归参汤对小鼠免疫作用的影响开题报告PPT.ppt

归参汤对小鼠免疫作用的影响,Immunoregulatory effects of Gui Shen Decoction In mice,一、 研究的目的与意义 寻找有良好免疫调节药物已经成为当代新药的发展方向之一。 直到现在，采用中药的有效成分开发免疫调节剂仍然是医学界的热点。,何首乌能延缓性成熟后胸腺的退化萎缩，增强胸腺和脾脏重量，增强胸腺和脾脏的T细胞增殖反应能力1。 葛根能促进T细胞的活化增殖反应6。 枸杞能够激活胸腺细胞的增殖，并能促进胸腺细胞向脾脏的转移2。,当归具有调节抗体生成的作用4，同时还可以活化巨噬细胞，能提高IL-2和补体C5的水平5。 淫羊藿除了具有激活胸腺细胞增殖的作用外，还具有刺激骨髓的造血功能3。枸杞和淫羊藿长期服用还可使老龄动物胸腺的重量增加，可以增强免疫功能和延缓衰老。,参考前人对各味中药的研究，将党参，当归，枸杞，淫羊藿，葛根，何首乌，陈皮，柴胡以及升麻组成新的药方，名为归参汤，并通过免疫学实验方法，包括碳廓清法，耳片差量法和比色法 ，探究该药方在机体非特异性免疫，特异性免疫中的调节作用。,碳廓清法 灌胃给药，每日一次连续8d.免疫抑制组于1d、3d、5d sc CTX 30mg.kg-1，末次给药后1h，按10ml.kg-1尾静脉注射20%印度墨汁，注射后2min，20min分别从小鼠的左眼眶和右眼眶取血20L，加入10%的碳酸钠溶液2.5ml,摇匀，于波长600nm测吸光度值（OD值），计算出吞噬指数（K）. K= (logOD1-logOD2)/t2-t1,）,Note:*：P0.01 vs 对照组，*：P0.05 vs 对照组.：P0.01 vs CTX，：P0.05 vs CTX,表2 GSD对单核巨噬细胞吞噬功能的影响,耳片差重法.,给药前用7%二硝基氯苯（DNCB）丙酮溶液以0.02 ml每只，背部皮内注射致敏，于第二天再加强一次.各组连续给药11d，每日1次.末日给药后1h将1%的二硝基氯苯（DNCB）丙酮溶液0.02ml涂于各小鼠右耳，24h后将小鼠处死，用直径为7毫米的打孔器将两耳冲下，分别称重，以两耳的重量差作为小鼠DTH强度 的指标.同时取脾脏、胸腺称重，以每10g体重之脾重和胸腺重表示脾指数和胸腺指数.,表2 GSD对单核巨噬细胞吞噬功能的影响,Note:*：P0.01 vs 对照组，*：P0.05 vs 对照组.：P0.01 vs CTX，：P0.05 vs CTX,血清溶血素法,取小鼠60只，分为6组，分组方式和给药剂量同1.3.3.每日给药一次，连续7d，于试验第二天给药后用20%的绵羊红细胞（SRBC）免疫小鼠，ip 0.2ml/只，免疫抑制组于1d、3d、5d sc CTX30mg.kg-1 试验前准备：制备绵羊红细胞悬液（SRBC）.在无菌条件下，从健康成羊绵羊颈外静脉取血，置于盛有玻璃珠的灭菌锥形瓶中，摇动10分钟以除去纤维蛋白，加入相当于羊血体积2倍的Alsever溶液摇匀，置于4冰箱内保存备用.临用时取上述保存的绵羊红细胞，用生理盐水洗涤3次，每次2000rpm/min离心5分钟，弃去上清液，用生理盐水稀释至20%.制备补体.采集四只以上的成年豚鼠血，置4冰箱待血清析出后，离心分离血清，将各豚鼠血清混合，按101（V/V）将混合血清加入压积SRBC中，振荡摇匀后置4冰箱中30min，离心（2000r/min离心10min）取上清，置-20冰箱中备用.用时110稀释. IgM含量测定：末次给药后1h眼眶取血，制备血清，测定IgM含量.方法如下：眼球采血0.5ml后在室温中放置数小时，离心分离血清（2000r/min离心10分钟）；把收集的血清用生理盐水作800倍的稀释.另取一只试管按下表4加入溶液进行实验.然后于37水浴中保温一小时，冰浴5min终止反应，然后在3000r/min下离心5min，取上清液在540nm处测定OD值。 按下公式计算每只小鼠样品溶血素含量： HC=样本血清的OD值稀释倍数,表4 GSD对小鼠血清IgM含量的影响,Note:*：P0.01 vs control，*：P0.05 vs control；：P0.01 vs CTX,结论,GSD能够显著提高正常及CTX免疫抑制小鼠的K，因而表明GSD能够显著提高非特异性免疫能力；GSD能够显著增强迟发型变态反应，表明GSD能够有效调节机体的细胞免疫功能；GSD能够显著增加正常及