偏头痛痛觉机制—电刺激清醒大鼠上矢状窦区硬脑膜后三叉神经核尾侧复合体基因表达谱的实验研究.doc

军医进修学院;解放军总医院博士学位论文偏头痛痛觉机制电刺激清醒大鼠上矢状窦区硬脑膜后三叉神经核尾侧复合体基因表达谱的实验研究姓名：姜磊申请学位级别：博士专业：神经病学指导教师：于生元20090519 军医进修学院博士学位论文方法：寡核苷酸微阵列芯片对电刺激模谌蜃个转录子 军医进修学院博十学位论文，同时或著影响。关键词： 军医进修学院博士学位论文 军医进修学院博士学位论文 瓵 军医进修学院博士学位论文瓵癙琺瑃，琣猅，琣琲瑃， 军医进修学院博士学位论文， 军医进修学院博士学位论文猣弯纫籨基因图谱注解器和基因路径模拟机京降钙素。 基因相关肽 研究生学位论文原创性声明我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得我院或其他教育机构的学位及证书而使用过的材料，对本文的研究作出贡献的个人或集体，均已在文中做了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 军医进修学院博士学位论文，学说等。赴騠，表达口吲。产生一系列生物效应，如泶镌黾硬浮谎趸哺蹈扑鼗蛳喙仉珻等递质 军医进修学院博士学位论文动相关基因，并包括了泛素降解途径，生化酶类基因以及转录因子，其中细 军氏进修学院博士学位论文绱碳型号：日本光电工业株式会社微量移液器，琍， 军医进修学院博士学位论文凝胶成像仪，分子杂交仪，宜崮狝，疦；无水乙醇胬福琋 军医进修学院博十学位论文翻水，分子牛物学等级，山羊琑狝，着色缓冲液窦；待颅骨骨面完全干燥后用齿科粉围绕电极覆盖，覆盖面积约为，先 手术后每只大鼠均单笼饲养自由进食进水，术后三天每天均以注射用丰行为观察箱值径，高 军医进修学院博士学位论文捅妒齒凝胶缓冲液，疦；琼脂糖籖 痬群蟮菇海豪淠螅糜诘缬静壑校趌凝胶缓冲液中平衡分钟，备用。缓蠼物种类型厦嬉惶醮拿芏却笤际窍旅嬉惶醮倍。还观察到一个更小稀释液管，加入儿，再虬第一次稀释液加入到儿的收集溶液于管底。 军医进修学院博士学位论文合成管中。第三次稀释液和鵗籓，轻弹管壁数次使其充分混匀，瞬时离心陨希彩崩胄R浦罵收集溶液诒现票窼收集溶液于管底并放在冰上。 矫恳桓鯢岬鼙谑问蛊涑浞只煸龋彩崩胄收集溶液于管底。嫖掠儿 军医进修学院博士学位论文虬加入到双链合成反应体系中，觳榛旌衔锏难丈欠袷腔粕接近于颜色绻牵邢乱徊剑绻浅壬蜃仙钠，混匀，混合物的颜色会变成黄色，之后进行下一步。虬混合液转移到内校中，到中，转移到新的直接加入到的膜上。室温之后进行下一步。管，加入纯化后双链。收集溶液于管底。一个反应，之后进行下一步。纯化 军医进修学院博十学位论文至样品中，离心。糜 至弃滤液。的管盖，最大转速转移到新的 中，将儿的膜上，最大速的膜上，最大速衑浚绻宦砩隙浚嬗谝。：断停琁虬儿一测量的浓度以及印膐。 军医进修学院博十学位论文锼乇昙莄片段化、检测化产物，确定所需片段化的量，制备片段化反应体系，轻弹管壁数次使其充分混匀，瞬时离心 收集溶液于管底。收集溶液于管底。脑咏灰鹤R频搅硪患尤瓤樯希嫖掠，以除去杂一步。咏唤崾埃蚩狦砑笛樾畔、 诵蠵。管中。，体积足够为一张芯片，根据芯片类型不同选择贔曰翱蛞，选择相廊的，点击运行，开始芯片清洗染色，这个过程大约需要毋一拳阿 扫描后的图像由软根据组成每个探针组的个秸攵信号值，首这种分析需要比较对照组芯片和模型组芯片的每个探针对甅 军医进修学院博十学位论文进行比较，的差异表达基因进行了虶采用砑笛槭萦镁辣曜疾石士表示，采用紫外吸收测定法 表瓵泶锲灼教紫外定量检测结果模型组与对照组芯片杂交的检测报告表明，芯片的背景值片检测结果可靠。 军医进修学院博士学位论文惴油中可以看到各组差异表达基因甇芯片对模型组和对照组大鼠校載!皃”，对照组三叉神经核尾侧复合体共检测到个，占总数的，而模作为标准挑选差异表达基因；筛选标准为：或了表达上调和下调的基因；相对于对照组，模型组三叉神经核尾侧复合体转 治觯渲性谙碌骰蛑校粗;个很焐愦砩系骰颍躺愦硐碌骰颍谏愦砦薇浠 军医进修学院博士学位论文琾4砦蠓穸扌偕鐷簆的概率值，反捶从逞裾飧鯬 军医进修学院博十学位论文篞 募扑惴椒捎胋方法，计算的过程大概如下，在分析虶耐臣平峁币部梢宰酆峡悸荘根据实验设计的具体情况设定不同的阈值进行分析。镅揪表钜旎騁曼婴仑旦堂閘丝表钜旎訮 军医进修学院博士学位论文； 讨论 军医进修学院博十学位论文公司的等权威数据库。全基因组表达谱芯片对椭械钠阕橹邢低撤治觥，但是利用三 军医进修学院博士学位论文基因水平探寻两种模型机制中内在的关联。我们发现电刺激清醒状态大鼠上矢状窦区硬脑膜后，可出现过度理毛、描述任意生物体的基因及其产物。本是商业公司，销售实验所需的反应试剂，但同时免费提供绘 军医进修学院博十学位论文制牛化调控路径 军医进修学院博七学位论文生了变化。而大部分基因都参与了两个以上的通路调控。与我们实验室先前 军医进修学院博士学位论文刻嚼胄幕、， 军医进修学院博士学位论文，甇；根据中目的基因序列，通过分析软件设计： 军医进修学院博士学位论文：覥綯混匀； 沟羯锨逡海尤雔涎兹湫郧碇悄旱缬炯觳釸质量充分混匀；尤匏掖迹浞只煸龋鲜龌旌弦阂浦罵结合柱中； 军医进修学院博士学位论文将岷现浦列翬管中，加入舛炕骉炕骉程序退火温度视引物情况来确定， 军医进修学院博十学位论文罷混匀，倒入制胶器中静置左右即可使用。电泳条件：，。穕疘温浴：小于一般是逆转录反应体系山中的 军医进修学院博士学位论文酶激活软件进行。目的基因的模板拷贝数以均 熠凹蹲舒鲐的勉洲唧 鹭讨论 军医进修学院博十学位论文类动物及人的尿液中有过多亚氨酸排泄，肾脏中大量增加，提示此蛋白可作为人类遗传性亚氨酸尿症的研究靶点 军医进修学院博十学位论文评分，：染色体定位于，编 军医进修学院博士学位论文 进行治疗口引。：染色体定位于，编码 军医进修学院博十学位论文，编码酪氨酸 军医进修学院博士学位论文清洁级健康雄性大鼠只：由解放军总医院实验动物中心提供硌嗡航夥啪芤皆簂临床药局提供北京 军医进修学院博士学位论文和鸱雀稍电刺激种幼组。每凰茄个大鼠笼当中，自由饮食及饮水，房间温度为，在开始正式实验前提前适应暴露上矢状窦上硬脑膜后将与线线接口连接好的单极电极放置于钻好的圆孔 军扪翰学位论文禁水；实验结束后太鼠被过深麻醉后马上开胸并暴露心脏，以注射器从迅速冷冻在液氯中并储存在一冰箱中。上述实验遵照清醒动物的疼痛实验用干净的剪刀将组织块辟量剪碎；自配置崛狿掷虢嘀品掷虢海幌热 上面。垂直放置，等待聚合；管中，每样品管中分别加入取下电泳板，将其平置拱济娌逶谙，小心取出夹板中的垫 军医进修学院博十学位论文洗两次；将凝胶浸入考马斯亮兰染色中，检查蛋白转移是否完全。一抗反应：将一抗每故驛抗体述二抗液体中椅隆芄饣郝作用甇图像分析系统对目标蛋白和内参照蛋白显所有资料以 图缸锳表逃情况表锳表达的秘分岔度比值吗啡绱碳分钟组谷氩酸是中枢神经系统主要的神经递质。其受体町分为离子型和代谢头痛发病机制中起重要作用“。氨基酸门控通道介导了中枢神经系统多数的 军医进修学院博十学位论文，现象被和痛觉调控过程发挥一定作用踞。辣椒辣素受体亚家族成员之宋械睦苯匪型受体痛病理生理中的作用。械囊辉保的伤害性热刺激可使其 军医进修学院博士学位论文所阻断。福司柯林和的效着受体与效应器同其作用底物连接起来的桥梁作用，共同构成一个信号复合体，其激活后可活化内流性钾通道电流，抑制依赖电压的钙通道，抑制腺苷的共表达。利用松雠咛赴细胞系稳定的表达蚑， 军医进修学院博士学位论文 结论 一甼。隹阂籯附图甎基因扩增曲线呈 军医进修学院博十学位论文附图甂基冈熔解曲线 军医进修学院博士学位论文毫芒附图基冈扩增曲线 军医进修学院博士学位论文卜墨猳【阂籯附图基因熔解曲线附图基因熔解曲线 军医进修学院博士学位论文，一 军医进修学院博十学位论文弧籯 军医进修学院博士学位论文一胍籵口阂籯疽籌猋。譬阂籯 军医进修学院博士学位论文甇：瓹瓽甅篿瓻，：刘若卓，于生元应用电刺激方法观察中脑导水管周围灰质在疼痛伤害觉 军医进修学院博十学位论文甪甂琈，： ：篗， 军医进修学院博士学位论文甌， ，；： 谢 ： 军医进修学院博十学位论文琀疭琀：琒珹 甆，甆瓹， 军医进修学院博士学位论文，瓸，：琄甅 ，： 琈瓹，：弘，瓵，璊甆甁，： 军医进修学院博士学位论文 军医进修学院博十学位论文实验性偏头痛动物模型研究现状偏头痛的发病机制目前尚无定论，主要有如下几种学说：化是继发的。有以下论点：夹云阋种蒲幕蚨嗵窒螅諱 军医进修学院博士学位论文有先兆偏头痛的血管紧张素转化酶，基珽性疼痛的激活标志。主要包括： 军医进修学院博士学位论文化学刺激硬脑膜模型：此模型将刺激性物质如辣椒辣素通过小导管注琒材阅停篠作用引起的，而可能是硝酸时油代谢产物的作用所致。等的研究发 用，