真菌调查研究与特异性脱敏疗法题库.doc

目 录 课题研究工作报告 科学技术报告一、课题设计简介二、研究目的、意义及国内外概况三、主要研究、试验内容和临床应用四、推广和应用前景临床研究报告文献综述及参考文献附件荆州市科技局文件查新检索论文发表复印件致谢一 课 题 研 究 工 作 报 告一 课题的提出1. 1应湖北省卫生厅课题批准文号鄂卫发（2005）51号JX2B10即湖北省气传致敏真菌研究下达的任务，我院很荣幸地担任了荆州市气传真菌研究这一子课题的调查研究工作。真菌是自然界中分布最广的一类生物体，它存在于地表、土壤、水、空气以及一切器物的表面或内部。真菌变态反应是一种常见的、世界性变态反应疾病，它包括过敏性鼻炎、过敏性咽喉炎和支气管哮喘及变态反应性皮肤病的发生，近年来，在全球范围内其发病率呈逐年上升的趋势。在我国有继续增加的趋势。对于真菌变态反应的研究虽然已有半个多世纪，但至今仍是临床变态反应中一重要的方面，还有大量的问题未得到解决。并且随着科学技术的发展，对于真菌变态反应又出现了不少新的认识和新的领域。真菌变态反应已成为职业变态反应的主要病源之一。在我国，很多年前开始入手真菌变态反应的临床及实验室研究。通过数以万计病人的临床诊治及实验室空气中真菌曝片、曝皿真菌培养等调查，对我国的致敏真菌种类、菌种保存、真菌抗原提纯等做了一系列的工作。对于真菌所致的过敏性肺炎、肺泡炎、变态反应性肺支气管曲菌症等均已开展了科研工作，并取得了一些实践经验，为真菌变态反应的综合研究奠定了必要的基础。我科于 2007年2月1日至2008年1月31日收集全年气传真菌样品，在显微镜下统计，定量获得每天及全年的真菌数量，并于2008年2月至2009年3月根据优势菌群进行过敏原检测并针对性进行脱敏治疗。为临床医师和患者提供预防、诊断和治疗的依据，并针对过敏患者单一个体给予对应的脱敏治疗及预防措施。1.2 课题的研究时间 我院皮肤科从2007年2月1日至2009年3月1日结束历时2年零1个月。1.3 课题的研究地点 门诊附楼四楼顶楼平台及皮肤科门诊变态反应室。 二 课题的准备2.1 材料与方法2.1.1采用全国统一标准制定的空气真菌取样器、软性凡士林粘附剂、琼脂甘油染色液。全国统一标准的载玻片及盖玻片。2.1.2根据我市优势菌群选择三组真菌混合变应原试剂（试剂由北京协和医院提供），分别为多价真菌、多价真菌、多价真菌。对疑似气传真菌过敏的45例患者做皮肤过敏原试验。2.1.3根据试验结果进行针对性特异性脱敏治疗（试剂由北京协和医院提供）。根据过敏原试验结果选择相应的变应原试剂进行脱敏治疗。脱敏治疗时试剂浓度由低至高，计量由小到大，具体方法方法参见北京协和医院乔秉善教授主编的变态反应学实验技术标准1.2.2 技术条件课题的设计者及组织者多次参加湖北省气传致敏真菌调查研究培训班且从事变态反应这一学科十年，所有真菌变应原检测及脱敏试剂均由北京协和医院提供。三 结果 全年均可见真菌孢子，共收集真菌种类20多种，孢子总量为21333粒，其中最常见的有链格孢、锈菌、黑粉菌等优势菌群。我市30例气传致敏真菌患者治疗前多价真菌、多价真菌、多价真菌三组真菌混合变应原阳性检测率分别为86.66%、76.66%、63.33%等，特异性脱敏治疗后多价真菌、多价真菌、多价真菌 的阳性检测率分别为13.33%、13.33%、10.00%等.二者阳性率有显著性差异。特异性脱敏治疗后总有效率达86.66% 。 气传致敏真菌患者治疗后真菌变应原的阳性检测率显著下降，治疗疗效显著。二 科 学 技 术 报 告一 课题设计简介真菌是自然界中分布最广的一类生物体，它存在于地表、土壤、水、空气以及一切器物的表面或内部。近年来在变态反应临床上发现，在职业性呼吸道变态反应中，真菌变态反应已成为最主要的致敏因素之一。在食物变态反应与药物变态反应中不少病人实际上是由于对食物中或药物中的某些真菌成分的变态反应。在农村或林区，有时由于气候及植物生长的特殊条件，真菌过敏可以成为季节性集体发病的重要因素。例如1983年Kawai曾报告过一种发病在日本的夏季型过敏性肺炎，发病者均居住在陈旧而潮湿的木屋之中。1968年，Fink首先报道有些长期生活在空调器的居室内的人出现咳嗽、气促、肺部阴影等异常，证实是由于长期吸入生长在空调器上的干草小多孢霉或嗜热性放线菌引起的肺部变态反应。在国内，自从1980年报道蘑菇肺以来，在全国各地相继发现了一大批蘑菇肺病人。 对于真菌变态反应的发病机理的实验研究尚不够深入，对于真变态反应的诊断及防治方法亦不够满意。真菌变应原的分离提纯工作正在进行，对少数致敏真菌的变应原成分虽已作了一些初步的分析，但还远未得出公认的结论。空气中经常飘散着数以亿万计的真菌孢子和菌丝，通过空气中气流传播的真菌称为气传真菌,它是主要过敏原。通过气传真菌的播散种类、数量、季节性分布而制定的“气传真菌图谱”，是临床医师和过敏性疾病患者诊断、预防、治疗的重要依据。全国性的空气中致敏真菌调查于1988年开展过，湖北省有武汉地区、襄樊地区等参予过此次调查。荆州市在这方面还是空白。真菌变态反应是一种常见的、世界性变态反应疾病，它包括过敏性鼻炎、过敏性咽喉炎和支气管哮喘及变态反应性皮肤病的发生，近年来，在全球范围内其发病率呈逐年上升的趋势。在我国有继续增加的趋势。对于真菌变态反应的研究虽然已有半个多世纪，但至今仍是临床变态反应中一重要的方面，还有大量的问题未得到解决。并且随着科学技术的发展，对于真菌变态反应又出现了不少新的认识和新的领域。真菌变态反应已成为职业变态反应的主要病源之一。在我国，很多年前即开始入手真菌变态反应的临床及实验室研究。通过数以万计病人的临床诊治及实验室空气中真菌曝片、曝皿真菌培养等调查，对我国的致敏真菌种类、菌种保存、真菌抗原提纯等做了一系列的工作。对于真菌所致的过敏性肺炎、肺泡炎、变态反应性肺支气管曲菌症等均已开展了科研工作，并取得了一些实践经验，为真菌变态反应的综合研究奠定了必要的基础。对于上述过敏性疾病患者给予抗过敏等对症治疗，只能暂时缓解症状，春秋季节容易反复发作，如能找到过敏原，则可以从根本上预防和治疗此类疾病。当前，国际上在发达国家中，对气传致敏真菌的研究正朝向更为细致的区域化研究领域发展。我国有关真菌的研究始于多年前，为我国医学界特别是临床变态反应学界对过敏症的研究提供了富贵的资料。自1988年全国范围内气传真菌调查至今，时间过去已近二十年，这近二十年来，伴随我国社会、经济各方面的持续性飞速发展，国内各地区真菌情况发生了巨大的根本性变化，空气中各类真菌的含量也随之发生了彻底的改变，荆州地区的真菌种类也发生了很大的改变，因此，近二十年前粗略的真菌调查资料，已无法满足今天临床医学对过敏性疾病患者诊断、预防治疗的需要。而且，荆州地区的气传真菌的资料全属空白。在1988年的全国气传真菌调查研究中，代表湖北省参加调查研究的医疗单位有6家，其中，集中在武汉市城区的医疗单位就有4家，调查的资料根本无法代表我市气传真菌的实际概况，因此，实际上我市气传真菌的资料全属空白。探明一个地区的气传致敏真菌的基本状况，为临床医师和患者提供预防、诊断和治疗的依据，针对过敏患者单一个体给予对应的脱敏治疗，既是本课题研究的主要目的，也是今后临床变态反应学科中，过敏症研究工作者的重要工作。二、研究的目的、意义和国内外概况真菌是自然界中分布最广的一类生物体，是自然界生态平循环中最主要的平衡环节之一。它们广泛存在于人们生活的各个角落，尤其是湿润的环境中。霉菌在各个几季节均可存在，真菌具有感染性、致毒性、致癌性、致畸性以至于致敏性等都是威胁人类健康乃至生命的大问题，在变态反应立面，临床上最使人瞩目的是真菌的致敏问题，亦即真菌性变态反应。致敏真菌具有分布广、产量大、孢子小等特点，在阴暗、潮湿、温暖、通风不良的情况下生长旺盛。在日常生活中，人们每时每刻都在通过不同的途径暴露在真菌中，包括吸入、接触及食入途径。孢霉或嗜热性放线菌引起的肺部变态反应。在国内，自从1980年报道蘑菇肺以来，在全国各地相继发现了一大批蘑菇肺病人。对于真菌变态反应的发病机理的实验研究尚不够深入，对于真变态反应的诊断及防治方法亦不够满意。真菌变应原的分离提纯工作正在进行，对少数致敏真菌的变应原成分虽已作了一些初步的分析，但还远未得出公认的结论。在早年对于真菌变态反应的研究工作做得最深入者，美国的S。M。Feinberg，他在芝加哥从1936年到1942年的6年中，在空气中进行连续真菌培养以观察真菌过敏的季节性影响。他发现在芝加哥地区空气中的真菌以交链孢霉及着色芽生霉为最多，它们在全年中以夏季出现的量为最多，此时真菌变态反应病发生亦最多。1939年，Wittich发现谷尘中的锈霉及黑粉霉孢子是明尼苏达州哮喘病人的主要致敏病因。对于真菌变态反应的研究虽然已有半个多世纪，但至今仍是临床变态反应中一个重要的方面，还有大量的问题未得到解决。并且随着科学技术的发展，对于真变态反应又出现了不少新的认识和新产研究领域。真菌变态反应已大大超出了传统的速发型变态反应的范畴，很多的真菌变态反应是属于免疫复合物型、细胞免疫型或多型混合的变态反应。有不少的真菌变态反应其菌源不仅来自病人的生活环境而且还来自病的工作环境，真菌变态反应已成为职业性变态反应的主要病源之一。在我国，自从1956年第一个变态反应临床及科研基地在北京协合医院建立之后，经过临床实践，50年代后期就发现在临床上有一大批病人每届雨季发病，环境中温度愈高发病愈频愈重。从1957年起，即开始入手真菌变态反应的临床及实验室研究。通过数以万计病人的临床诊治及实验室空气中真菌曝片、曝皿真菌培养等调查，对我国的致敏真菌种类、菌种保存、真菌抗原提纯等做了一系列的工作。并通过举办进修班，专题学习班等培训，将此工作推广全国。对于真菌所致的过敏性肺炎、肺泡炎、变态反应性肺支气管曲菌症等均已开展了科研工作，并取得了一些实践经验，为真菌变态反应的综合研究奠定了必要的基础。（一）研究目的：收集荆州市一年中每日空气中真菌漂散的种类和数量,拍摄气传真菌的显微特征,将每日收集到的真菌资料进行整理,鉴定和分类,制定气传真菌图谱，掌握全市一年中气传真菌漂散的规律性和季节性的消长情况，掌握全市空气中主要的致敏真菌。针对我市空气中主要气传致敏真菌，为患者提供预防的依据，给临床医师提供准确的脱敏剂和治疗方案。 （二）研究任务 1、收集全市一年中每日空气中真菌漂散的种类、数量 (1)气传真菌曝片:在我院选一个点,每天空气中曝片一张,连续曝片一年。 (2)气传真菌日记:将每天空气中的曝片在显微镜下阅片,分别记录其种类和数量。(3)气传真菌类别、数量总结:一年后,对收集到的一年中每日空气中漂散的真菌种类、数量进行整理归类,计算全年气传真菌曝片的全部种类和数量。 2、掌握全市一年中气传真菌漂散的规律性和季节性的消长情况 （1）制定全市各类气传真菌图谱：将全年整理归类的气传真菌曝片进行绘图，找出一年中各类气传真菌漂散的规律，制定各类气传真菌图谱。 （2）找出各类气传真菌季节消长规律：在全年整理归类的真菌曝片的绘图中，分析各类气传真菌季节性的消长情况，找出各类气传真菌季节性的消长规律。 3、掌握我市气传致敏真菌的基本特点和显微特征，拍摄我市气传致敏真菌的大体形态和显微特征，编辑、整理、归类、成册。 4、掌握我市空气中主要的致敏真菌（1）气传真菌过敏原皮肤试验：选择我市“过敏症”患者进行气传真菌过敏原皮肤试验，分析、找出气传真菌过敏原皮肤试验中主要的致敏真菌。（2）找出我市空气中主要的致敏真菌：将我市空气中气传真菌图谱与过敏原皮肤试验中主要的致敏真菌进行比较，找出我市空气中主要的致敏真菌。 （3） 根据我市优势菌群选择三组真菌混合变应原试剂（试剂由北京协和医院提供），分别为多价真菌、多价真菌、多价真菌。对疑似气传真菌过敏的45例患者做皮肤过敏原试验。（4）根据试验结果进行针对性特异性脱敏治疗（试剂由北京协和医院提供）。根据过敏原试验结果选择相应的变应原试剂进行脱敏治疗。脱敏治疗时试剂浓度由低至高，计量由小到大，具体方法方法参见北京协和医院乔秉善教授主编的变态反应学实验技术标准.三、主要研究、试验内容和临床应用过敏症是一种常见的、世界性变态反应疾病，它可以引起各种过敏性疾病如过敏性鼻炎、过敏性咽喉炎、支气管哮喘和过敏性皮肤病的发生，近年来，在全球范围内其发病率呈明显上升趋势。当前，国际上在发达国家中，对气传致敏的研究正朝向更为细致的区域化研究领域发展，有些国家的真菌预报已连同气象预报一起，每天在电视台中播出，以指导医师的诊断和患者的预防。我国有关真菌的研究始于1957年，北京协和医院变态反应科的专家们首次发现，此后，各地区有关气传真菌的种类、播散数量、季节分布规律等的文章均有报道。课题的研究人员都是经过“湖北省气传真菌曝片调查研究培训班”认真正规培训过，对课题的基本方法及工艺流程熟练掌握，并已准确无误地掌握气传真菌的显微特征。课题的设备相对简单，显微镜及显微照相是整个课题的基础设备，我院检验科是我院重点科室、各种设备齐全。与我科合作非常密切、和谐。整个课题由特定的人员在专门的实验场所进行。近年来,“过敏症”的发病率在全球范围内呈逐年上升的趋势,调查一个地方的气传致敏真菌的基本状况，可为临床医师和患者提供预防、诊断和针对性治疗的重要依据，减少治疗的盲目性。过敏症作为一种世界性变态反应性疾病，它可导致多种过敏性疾病的发生，过敏性鼻炎、过敏性咽喉炎、支气管哮喘和过敏性皮肤病，在全世界其发病率呈明显上升趋势。收集一年中气传真菌的显微特征，绘制气传真菌图谱，并与“过敏症”患者吸入组过敏原皮肤试验中主要的致敏真菌进行比较，找出我市空气中主要的致敏真菌。为由真菌导致的各种过敏性疾病患者提供准确的预防措施，为临床工作者缩小查找过敏原的范畴，同时提供特异性的脱敏治疗。为过敏性患者减轻疾苦，为临床工作者提供更有效的治疗措施。四 推 广 和 应 用 前 景本研究表明了各地区的气传真菌的种类和数量的异同。结合本地区的调查情况，选择本地区相应的真菌变应原试剂对疑似真菌过敏的患者作真菌过敏原皮肤点刺试验，为临床医生提供诊断及治疗依据。并根据真菌过敏原皮肤点刺试验结果对患者进行针对性的脱敏治疗，取得了良好的效果。其经济效益及应用前景是不可估量的。值得荆州市各家医院推广和应用。三 临 床 研 究 报 告荆州市气传致敏真菌的调查研究与特异性脱敏疗法(湖北省荆州市中心医院皮肤科 荆州 434020) 摘要 目的 调查荆州市气传真菌的种类、数量变化及飘散规律，了解优势菌群与过敏性疾病的关系，并进行特异性脱敏疗法，为荆州市气传真菌过敏患者的防治提供参考。方法 于 2007年2月1日至2008年1月31收集全年气传真菌样品，在显微镜下统计，定量获得每天及全年的真菌数量，于2008年2月至2009年3月根据优势菌群进行过敏原检测并针对性进行脱敏治疗。结果 全年均可见真菌孢子，共收集真菌种类20多种，孢子总量为21333粒，其中最常见的有链格孢、锈菌、黑粉菌等优势菌群。我市30例气传致敏真菌患者治疗前多价真菌、多价真菌、多价真菌三组真菌混合变应原阳性检测率分别为86.66%、76.66%、63.33%等，特异性脱敏治疗后多价真菌、多价真菌、多价真菌的阳性检测率分别为13.33%、13.33%、10.00%等.二者阳性率有显著性差异。特异性脱敏治疗后总有效率达86.66% 。结论 气传真菌全年均有分布并具有较强的致敏性，气传致敏真菌患者治疗后真菌变应原的阳性检测率显著下降，治疗疗效显著。关键词 气传真菌；荆州市；致敏性 ；脱敏疗法真菌在自然界中分布广泛，其孢子在空气中飘散、传播，是主要的吸入性致敏原之一，常引起过敏性鼻炎、过敏性哮喘和过敏性结膜炎等，成为超敏反应疾病的重要致敏原之一。为探明荆州市空气中气传真菌的种类、数量及其分布规律，我科采用曝片法收集了2007年2月1日2008年1月31日全年气传真菌的数量、种类，并进行分析总结，其结果对研究我市气传真菌的种类、数量和散布规律具有重要的科学意义。并于2008年2月1日至2009年 3月1日根据我市优势菌群为气传真菌过敏患者做皮肤过敏原试验，并根据试验结果进行特异性脱敏治疗。1 材料与方法111空气真菌取样器 采用全国统一标准制定的空气真菌取样器。112 气传真菌取样方法 将载玻片表面涂上凡士林后，将其置于真菌取样器中，使其于空气中暴露24小时，每日曝片一张。113 染色方法 将适量甘油复红放于载玻片上，于酒精灯上加热使其溶化后加盖22/24cm的盖玻片即可。114 真菌分类及计数 参阅标准真菌制片及其相关书籍，在显微镜下对所取真菌样本进行分类、计数，逐日观察各种真菌在不同时期、不同季节的数量及消长规律。11.5根据我市优势菌群选择三组真菌混合变应原试剂（试剂由北京协和医院提供），分别为多价真菌、多价真菌、多价真菌。对疑似气传真菌过敏的45例患者做皮肤过敏原试验。1. 1. 6根据试验结果进行针对性特异性脱敏治疗（试剂由北京协和医院提供）。根据过敏原试验结果选择相应的变应原试剂进行脱敏治疗。脱敏治疗时试剂浓度由低至高，计量由小到大，具体方法方法参见北京协和医院乔秉善教授主编的变态反应学实验技术标准。1.1.7. 疗效判断标准 痊愈为气传致敏真菌患者经特异性脱敏治疗后自觉症状消失，过敏原检测结果由阳性转化为阴性，好转为自觉症状减轻，过敏原检测结果由阳性转化为弱阳性，无效自觉症状无明显改善，过敏原检测结果无变化。1.1. 8统计学处理 记数资料采用2检验，计量资料采用t检验.2 结果全年共收集统计真菌孢子21333个，种类20种。其中最主要的为链格孢菌、锈菌、黑粉菌、疣蠕孢菌、德氏菌、小链孢菌。一年中统计的真菌孢子中最多为链格孢菌，占全年真菌孢子数的28.41%，以下依次为锈菌、黑粉菌、疣蠕孢菌、德氏菌、小链孢菌，分别占全年真菌总数量的20.59%，5.498%、2.995%、2.620%。它们为荆州市的常见真菌孢子。通过对45例疑似气传真菌过敏的患者做皮肤过敏原试验，结果有30例患者对多价真菌、多价真菌、多价真菌有不同程度的阳性反应。结果见表1。从表1可看出气传致敏真菌患者多价真菌、多价真菌、多价真菌 的阳性检测率分别为86.66%、76.66%、63.33%等。对30例检测结果为阳性的患者行特异性脱敏治疗后检测结果见表2，从表2可以看出特异性脱敏治疗后多价真菌、多价真菌、多价真菌的阳性检测率分别为13.33%、13.33%、10.00%等，比治疗前显著降低，经统计学处理有显著意义（P0.05）。特异性脱敏治疗后患者痊愈20例，有效6例，无效4例，总有效率为86.66%。3 讨论表1 组别 治疗前阳性例数（n） +(n) +(n) +(n) +(n) 阳性率（%） 多价真菌 26 2 18 5 1 86.66多价真菌 23 5 15 2 1 76.66多价真菌 19 2 8 9 0 63.33表2 组别 治疗后阳性例数（n） +(n) +(n) +(n) +(n) 阳性率（%） 多价真菌 4 3 1 0 0 13.33多价真菌 4 2 1 1 0 13.33多价真菌 3 2 1 0 0 10.00真菌是自然界分布最广泛的一类生物体，其在空气中的含量亦相当高。近年来在变态反应临床上发现，真菌引起的变态反应已成为最主要的致敏因素之一，它可导致过敏性鼻炎、支气管哮喘及过敏性肺炎等的发生。特别是各种职业性真菌变态反应的发生率增高，在美国，其农业人口经常接触谷物，由于真菌吸入而引起急性或慢性农民肺的症状。1980年日本的Takeshi报道在95例过敏性肺炎病人都是吸入嗜热性放线菌、干草小多孢霉、木霉等引起。我国地处温带和亚热带，雨量充沛，真菌赖以滋生的各种植被丰富，是真菌繁殖生长的有利条件2。我市地处中南地区，属亚热带大陆性气候，温暖潮湿，适宜真菌滋生。探明我市的气传真菌的种类、数量以及飘散规律，对我市真菌变态反应的临床诊断、预防及治疗具有重要