药典中常见的定量分析方法简介.ppt

药典中常见的定量分析方法概述,药物的定量分析 准确测定药品有效成分或指标性成分的含量 是评价药品质量、判定药物优劣的重要手段,化学分析,仪器分析,重量法,容量法,分光光度法,电化学分析法,色谱法,优点 仪器设备简单 易于操作、速度较快 成本低 准确度和精密度都较高。,化学分析法的特点,缺点 灵敏度低，药物用量大 不适合含量少的药物 专属性不如仪器分析法（易受到干扰）,在中外药典中广泛应用于原料药的含量测定；,仪器分析法的特点,准确度和精密度越来越高 专属性也较强 色谱法：先分离后测定，适合组分复杂、干扰成分较多、难以用滴定分析法测定含量的品种 国内外药典仪器分析法占绝大部分 高效液相色谱、分光光度法,化学分析法,一、重量分析法 A挥发法 B萃取法 C沉淀法 取本品约0.3g，精密称定，加水50ml溶解后，加稀盐酸l0ml，摇匀，用乙醚振摇提取5次，第一次100ml，以后每次各25ml，合并乙醚液，用水洗涤2次，每次5ml，合并洗液，用乙醚10ml振摇提取，合并前后两次得到的乙醚液，置105恒重的蒸发皿中，低温蒸去乙醚，并在105干燥至恒重，精密称定，所得残渣重量与1.087相乘，即得供试品中含有药物的重量。 请问该法是什么方法？,二、酸碱滴定法 的弱酸都可用碱滴定液直接滴定； 的弱碱都可用酸滴定液直接滴定； 精密称取供试品适量，置于锥形瓶中，加入适当的溶剂使其溶解，精密加入定量过量的酸（碱）滴定液待反应完全后，加指示液数滴，再用酸（碱）滴定液滴定至规定的突变终点颜色，此为 ， 滴定法,三、氧化还原滴定法 氧化还原滴定法有哪些方法？ 碘量法的指示剂是什么？ 剩余碘量法回滴定用的标准溶液是什么？ 亚硝酸钠滴定法的标准溶液是什么？终点指示方法是什么？,测定有机碱及其氢卤酸盐、磷酸盐、硫酸盐或有机酸盐、以及有机酸碱金属盐类药物的含量的方法是什么滴定法？ 高氯酸法的标准溶液是什么？指示剂是什么？溶剂是什么？,应用较广的沉淀滴定法是什么？其指示剂是什么？ 配位滴定法的标准溶液是什么？指示剂是什么？,紫外分光光度法,基本原理,单色光辐射穿过被测溶液时，在一定浓度范围内被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层厚度成正比。 AECl,应用及注意事项,分析对象：含有共轭体系或芳香环等发色基团，或在一定条件下加入显色剂或经过处理显色后能对可见光产生吸收的药物。 测定方法： 对照液：同批次的溶剂 吸收池：1cm的石英池 波长：在规定的吸收峰波长正负2nm以内，测试几个点，以吸收度最大的波长为测定波长。 吸光度读数：0.30.7 狭缝宽度：小于吸收带半宽度的十分之一,含量测定方法,标准品对照法 Cx（AxAR）CR,卡马西平含量测定 取本品，精密称定，加乙醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含10ug的溶液。照紫外可见分光光度法，在285nm波长处测定吸光度；另取卡马西平对照品，同法测定，计算，即得。,硫喷妥钠含量测定 取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量（约相当于硫喷妥钠0.25g），置500ml量瓶中，加水使硫喷妥钠溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，用0.4%氢氧化钠溶液定量稀释制成每1ml中约含5g的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录A），在304nm的波长处测定吸光度；另取硫喷妥钠对照品适量，精密称定，用0.4%氢氧化钠溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含5g的溶液。同法测定。根据每支的平均装量计算。每1mg硫喷妥钠相当于1.091mg的C11H17N2NaO2S,吸光系数法 盐酸氟奋乃静的含量测定：取本品，精密称定，加盐酸溶液（91000）溶解并定量稀释制成每1ml中约含10g的溶液，照分光光度法，在255nm的波长处测定吸收度，吸收系数为553593。,贝诺酯片含量测定 取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于贝诺酯片15mg），置100ml容量瓶中，加无水乙醇适量，振摇，微温，使贝诺酯溶解后，放冷。加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置100ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，按照紫外可见分光光度法，在240nm得波长处测定吸光度，按C17H15NO5得吸光系数为745计算，即得。,计算分光光度法 比色法 标准曲线法,波长 吸光度 杂散光,仪器的校正和检定,对溶剂的要求,截止波长：溶剂的截止波长是指该溶剂可以在紫外检测器 中使用的最低波长,低于该波长后,溶剂会有紫 外吸收。,高效液相色谱法,基本原理,高效液相色谱法是采用高压输液泵将规定得流动相泵入装有填充剂得色谱柱进行分离测定得色谱分析方法。供试品经进样阀注入，由流动相带动通过色谱柱，各成分在柱内被分离后，依次通过检测器，其成分情况转变为其色谱信号情况，并由记录仪、积分仪或计算机记录、显示而作为检验成分得依据。,应用,色谱柱：ODS 检测器：常用UV 流动相：有机相不低于5,系统适用性试验,色谱柱得理论塔板数 n5.54（tRWh2）2 分离度 R2（tR2tR1）（W1W2） 重复性 RSD 2.0% 拖尾因子 TW0.05h2d1,测定方法,内标法 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇水(70:30)为流动相，检测波长为281nm 。理论板数按炔雌醇峰计算应不低于1000，炔雌醇峰与内标物质峰的分离度应符合要求。内标溶液的制备 取醋酸甲地孕酮约20mg，精密称定，置10ml量瓶中，以无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。 测定法 取炔雌醇对照品约40mg，精密称定，置5ml量瓶中，以无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取该溶液与内标溶液各2ml ，置10ml量瓶中，以甲醇稀释至刻度，摇匀，取10l 注入液相色谱仪，记录色谱图；另取本品适量，同法测定，按内标法以峰面积计算，即得。,外标法 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以庚烷磺酸钠溶液(取庚烷磺酸钠2.0g，加水900ml溶解后，用冰醋酸调节pH值至3.9，加水至1000ml)乙腈甲醇(25:6:1)为流动相；检测波长为254nm。理论板数按法莫替丁峰计算应不低于1400。 测定法 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于法莫替丁50mg），置50ml量瓶中，加甲醇适量，振摇使法莫替丁溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取经五氧化二磷80减压4小时的法莫替丁对照品50ml，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取上述两种溶液各20l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。 按外标法以峰面积计算，即得。,气相色谱法,基本原理,采用气体为流动相流经装有填充剂得色谱柱进行分离测定得色谱方法。,应 用,溶剂残留量得检查、乙醇检查、挥发性杂质检查、维生素E及其制剂的含量测定。,载气系统,进样系统,色谱柱,检测系统,数据处理系统,温控系统,分析方法的验证,药品质量标准分析方法验证的目的 证明采用的方法适合于相应检测要求。 方法验证理由、过程和结果均应记载在药品质量标准起草说明或修订说明中。,分析方法验证的内容,（一）准确度 （二）精密度 重复性、中间精密度 重现性 （三）专属性,（四）检测限 （五）定量限 （六）线性 （七）范围 （八）耐用性,（一）准确度,准确度 系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度 一般用回收率（%）表示。 准确度应在规定的范围内测试。,1含量测定方法的准确度,原料药 可用已知纯度的对照品或供试品进行测定 或用本法所得结果与已知准确度的另一个方法测定的结果进行比较。 制剂 用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。 可向制剂中加入已知量的被测物进行测定 用本法所得结果与已知准确度的另一个方法,2杂质定量测定的准确度,向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。 本法测定结果与另一成熟的方法进行比较 应明确表明 单个杂质和杂质总量相当于主成分的重量比（%）或面积比（%）,3数据要求,在规定范围内，至少用9个测定结果进行评价。 3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶液 应报告已知加入量的回收率（%） 或测定结果平均值与真实值之差及其相对标准偏差或可信限。,（二）精密度,精密度 系指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。 一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。 含量测定和杂质的定量测定,重复性 在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度 中间精密度 在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果之间的精密度 重现性 在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度,9个测定结果进行评价。 3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶液 或将相当于100%浓度水平的供试品溶液，用至少测定6次的结果进行评价。,1重复性,2中间精密度,考察随机变动因素对精密度的影响 变动因素为 不同日期、不同分析人员、不同设备。,3重现性,法定标准采用的分析方法，应进行重现性试验。,4数据要求,应报告 标准偏差、相对标准偏差和可信限。,（三）专属性,专属性 系指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的方法能正确测定出被测物的特性。 鉴别反应、杂质检查和含量测定方法,（四）检测限,检测限 系指试样中被测物能被检测出的最低量。 鉴别试验和杂质检查方法 信噪比法 一般以信噪比为31或21。,（五）定量限,定量限 系指试样中被测物能被定量测定的最低量 杂质定量测定 信噪比法 一般以信噪比为101,（六）线性,线性 系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。 含量测定,（七）范围,范围 系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。 例如：原料药和制剂含量测定，范围应为测试浓度的80%120%；,（八）耐用性,耐用性 系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。 例如： 液相色谱法中典型的变动因素有： 流动相的组成和pH值、不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱、柱温、流速等；,某研究拟建立以高效液相色谱法测定 解郁安神片中甘草酸含量的方法,方法学考察 线性关系 标准曲线，回归方程为y=382206.54x4139.33，相关系数r=0.9999。 精密度试验 RSD（%） 0.65 稳定性试验 12小时内供试品稳定性良好 重现性试验 相对标准偏差为0.39%，表明方法重现性良好 回收率试验 平均回收率为99.61%，符合要求 通过以上方法学考察，说明甘草酸含量方法稳定可行,定量分析有关计算,药物的定量分析 准确测定药品有效成分或指标性成分的含量 原料药与制剂含量表示方法不同 原料药的含量用百分含量表示 制剂的含量则用标示量的百分含量表示。,原料药的百分含量,制剂 标示量的百分含量,一、原料药百分含量的计算,（一）滴定分析法 （二）分光光度法 （三）色谱法（HPLC、GC）,（一）滴定分析法,1直接滴定法,呋塞米含量测定：取本品0.4988g，加乙醇30ml，微温使溶解，放冷，加甲酚红指示液4滴与麝香草酚蓝指示液1滴，用氢氧化钠滴定液（0.1003 mol/L）滴定至溶液显紫红色，消耗氢氧化钠滴定液（0.1003mol/L）14.86ml；并将滴定的结果用空白试验校正，消耗氢氧化钠滴定液（0.1003mol/L）0.05ml。每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于33.07mg的呋塞米。按干燥品计算，含C12H11ClN2O5S不得少于99.0%。,2剩余滴定法,司可巴比妥钠原料药含量测定：取本品0.1041g，置250ml碘瓶中，加水10m1，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.1mol/L）25ml，再加盐酸5ml，立即密塞并振摇1min，在暗处静置15min后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（0.1012mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml溴滴定液（0.1mo1/L）相当于13.01mg的C12H17N2NaO3。按干燥品计算，含C12H17N2NaO3不得少于98.5%。已知样品消耗硫代硫酸钠滴定液（0.1012mol/L）17.20ml，空白实验消耗硫代硫酸钠滴定液（0.1012mol/L）25.02ml。,（二）分光光度法,1对照品对照法,奥沙西泮原料药含量测定：精密称定0.0150g，置200ml量瓶中，加乙醇150ml，于温水浴中加热，振摇使奥沙西泮溶解，放冷，用乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，在229nm的波长处测定吸光度为0.480；另精密称取奥沙西泮对照品0.0149g，同法操作，测得229nm的波长处测定吸光度为0.460；药典规定本品按干燥品计算，含C15H11ClN2O2应为98.0%102.0%。该供试品含量是否合格？,2吸收系数法,对乙酰氨基酚原料药含量测定：精密称取对乙酰氨基酚0.0411g，置250ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液50ml，加水至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇匀。依照分光光度法，在257nm波长处测得吸收度为0.582。按C8H9NO2的百分吸收系数为719计算对乙酰氨基酚的百分含量。,（三）色谱法（HPLC、GC）,1外标法,氢化可的松原料药含量测定： 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂甲醇-水（7030）为流动相；检测波长为240nm。理论板数按氢化可的松峰计算不低于2000，氢化可的松峰与内标物质峰的分离度应符合要求,内标溶液的制备：取炔诺酮，加甲醇制成每1ml中含0.40mg的溶液，即得。 测定法：精密称取供试品12.48mg，配成25ml，精密量取该溶液与内标溶液各5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取10l注入液相色谱仪，记录色谱图，测得数据如下：,内标溶液测得数据如下：,另取氢化可的松对照品13.75mg，配成25ml，同法测定。测得数据如下：,2内标加校正因子法,（1）计算校正因子：,（2）计算供试品的百分含量：,氢化可的松原料药含量测定： 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂甲醇-水（7030）为流动相；检测波长为240nm。理论板数按氢化可的松峰计算不低于2000，氢化可的松峰与内标物质峰的分离度应符合要求,内标溶液的制备：取炔诺酮，加甲醇制成每1ml中含0.40mg的溶液，即得。 测定法：精密称取供试品12.48mg，配成25ml，精密量取该溶液与内标溶液各5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取10l注入液相色谱仪，记录色谱图，测得数据如下：,内标溶液测得数据如下：,另取氢化可的松对照品13.75mg，配成25ml，同法测定。测得数据如下：,某药厂用高效液相色谱法外标法测定头孢唑林钠含量，取含量为99.5%的头孢唑林钠对照品25.13mg，配成溶液，取此溶液10l注入液相色谱仪，测定峰面积，3次测定值分别为：2490189、2492796和2492178；另外称取头孢唑林钠供试品3份，分别为28.13mg、29.35mg和27.10mg，按上法测定，分别取10l溶液注入液相色谱仪，测得峰面积分别为2634858、2763699和2536847，求供试品的百分含量。,二、制剂标示量的百分含量计算,（一）滴定分析法 （二）紫外-可见分光光度法 （三）色谱法（HPLC、PC）,（一）滴定分析法,甲苯磺丁脲片剂（标示量0.5g）的含量测定：取甲苯磺丁脲10片，精密称定为5.948g，研细，精密称取片粉0.5996g，加中性乙醇25ml，微热，使其溶解，放冷，加酚酞指示剂3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1008mol/L）滴定至粉红色，消耗量18.47ml。每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于27.04ml的甲苯磺丁脲。中国药典现行版规定本品含甲苯磺丁脲应为标示量的95.0%105%。试计算本品的标示量百分含量，并判断是否符合规定。,甲苯磺丁脲片剂（标示量0.5g）的含量测定：取甲苯磺丁脲10片，精密称定为5.948g，研细，精密称取片粉0.5996g，加中性乙醇25ml，微热，使其溶解，放冷，加酚酞指示剂3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1008mol/L）滴定至粉红色，消耗量18.47ml。每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于27.04ml的甲苯磺丁脲。中国药典现行版规定本品含甲苯磺丁脲应为标示量的95.0%105%。试计算本品的标示量百分含量，并判断是否符合规定。,盐酸普鲁卡因注射