纤维蛋白原（FIB）的测定（SOP）标准操作程序.doc

安宁市中医院检验科标准化操作文件 纤维蛋白原（FIB）的测定（SOP）实验室名称项 目编 号制定日期化验室纤维蛋白原测定的标准操作程序00000106年02月16日【项目名称】纤维蛋白原凝结时间测定（Fibrinogen coagulative time, FIB）【目的】用于判定血栓前状态或血栓性疾病的必查项目【操作人员】本实验室实验人员。【原理】采用clauss法,即在待稀释血浆中加入高浓度的凝血酶,血浆凝固时间与血浆纤维蛋白原浓度成反比。【方法学溯源】：纤维蛋白原测定（Clauss法）原理：凝血酶将可溶性的血浆蛋白纤维蛋白原转化为不溶性的多聚体，纤维蛋白。当凝血酶浓度较高（约为100NIH/ml）且纤维蛋白原浓度较低（0.050.8g/L）时该反应决定于纤维蛋白原浓度。如在双对数坐标纸上画点，凝血酶凝块时间与纤维蛋白原浓度相比较呈线形关系。【仪器】：型号：MC-4000 PUS血液凝血分析仪【试剂】：1. 凝血酶试剂（Thrombin Reagent）（1）商标：美创(MDC Hemostasis)（2）包装规格：2.0ml10瓶（3）成分：冻干牛凝血酶冻干粉（lyophilized preparation of bovine thrombin）（近似100 NIH units/ml）使用前用蒸馏水复溶,轻轻摇动至完全溶解.溶后的凝血酶28存放可稳定一周,溶解后4小时内-20冻存,可以稳定一个月.冻存的凝血酶应37快速复溶,避免反复冻溶.2咪唑缓冲盐水(pH7.40.2)135ml/瓶该缓冲液以叠氮钠为防腐剂,叠氮钠如遇酸将产生有毒化合物,因此,含有该试剂的容器/试管及丢弃的试剂均应用大量流水冲洗.此外,亦应避免该试剂在金属管道内沉积. 【参考范围】：200400mg/dl【样本采集】：109 mmol/L 枸橼酸钠与血液按91混合，RCF 2500g（3000转/分）离心10分钟，分离血浆待检。室温下两小时内检测，否则冻存。【操作步骤】1、 取50l血浆加入450l咪唑盐水（IBS）中，作1:10稀释。2、 取1:10稀释的血浆100l，37预热2分钟，然后加入50l已预热的凝血酶试剂，仪器自动记录凝固时间（步骤2在血凝仪上完成）【参考范围】200400mg/dl【注意事项】1.分离的血浆中不应含有细胞成分；2.纤维蛋白原含量低于150mg/dl/L，而血浆FDP含量明显升高时，可致标本的测定结果较实际低。【临床意义】减少：原发性纤维蛋白原减少的病例极少。一种先天性纤维蛋白原缺乏症是极罕见的遗传性疾病，通过常染色体隐性基因遗传，此患者肝脏不能合成纤维蛋白原。男女两性均能发生，但以男婴为多见，患婴出生时，半数出现脐带出血。其血液凝固缓慢或只有部分凝固。继发性血浆纤维蛋白原减少的原因是由于纤维蛋白溶酶溶解纤维蛋白所致。如胎盘早剥，分娩时羊水进入血管形成血栓，引起弥漫性血管内凝血，激活纤维蛋白溶酶原，使血中纤维蛋白溶酶活力增加，溶解纤维蛋白，消耗了体内原有的纤维蛋白原，使其含量减少。有时可降至0.5g/L以下。严重的肝实质损害，如各种原因引起的肝坏死、慢性肝病晚期、肝硬化等都可出现纤维蛋白原的减少。此类疾病还常伴有凝血酶原及第七因子缺乏，也提示往往是病情严重的先兆。溶栓治疗的监测；此外，严重的低纤维蛋白原血症也可见于肺、子宫、甲状腺及前列腺手术中。增加：纤维蛋白原是一种急性时相蛋白，其增加往往是一种非特异性反应，常见于以下疾病：感染：毒血症、肺炎、轻型肝炎、胆囊炎、肺结核及长期的局部炎症。无菌性炎症：肾病综合征、风湿热、恶性肿瘤、风湿性关节炎等。其他：如外科手术、放射治疗、月经期及妊娠期也可见轻度增高。纤维蛋白原异常：纤维蛋白原异常是一种遗传性疾病，是常染色体显性遗传。患者纤维蛋白原含量可能在正常范围，但纤维蛋白原分子的一个多肽上出现了一个异常的氨基酸，临床上可无症状或仅有轻度的出血倾向。操作人员 部门主管 质量负责人姓名 本科工作人员 日期 06年02月23日科主任签字：活化部分凝血酶时间测定的标准操作程序（SOP）实验室名称项 目编 号制定日期*部分凝血活酶时间测定（APTT）*年*月*日【项目名称】活化部分凝血酶时间（Activated Partial Thromboplastin time，APTT）【目的】常用来筛选内源性凝血系统（、）及肝素抗凝治疗的监测。【操作人员】本实验室实验人员。【原理】APTT的延长直接与肝素量的增加成正比。APTT时间测定就是加入APTT试剂混合物在37孵育2分钟“激活”，再加入CaCl2记录凝块形成时间。【仪器】：型号：MC-4000 PUS血液凝血分析仪【试剂】：1. 凝血酶试剂（Thrombin Reagent）（1）商标：美创(MDC Hemostasis)（2）包装规格：4.0ml10瓶（3）成分：2CaCl2（0.025M）【参考范围】：19.327.1秒，延长10秒以上才有临床意义【样本采集】：109 mmol/L 枸橼酸钠与血液按19混合，避免溶血和其他组织液体污染。样品体积不得少于所需体积的90。RCF 2500g（3000转/分）离心10分钟，分离血浆待检。室温下两小时内检测，否则冻存。【操作步骤】1 加入50l血浆在反应杯中，然后加入APTT试剂50l，37预热2分钟；2 加入预热2分钟的CaCl2 50l，记录凝固时间。以上操作在血凝仪上完成。【注意事项】：勿延迟血液与抗凝剂的混合；避免样本产生泡沫；用塑料或硅硼酸盐玻璃容器；溶血、脂血或黄疸的样本，可能会引起错误的结果；反复冻溶血浆，会损伤细胞膜，影响结果；血球压积在2225，需调整抗凝剂与血液的比例；所有试验器皿必须清洁无污迹；APTT 工作要求370.5；草酸钠，EDTA和肝素不能用作抗凝剂；口服避孕药物，雌激素，怀孕，氧杂荼邻酮类的药物，肝素，天门冬氨胺酶和naloxone（纳络酮）会影响APTT结果。【临床意义】：延长：见于F、F和F血浆水平减低，如血友病甲、乙、丙等，F减少还见于部分血管性假性血友病患者。严重的血浆F、F、F和纤维蛋白原缺乏，如肝脏疾病、维生素K缺乏（新生儿出血症、肠道灭菌综合征、阻塞性黄疸）、口服抗凝剂、应用肝素以及低（无）纤维蛋白原血症等。纤溶活力增加，如继发性、原发性纤溶以及血循环中有纤维蛋白（原）降解产物（FDP）。血循环中有抗凝物质，如抗F或F抗体，SLB等。缩短：高凝状态，如DIC的高凝期，促凝物质进入血流以及凝血因子的活性增高等。血栓性疾病，如心肌梗塞、不稳定性心绞痛、脑血管病变、糖尿病伴血管病变、肺梗死、深静脉血栓形成、妊娠高血压综合征和肾病综合征等。 是监测肝素治疗的首选指标操作人员 部门主管 质量负责人姓名 本科工作人员 日期 *年*月*日科主任签字： 凝血酶原时间测定标准操作程序（SOP）实验室名称项 目编 号制定日期*凝血酶原时间测定标准操作程序*年*月*日【项目名称】凝血酶原时间（Prothombin Time）【目的】常用来筛选外源性凝血系统（、）及口服抗凝药物剂量（如华发令、双香豆素）的监控。【原理】在受检血浆中加入过量的组织活酶（兔脑、人脑、胎盘、肺组织等）浸出液和钙离子，使凝血酶原转变为凝血酶，后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白即发生凝固；其凝固时间的长短是反映血浆中凝血酶原、因子、以及纤维蛋白原。【操作人员】：本实验室实验人员。【仪器】：型号：MC-4000 PUS血液凝血分析仪【试剂】：1.含钙组织活酶冻干粉（1）商标：上海荣盛（2）包装规格：2.2ml10瓶（3）成分：兔脑干粉 45g/L CaCl2 25mmol/L 加入适量助型剂【试剂配制】含钙组织凝血活酶冻干粉每瓶加入蒸馏水2.2ml复溶，轻摇，直至完全溶解后放4冰箱保存，可稳定7天。每日取适量试剂置37预温备用，当日剩余试剂应弃去。【参考范围】：10.714.1秒，以正常对照延长3秒以上有意义。【样本采集】：109 mmol/L 枸橼酸钠与血液按19混合，RCF 2500g（3000转/分）离心10分钟，分离血浆待检。室温下两小时内检测，否则冻存。【操作步骤】1. 取50l血浆放入反应杯中预热2分钟；2. 用力加入已预热的含钙组织凝血活酶100l，仪器自动记录凝固时间（以上步骤在血凝仪上完成）【注意事项】:勿延迟血液与抗凝剂的混合；避免样本产生泡沫；2.使用塑料或硅硼酸盐玻璃容器；3.浑浊、脂血、溶血、或黄疸的样本可能引起错误的结果;4.反复冻溶血浆，会损伤细胞膜，影响结果；5.血球压积在2255范围以外,需调整抗凝剂与血液的比例；所有试验器皿必须清洁无污迹；6.急性炎症反应由于纤维蛋白原升高,会缩短PT时间;7.PT 工作要求370.5；8.钠，EDTA和肝素不能用作抗凝剂；9.口服避孕药物，天门冬氨胺酶/皮质酮、EDTA、红霉素、酒精、四环素和抗凝剂,如肝素和华发令可能使PT延长。10.组织胺药、布塔巴比妥、咖啡因、口服避孕药、苯巴比妥/维生素K可能引起PT缩短。【临床意义】：1.延长：见于先天性因子、缺乏症和低（无）纤维蛋白原血症；获得性见于DIC、原发性纤溶症、维生素K缺乏症（慢性肠道病、阻塞性黄疸、新生儿黑粪症）、肝病、血循环中有抗凝物质如口服抗凝剂、肝素和FDP存在。缩短：见于先天性因子增多症；口服避孕药；高凝状态（DIC早期、急性心肌梗塞等）；血栓性疾病（脑血栓形成、急性血栓静脉炎）；多发性骨髓瘤；洋地黄中毒；乙醚麻醉后。是监测口服抗凝剂（如华发令、双香豆素等）的重要指标。操作人员 部门主管 质量负责人姓名 本科工作人员 日期 *年*月*日科主任签字：MC-4000 PLUS血凝仪的使用实验室名称项 目编 号制定日期*血凝仪的使用*年*月*日【项目名称】【该SOP变动程序】本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。【检测原理】:MC-4000 PLUS是由光学原理、电子感应和磁棒机械法相结合的分析原理,进一步完善并采用新的涡轮推进式光密度术检测原理发展而研制的一种新型分析仪.血凝仪是光学-机械原理设计,非常适应脂浊或黄疸样品的凝固分析.采用半导体光源,可使反应管中的血浆在试剂反应后,纤维蛋白原的转变促使凝固促使凝固强度增加或是减少能最大限度地被检测器探到。当加入试剂后，仪器自动检测并报告（活性度、比值、INR、mg/dl、g/L）等有价值得分析结果。每个试验在检测通道加入样品或试剂孵育后，对异常样本如黄疸、脂浊、溶血等，仪器将自动进行调整1015秒；试剂和样品的混匀市通过检测通道中的微型马达的搅拌同步进行的，透明反应杯中的磁性棒与马达上部的磁铁吸附后，随着马达的运转，带动磁棒的运转，使反应物呈涡轮状混匀。这种反应原理可最大限度地促使内含物的凝固，通过光的照射被检测器检测到。【操作步骤】：1. 插上电源，打开电源开关（按仪器后面的POWER键），待仪器自检完成，温度稳定到37.41后，出现如下界面：Remove all cuvettes then press any key此时按仪器面板上的“enter”键，进入以下界面STANDBY 37.4deg4 Fib.mg/dl按“”或“”键可选择所要进行的操作（如编程、更改检测项目等）。.PT的检测显示如下界面STANDBY 37.4deg4 PT按“enter”进入，显示如下界面CUV CUV CUV CUVIn In In In1. 取50l血浆放入反应杯中预热2分钟；2. 用力加入已预热的含钙组织凝血活酶100l，仪器自动记录凝固时间。3 按“enter”将结果传至计算机。.APTT的检测STANDBY 37.4deg2 APTT按“enter”进入，显示如下界面CUV CUV CUV CUVIn In In In1 50l血浆放入反应杯中，然后加入APTT试剂50l，37预热2分钟；2.加入预热2分钟的CaCl2 50l，记录凝固时间。3.按“enter”将结果传至计算机。.FIB的测定从以下界面进入：STANDBY 37.4deg4 Fib.mg/dl按“enter”进入，显示如下界面CUV CUV CUV CUVIn In In In1、 将50l血浆加入450l咪唑盐水（IBS）中，作1:10稀释。2、 取1:10稀释的血浆100l，37预热2分钟，然后加入50l已预热的凝血酶试剂，仪器自动记录凝固时间；3、 按“enter”键将结果传到计算机。、TT的测定从以下界面进入：STANDBY 37.4deg按“enter”进入，显示如下界面CUV CUV CUV CUVIn In In In1、取100l血浆放入反应杯中预热2分钟；2、用力加入已预热的凝血酶50l，仪器自动记录凝固时间；3、按“enter”键将结果传至计算机。【注意事项】1.平常不用时，拔掉电源插头。2.勿加试剂在检测通道中，请勿污染检测器，如果一旦污染或溢出，请中止检测运行，并仔细进行清除，否则将影响仪器的灵敏度。操作人员 部门主管 质量负责人姓名 * * * 日期 *年*月*日科主任签字： 凝血酶时间测定检测的标准操作程序实验室名称 项目 编号制定日期* 凝血酶时间测定* *年*月*日【项目名称】凝血酶时间（Thrombin T）【原理】在凝血酶作用下，待检血浆中纤维蛋白原转化为纤维蛋白。当待检血浆中抗凝物质增多时，凝血酶时间延长。【操作人员】：本实验室实验人员。【仪器】：型号：MC-4000 PUS血液凝血分析仪【试剂】凝血酶试剂（Thrombin Reagent）（1）商标：美创(MDC Hemostasis)（2）包装规格：1.0ml10瓶（3）成分：凝血酶试剂用1.0ml蒸馏水复溶轻