内质网应激与胰岛β细胞脂毒性的研究.doc

上海交通大学博士学位论文内质网应激与胰岛细胞脂毒性的研究姓名：钱镭申请学位级别：博士专业：内科学（内分泌代谢病）指导教师：罗敏20080501 响引起了更多的关注。首先本研究报道了在正常糖耐量中国人中糖负荷后毖L谴以上人群的代谢特点，探讨了早期胰岛豢释放功能衰竭意义和可能的原因，发现脂代谢异常与胰岛功能损害相关；其次，建立高脂诱导肥胖大鼠模型，探索高脂血症状态下胰岛细胞是否存在内质网应激，并观察其胰岛形态功能的变化；体外条件下，利用软脂酸长期孵育观察细胞凋亡和增殖的情况，进一步验证胰岛细胞脂毒性和内质网应激的联系。 上海交通大学医学院级博士学位论文结果单个细胞直径有显著增加；体外条件下，软脂酸长期作用后细胞凋亡增多，增殖减少，细胞多停滞于虶疢，内质网应激标结论 上海交通大学医学院级博士学位论文酸可能通过内质网应激诱导胰岛细胞凋亡，同时抑制增殖。 ；，鬷 琋 上海交通大学医学院级博士学位论文谢琣 上海交通大学医学院级博士学位论文 畃 疊游离脂肪酸 学位论文原创性声明 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在一年解密后适用本授权书。不保密耐。朐谝陨戏娇蚰诖颉学位论姊作者堑系础巨期 这些病人不能得到及时的干预。对空腹血糖的重视，无报道。为探讨上述闻题我们剥用手中的瓷料进行了以下研究。 疾病，肝瘸患者蛘叻糜跋齑灰镎如降腊懿，收集瓷料都征褥患者阕人体测量学参数包括：身离、体重、体重指数、簇围、臀围、腰臀圈比和血愿。体重 上海交通大学医学院级博士学位论文琁凑誰甈欠瘛琁组被再分为 上海交通大学医学院级博士学位论文?崭寡L鞘芩琱应用梯形法，珿和直鹞QL呛脱=鹊核刂数字分别代表】。胰岛素分泌指数计算如下籊除特别说明，为 具 上海交通大学医学院级博士学位论文 痗口贯西寸凸口淮鳫啊痮膏鴂“縉瓾莶贰蓿砖乱畂制甆口小过惶餩【一时叫己 “寸屑鄄罚畁寸畁州口【盎膏卜甀州盎矗葛輔瓾卜。一曩畂州甆口畂制口冀一鵌一山荌 上海交通大学医学院级博士学位论文讨论前者的的确也要大于后者，但是两者之间没有显著性差异。虸 上海交通大学医学院级博士学位论文 上海交通大学医学院级博士学位论文而这种缺陷可能与早期胰岛素释放功能的减退而不是胰岛素敏感性降低有关。 上海交通大学医学院级博士学位论文引言 上海交通大学医学院级博士学位论文细胞计数测量仪计 上海交通大学医学院级博士学位论文电转膜仪樘崾约梁泄鹤訫荆琑馐凳倍縋试剂盒购自聊公司。寺】固搴虷标记抗小鼠二抗购自上海康臣生物公司。兔抗鼠 上海交通大学医学院级博士学位论文 上海交通大学医学院级博士学位论文臼约梁兴得魇。如处死，取肝脏、附睾脂肪置入液氮冷冻后，一冰箱 上海交通大学医学院级博士学位论文。胄模重复上述步骤共三次；，对每个视野下胰岛进行直径测 上海交通大学医学院级博士学位论文海尤，离心。取上层无色水相，移管。酒精。 上海交通大学医学院级博士学位论文明书。 上海交通大学医学院级博士学位论文：序列如下罨较一： 由上海生工合成。 上海交通大学医学院级博士学位论文兄担荷瓒个循环荧光信号标准差的倍。訥为内参，校正每个样本的值：得到。预混对于胰岛， ，。并轻轻吹匀。 上海交通大学医学院级博士学位论文在分离胶上继续缓缓加入积层胶，并立即在积层胶上插入梳子，尽量避免产生气泡，电泳结束后，在转膜液中轻轻撬开玻璃，取出凝胶，裁去积层胶，按照阳极滤纸插入，放入匣中，并加入冰盒和预冷的缓冲液。 上海交通大学医学院级博士学位论文膜次漂洗。稀释。膜次漂洗。结果，周龄时高脂组大鼠体重仍明显高，韑，图。 上海交通大学医学院级博士学位论文高脂组体重与对照组比较：盤善与对照组比较：癙 害宕盖日昌血糖的变化。 上海交通大学医学院级博士学位论文壁坐垫大鼠断食保体重腹腔注射常规胰岛素，割尾静脉取血测血糖，数据以士瓺著高于正常 上海交通大学医学院级博士学位论文窖点 窆凡学学院蝴畔宦踆幽乱聩岛分离后低糌 佟院日賜村雀追十骰邓馈了一麓争霪攀 ，猉， 上海交通大学医学院级博士学位论文较对照表达显著性增加鵓珿蛋白上调，但疊表达水平相对于对照组没有显著性差异，蛋白表达也没有变嗣毫司瑟图咧笫蟾卧郋分子表达变化图咧笫笠鹊篍分子表达变化星图咧笫蟾截褐綞分子表达变化 上海变大学学巯学位论文一图高艏大鼠刖脏、脯岛和附睾脂肪綪次独立实验结果接近；罔大鼠肝脏电镜比较 上海交通大学医学院级博士学位论文讨论发现在高脂动物肝脏中，琓为虽然脂肪组织近来也被认为是内分泌器官，但其蛋白合成能力毕竟远较肝脏和胰那么究竟是什么原因引起了高脂组胰岛的糖毒性和脂毒性是目前胰岛 上海交通大学医学院级博士学位论文动完全可以控制在正常范围内，血糖的升高是以胰岛功能的异常为前提，且波动越 上海交通大学医学院级博士学位论文其他方法进一步证实。值得指出的是，与其他研究中】报道的肥胖大鼠胰岛对高糖反应性下降不同，本研究中高糖对高脂大鼠胰岛高糖反应性与对照组接近，这可能是由于别的实验选用基因缺陷的动物作为肥胖模型，不能排除基因缺陷对胰岛素分泌的直接作用，而本研究利用更符合生理的高脂诱导肥胖，所以可以解释产生对抗胰岛素抵抗的代偿现象。研究中还观察到，胰岛体外培养小时后出现中心坏死 上海交通大学医学院级博士学位论文于一个大胰岛的胰岛素分泌量往往可达到小胰岛的兑陨稀，所以移植后保护大 上海交通大学医学院级博士学位论文第三部分软脂酸对胰岛细胞脂毒性与内质网应激的研究 上海交通大学医学院级博士学位论文。在本文第二部分中，我们观察到高脂肥胖大鼠胰岛细胞存在内质网应激，但是否是由于脂质代谢异尚无研究。谔逋饨徊街抵拘杂隕的 上海交通大学医学院级博士学位论文材料与方法一、主要仪器设备：微量移液器 上海交通大学医学院级博士学位论文抗体、昙强雇枚埂发光剂及底物、生物素偶联蛋白购于尽购自珺鹤訰公司。药物或不同浓度脂肪酸培液。将称量好的碇峒尤隣液中，迅速加热至。渫耆芙夂完全澄清透明杆偃加入提前预热至溶有淙粗潦椅潞朔肿埃婵杀周。 上海交通大学医学院级博士学位论文见第二部分 上海交通大学医学院级博士学位论文躺馊玖希鋈镜蛲龊退劳鱿赴和染，早期凋亡细胞标记绿色，晚期凋亡和死亡细胞标记红色和绿色。设立背景孔患覤褂每固逑鸵：虯瓸甈贮存液钟孟峙。固澹褂闷匆好靠次 上海交通大学医学院级博士学位论文 上海交通大学医学院级博士学位论文 上海交通大学医学院级博士学位论文 上海交通大学医学院级博士学位论文平和蛋白水平均显著上调鵓如图作用，后磷酸化水平逐渐升高，约为图；相同条件下玞们 。”“一“ 旷緈院博学位论文和猠泶锉浠次独市实验，结果接近。目 一，甠疐影响榆删泶锉浠次独立丈骑，结果接约。 上海交通大学医学院级博士学位论文囡图煌纫旅顾对 上海交通大学医学院级博士学位论文讨论应激，内质网应激等；而与细胞增殖相关的因素可能有，胰岛素，葡同时细胞的增殖也受抑制，小时后约下降。为了进一步弄清细胞增殖，细胞在进入下一个周期时往往需要在上述两点进行检测，许 上海交通大学医学院级博士学位论文加协助肽链的折叠。第三，加速错误折叠的蛋白降解抑制蛋白合成，同时增加表达，启动一系列基因表达；则被激活的羟形膒，发挥转录因子活性；的同时激活也会使蚃活性增加诱导凋， 就是分别由于基因和编码蛋白的心激相关基因的和蛋白水、 上海交通大学医学院级博士学位论文期的转换【】，在胰岛细胞的生长发育中发挥重要作用。有报道，哺乳动物细胞内调控细胞进入或其他周期蛋白抑制细胞进入有丝分裂 上海交通大学医学院级博士学位论文脂酸脂肪酸可以直接整合进入内质网膜结构，导致其肿胀僵硬，影响其功能；亦可表达水平下降，这也从另一 上海交通大学医学院级博士学位论文结论能与血脂代谢异常有关。缺陷的内质网应激。 上海交通大学医学院级博士学位论文参考文献：琄琙琍瓺琩瓽篧， 上海交通大学医学院级博士学位论文海珹，琈珽，琈，：毋 ，琄琄 ，琁琁， 上海交通大学医学院级博士学位论文 珻，琈，、析，瓺 上海交通大学医学院级博士学位论文，琒， ，： ：舳覮甈鬉： 上海交通大学医学院级博士学位论文猺甌珻， 上海交通大学医学院级博士学位论文猚，琂瓽，：珹，瓹瓺 上海交通大学医学院级博士学位论文 瓺，琈 上海交通大学医学院级博士学位论文甁，琭：，： 珹 疓瓺 上海交通大学医学院级博士学位论文 ： 琙 ，篶，：，甈琖 ， 上海交通大学医学院级博士学位论文疉，：，：，珺 上海交通大学医学院级博士学位论文，綜瓻， 上海交通大学医学院级博士学位论文衷心感谢我的导师罗敏教授，您厚实的专业知识，敏锐的科研洞察力，不知疲倦的工作态度和严谨求实的作风，所谓高山仰止，景行行止；桃李不言，下自成蹊。您永远都是我们学习的楷模。 上海交通大学医学院级博士学位论文感谢林帆博士，陈焕珍、赵海燕、