的细菌学实验室网络中才能实现,1,2,国家结核病规划（NTP）与 结核病细菌学实验室网络,结核病高负担国家NTP主要通过实施现代结核病控制策略（DOTS）来实现 痰涂片镜检是结核病细菌学实验室服务中最重要的内容之一。痰涂片镜检发现传染源是DOTS策略的重要组成部分,3,4,结核病症状体征,咳血或伴 有血痰,持续咳嗽 咳痰超过 3周,检查对象,胸部X线异常,凡因结核病症状求诊及转诊的可疑肺结核患者，均应进行痰直接涂片检查,确定诊断的涂片检查应采集3个合格的痰标本 就诊当时在门诊留一份“即时痰”标本，同时给患者2个痰盒，嘱患者留取“夜间痰”和“晨痰”，于次日交验,检查对象,检查对象,治疗中或复诊随访病人按期每次送检两份痰(当 日即时痰、当日或次日晨痰） 初治涂阳患者在疗程满2、5、6月时 复治涂阳患者在疗程满2、5、8月时,经萋尔-尼尔逊染色后在显微镜内蓝色背景下呈红色杆状,宽度为0.30.6um，生 长发育期间形成分枝,光学显微镜下为细长稍弯曲，两端钝圆的杆菌 ，菌体长度多为1.53.5um,结核菌的形态和结构,结核分枝杆菌,细胞质,核物质,细胞壁,细胞膜,结核分枝杆菌,结核菌的形态和结构,电子显微镜下的结核分枝杆菌,结核菌的形态和结构,结核杆菌用革兰氏染色，着色较差但呈兰色， 列为G菌 结核杆菌用普通的染色方法不易着色，在染液 中加入石炭酸后才可着色,1,2,结核菌的形态和结构,抗酸染色时，因结核杆菌菌体含有大量脂质，其脂质的含量占分枝杆菌之首，占菌体干重的40%，因脂质的含量大，所以不易着色，但经过加热或者提高石炭酸的浓度、延长染色时间等处理以后才能着色,3,结核菌的形态和结构,一旦着色，不易被盐酸酒精脱色，而其他细菌均被脱色，把不被盐酸酒精脱色的细菌称为抗酸菌，这种方法称为抗酸染色法,4,结核菌的形态和结构,结核菌的形态和结构,【胸腹水】 【脑脊液】 【尿标本】 【脓液、病灶组织】 【痰标本，肺部深咳的痰】,痰涂片操作程序,【胸腹水的采取】 于试管中加20%的枸橼酸钠35滴，或10%的草酸钾 56滴，可防止1520ml 胸腹水凝固。无菌采取胸腹 水以后应立即送检。可采取离心集菌或漂浮集菌法检查,痰涂片操作程序,【纤维支气管镜刷检物】 可将毛刷直接进行抗酸染色,也可将刷检标本洗脱于装有无菌生理盐水的试管中,再涂片检查,痰涂片操作程序,【脑脊液的采取】 无菌手术取得脑脊液以后，3000转离心30分钟，取沉淀物涂片染色检查 结核性的脑脊液放在冰箱中4过夜以后，会在液面形成一个倒漏斗状的薄膜，取此薄膜涂片染色镜检,痰涂片操作程序,【尿标本的采取】 通常留取清晨第一次全尿或中后段夜尿,也可留取24小时的尿液，放冰箱或阴凉处，静置，去上清，留沉淀部分5060ml送检，取此沉淀液，经3000转，离心30分钟，取沉淀部分2ml直接涂片，染色检查,痰涂片操作程序,脓液直接涂片染色镜检 病灶组织或干酪样组织需充分研碎后再涂片检查,痰涂片操作程序,当前,贵州省疾病预防控制机构结核病实验室进行痰检 工作的耗材由项目统一提供： 螺旋盖痰瓶 可密封的塑料盒 可密封的蜡纸盒,痰涂片操作程序,痰涂片操作程序,痰涂片操作程序,痰涂片操作程序,痰标本的采集,痰容器应标明病人姓 名、编号（检查项目 和容器序号1、2、3 （1当日即时痰，2 夜间痰，3次日 晨痰）,通用螺旋盖 痰瓶，或可 密封塑料盒 蜡纸盒收集 痰标本,如：张三，涂片 581，582 58-3,痰涂片操作程序,痰瓶上标明病人姓名，初诊门诊序号（或随访病人登记号）,痰标本留取后，痰盒切勿倒置、严防痰液外溢，应立即送检,进行细菌学检查时，应在登记本和检验报告单上注明标本性状,留取标本,痰涂片操作程序,留痰时应嘱咐病人尽量深咳，留取痰量35毫升 干酪痰、血痰、黏液痰为合格的标本唾液属不合 格痰标本,难以获得合格标本时，也应进行细菌学检查，但 应注明标本性状，以供分析结果时参考 需送上一级实验室检查的痰标本应置4冰箱保存， 外送前认真核对检验单与痰瓶上标注，放专用的冰 盒内运送，或用纸袋、塑料袋封装扎牢后顺序放入 包装盒，盒外注明请勿倒置标志,痰涂片操作程序,2019/9/1,31,可编辑,合格的痰标本应是患者深呼吸后，由肺部深处咳出的分泌物,痰涂片操作程序,【干酪痰】 标本外观以黄色(或奶酪色)、脓样、团块状的肺部 分泌物为主，粘度较粘液痰低，制片时较易涂抹 涂片染色后镜检，可发现大量脓性炎症细胞、肺上 皮脱落细胞 由于此类标本是由肺部深处咳出，对肺结核的诊断 最有价值，故抗酸杆菌(以下简称AFB)的检出率较高,痰涂片操作程序,【血痰】 此类标本是因粘液痰或干酪痰标本中混有血液而形成 颜色为褐色或深褐色、鲜红色或伴有血丝 涂片染色后镜检除能够观察到粘液痰或干酪痰的细胞 特征外，含新鲜血液的标本中可见到被染色的血细胞 由于含血标本易干扰AFB镜检的结果，故在制片时应尽 量避免挑取含血标本,痰涂片操作程序,痰涂片操作程序,【粘液痰】 标本外观以白色、粘稠度较高的肺部和支 气管分泌物为主，制片时需仔细涂抹 此类标本的AFB检出率较唾液高,痰涂片操作程序,【粘液痰】 涂片染色后镜检时，镜下可见支气管内膜纤毛柱状上皮细胞 (细胞较长且形态不规则、细胞核和细胞质着色均较深，细胞 一端可见着色较浅的纤毛)，伴有少量肺上皮脱落细胞(多数 为圆形、细胞核较小且着色较细胞质深，核质比大于 1:3)、 脓性炎症细胞(卵圆形、细胞核占细胞比例较大且着色较 深，核质比低于 1:1)、口腔脱落细胞及口腔寄生菌,【唾液】 目视观察标本整体外观，以透明或半透明水样、粘度 较低的口腔分泌物为主，标本中有时伴有气泡 涂片染色镜检时，镜下可见少量口腔上皮脱落细胞(形 态不规则、细胞核着色较细胞质深，核质比接近或大 于 1:2)和口腔内寄生菌，有时可见食物残渣 由于此类标本进行AFB检查时的检出率很低，用于对患 者确定诊断时是不合格的标本,痰涂片操作程序,痰涂片操作程序,细胞核质比，白细胞，说明痰的质量较好,痰涂片操作程序,上皮细胞多，说明标本质量差,痰涂片操作程序,【清洁无划痕的新玻片脱脂、干燥】 编号 无磨砂面的玻片，需用玻璃刻刀或用标签纸 有磨砂面的玻片，可用铅笔编号,痰涂片操作程序,【清洁无划痕的新玻片脱脂、干燥】 使用折断的竹签茬端，取痰标本中干酪样或脓样 0.050.1毫升，涂于玻片右2/3处，均匀涂抹 10x20毫米大小的椭圆形痰膜 痰膜朝上，待自然干燥(一般20分钟),痰涂片操作程序,1020mm,20mm,10mm,痰涂片操作程序,复染 (亚甲兰),脱色 (盐酸酒精),初染 (碱性复红),染色过程,痰涂片操作程序,【初染】 将玻片放置染色架上，玻片间距保持10毫米以上距离 火焰固定（5秒钟将玻片过火4次） 滴加石炭酸复红染液，盖满玻片 火焰加热至出现蒸汽，勿使沸腾 脱离火焰，保持5分钟,痰涂片操作程序,痰涂片操作程序,【脱色】 流水自玻片一端清 缓冲洗染色液，沥 去玻片上的水，滴 加脱色液，保持1 分钟,痰涂片操作程序,【复染】 滴加亚甲蓝复染 液，保持30秒钟 流水冲洗，沥去 玻片上的水 玻片干燥后镜检,将涂片排放在染色架上，注意间隔,痰涂片操作程序,滴加碱性复红,痰涂片操作程序,加热,痰涂片操作程序,流水冲洗,痰涂片操作程序,脱色,痰涂片操作程序,流水轻缓冲洗,痰涂片操作程序,复染,痰涂片操作程序,流水洗去复染液,痰涂片操作程序,在玻片架上自然干燥,痰涂片操作程序,滴加亚甲兰复染液保持1分钟,1,2,3,4,5,6,7,将涂片排放在染色架上,滴加碱性复红染色液加热 出现蒸汽后，保持5分钟,流水轻缓冲洗,滴加脱色液，保