结肠息肉样早癌患者早期血清炎症因子变化.doc

结肠息肉样早癌患者早期血清炎症因子变化 张利吴慧丽姚俊芳李琨琨肖兴国 河南省郑州大学附属郑州中心医院消化一科，河南郑州450007 摘要目的探求结肠息肉样早癌的早期相关性炎症因子及抑癌基因指标，以期为临床早期诊断提供指导。方法通过结肠镜检查结肠息肉样变350例患者，电子结肠镜下息肉行粘膜切除（EMR）或剥离（ESD）后病理学检查证实结肠息肉样早癌变病例120例,检测血清促炎因子TNF-、IL-6、Cox2及抑炎因子IL-10水平,并检测组织抑癌基因APC、PTEN、PHLPP的表达及230例单纯腺息肉患者与200例查结肠镜提示结肠粘膜正常对照组以上指标进行比较分析。结果病理活检证实结肠息肉癌变组与单纯结肠腺息肉组、正常结肠组比较，血清促炎因子IL-6、Cox2表达量增高(P0.05),抑炎因子IL-10检测量减低(P0.01),抑癌基因APC、PTEN、PHLPP，表达水平减低(P0.01),血清TNF-无统计学意义。结论对血清一些促炎症因子及抑炎症因子检测水平变化，与结肠息肉组织抑癌基因表达基本相一致，能对部分结肠早癌筛查及诊断提供临床指导，促炎症因子及抑炎症因子可能参与结肠息肉向早癌的演进。 关键词结肠息肉；emr或esd；促炎因子；抑炎因子；抑癌基因 R4A1672-5654（xx）09（a）-0001-03 大肠癌在我国发病率位居居第3位，其大多具有明确的癌前病变期(如大肠腺瘤样息肉)，且早期无症状或症状不典型，就诊的临床病例多为中晚期，而且其治疗效果和预后均不理想1，是全国重点防治的8种癌症之一，进行早期诊断和综合防治2是关键。国内有类似相关研究，均是对中晚期结肠癌等相关血液指标研究，结肠早癌的相关研究少3。 该研究通过对我院350例结肠息肉样病变患者，电子结肠镜下行粘膜切除（EMR）或剥离（ESD）后病理学检查证实结肠早癌120例，与单纯结肠腺息肉病组230例，正常结肠镜结肠粘膜200例，检测血液中促炎因子、抑炎因子、抑癌基因水平，进行比较分析，为结肠早癌筛查及诊断提供临床指导，同时对结肠腺瘤向结肠早癌的发生机制进行初步分析、探讨。 1入选标准、材料与方法 1.1入选标准及分组 入选标准：选取xx年2月xx年2月郑州大学附属郑州中心医院通过肠镜检测为结肠息肉样病变，大小均以大于或等于1.0cm，排除结肠淋巴瘤后350例；分组：对照组：为200例查结肠镜结肠粘膜正常患者，男性126例，女性74例，平均年龄（506.5）岁；实验组：电子结肠镜下行息肉切除（EMR）或剥离（ESD）后病理学检查证实230例单纯结肠腺息肉患者,其中男性123例，女性107例，平均年龄（555.5）岁；实验组：电子结肠镜下行息肉切除（EMR）或剥离（ESD）后病理学检查证实结肠早癌120例患者，其中男性68例，女性52例，平均年龄（575.5）岁。 1.2材料 电子结肠镜(Olympus),细胞裂解液，RbPTEN、PHLPP兔抗人一抗,羊抗兔二抗,5上样baffer,Ecl试剂盒（以上试剂盒及抗体购自上海科兴公司），电泳及电转槽等western仪器设备（郑州大学基础实验室）。 1.3方法 1.3.1内镜治疗过程结肠镜下EMR或ESD操作见图1。 1.3.2检测指标三组患者，均检测血清促炎因子TNF-、IL-6、COX2水平,抑炎因子IL-10水平，检测组织APC、PTEN、PHLPP蛋白表达量。 1.3.3蛋白印迹试验将收集各样品在低温下提取总蛋白,取上清液，制作标准曲线，测定上清液蛋白浓度，样品均以50ng总蛋白计算上样液体量,进行12.5%PAGE凝胶泳,行电泳、电转,使蛋白转膜,将NC膜用封闭液封闭,再加入一抗低温4过夜，加入二抗室温孵育,将NC膜置于ECL(增强化学发光试剂)中反应13min,暗室中使X线片曝光,常规方法显影定影,X线片上的条带用凝胶图象处理系统分析目标带的分子量和净光密度值，以：APC、PTEN、PHLPP/-actin的比值表示。 1.4统计学处理 以meanSD数据处理并用SPSS13.0分析,两个独立样本资料采用有序多分类资料秩和检验（Wilcoxon），计量资料组与组之间比较用检验。P0.05），实验与对照组比较，均有统计学意义，其中PHLPP有显著意义（P0.01）；实验组与实验组比较，均有统计学差异，且PHLPP存在显著差异（P0.01）。（见表2）。 3讨论 我国大肠癌发病率逐年增高4-5，近30年我国大肠癌发病率总体增加了36.7。而美国等西方国家，大肠癌发病率和死亡率逐步下降，原因是在预防方面如及时去除癌前病变及结肠早癌，并且建立了循证筛查、并推广。大肠肿瘤筛查被列为国家“十一五”疾病防治工作重点课题6。现已证实，85%结肠癌均由结肠息肉发展、恶变而形成，在这一演进过程中，患者血清炎症因子或组织抑癌基因浓度有无变化，尚无类似研究。本研究通过对比分析正常人、结肠腺息肉患者及结肠早癌患者血清炎症因子检测水平及组织中抑癌基因表达水平，得出炎症因子在结肠腺息肉向结肠早癌的发生、发展的作用，初步探讨及作用机制，并分析提示结肠早癌敏感抑癌基因，为临床结肠早癌刷查血清敏感性指标提供帮助，并为结肠癌治疗效果评估指标，这是本研究重点及临床意义。 PaiottiAP等7证实,COX2在肠道炎症反应发生中，起重要作用,活动性溃疡性结肠炎患者表达明显增强,表达越强，其肠道炎症也越严重。本实验证实，在结肠早癌组促炎因子IL-6、Cox2表达水平明显高于正常结肠组、结肠腺瘤组血清，P0.05，而结肠腺瘤组与正常结肠组血清分析比较无差异。而抑癌因子IL-10则在结肠早癌组血清检测最低，说明促炎因子IL-6、Cox2及抑炎因子IL-10在结肠腺息肉向结肠癌演变发展中可能起到一定作用，不排除参与结肠腺瘤向早癌的演进。这与临床理论相符，即结肠或息肉粘膜反复炎症就容易癌变，但机制需进一步研究。而TNF-存在2个结构不同的受体，传导不同的传导信号:1型和2型受体(TNFR1、TNFR2)，前者导致细胞凋亡，后者是一种促炎因子,在本实验中，TNF-在正常结肠粘膜组、结肠腺瘤组及结肠早癌组血清表达水平均无明显差异，说明TNF-信号通路存在一种负反馈平衡,一方面，TNF-作为促炎炎症，可引起结肠腺瘤的发生、演进；另一方面，增强TNF-诱导不典型增生细胞凋亡8。 肠道抑癌基因据报道有：APC、PTEN、PHLPP,这些基因减少及失活被认为是肿瘤发展的分子水平基础，但那个基因在组织检测水平差异最大，或是哪个基因敏感性最高尚无相关研究。本实验检测到,在结肠早癌组织中，以上三种抑癌基因均表达减少，这与理论一致，以上基因低表达与Akt/mTOR通道调控有关8：在85结肠癌中APC基因缺失或失活，并且该基因的缺陷与结肠癌的遗传易感性直接相关，在散发性大肠癌的发生中APC基因突变也起着重要作用9。APC蛋白失表达可能与大肠癌的发生及演进密切相关。PTEN调控Akt/mTOR通路去磷酸化调控VEGF发挥肿瘤