微生物在乳品安全检测中的应用.pdf

40 食品安全导刊 2011年3月刊 AnAlysis & test 分析与检测 微生物在乳品安全检测中的应用， 主要分为两大类： 一类是将以微生物为 基础的方法， 应用到乳品安全检测中， 如用微生物方法检测B族维生素、 抗生 素等； 另一类则是大家普遍熟悉的， 对 乳品安全指标中非常重要的微生物指 标和微生物相关指标进行检测， 如检 测细菌总数、 致病菌、 肠毒素等。 微生物法检测乳品中的 维生素含量 根据某种维生素是某种细菌生长 所必需的原理， 以细菌繁殖程度或代 谢产物定量该维生素含量， 是乳品中 维生素检测的经典方法， 即微生物法。 大量的研究发现， 某种微生物的生长 需要某种特定的维生素为其提供营 养， 而且此种微生物对维生素具有很 强的特异性。 在一定条件下， 微生物的 生长、 繁殖速度与其生长环境中 （溶液 中） 的维生素 （对该微生物有异的） 含 量成一定的对应关系： 含量高则生长 快， 反之则慢。 微生物分析方法由于具有准确可 靠、 广泛适用等特点， 因此已被许多 检测方法的国际标准机构作为部分 维生素分析的标准方法或第一方法。 在第17版AOAC （美国官方分析化学 师协会） 分析方法中， 食物中生物素、 泛酸、 叶酸、 维生素B6、 维生素B12、 尼克酸的第一分析方法均为微生物 法， 维生素B1和B2的第二分析法为微 微生物在乳品安全检测中的应用 廖冰君 拜发分析系统销售 （北京） 有限公司 生物法。 在AACC(美国谷物化学师协 会)审批方法中， 叶酸、 维生素B6、 维 生素B12、 尼克酸的标准分析方法也 均为微生物法。 鉴于微生物法强大的使用优势， 各 种新型产品不断涌现。 在传统培养基 形式的微生物法基础上， R-Biopharm 德国拜发公司创新推出了采用ELISA （酶联免疫吸附分析法） 设计生产的 B族维生素检测试剂盒产品。 这个注册 商标名为Vita Fast的系列维生素检测 产品， 已经获得了AOAC的认证。 该系列 产品具有如下特点: 菌株被固定在ELISA板孔中， 解决了 传统培养基方法中菌株很难培育的问 题， 大大方便并标准化了检测过程， 同 时节省了实验空间和孵育箱的空间。 2448小时内便可得到定量的结 果， 比传统培养基方法缩短了25天。 由于微生物法是利用微生物对于 营养素的敏感性来完成测定， 而生物 体的敏感性是其他任何仪器都无法替 代的， 所以微生物法的灵敏度比其他 仪器法、 化学法都要高。 已被认证为AOAC的标准方法， 全 球已有20家以上的实验室对其进行了 方法验证， 其准确性被广泛公认。 使用R-Biopharm德国拜发公司的 VitaFast微生物法快速检测维生素， 先期投入少， 实验室具备超净台、 培养 箱、 分光光度计和一些实验室常用玻璃 器皿， 即可开展对乳品中的维生素进行 检测等工作， 不需要大量额外的人力和 物力， 适用于任何水平的实验室。 微生物方法 快速检测乳品中抗生素残留 近几年， 牛奶中的抗生素残留问题 越来越受到人们的关注。 欧美等国多 年前明文禁止抗生素残留超量的牛奶 上市， 1990至1991年期间， 美国奶业基 金会规定， 抗生素残留超过允许量标 准的牛乳及其乳品全部废弃处理， 不 得食用。 近年来， 我国也颁布了相关管 理条例， 但是牛奶中抗生素残留问题仍 然时有发生。 目前， 抗生素的检测方法， 按照检 测原理和使用的仪器的不同， 可分为微 生物法、 免疫法、 理化仪器法三类。 微生物法的测定原理是根据抗生 素对微生物的生理机能、 代谢的抑制作 用， 来定性或定量确定样品中抗微生物 药物残留。 微生物法的优点是费用低， 一般实验室都能操作。 如R-Biopharm 德国拜发公司与DSM （帝斯曼） 共同研 发生产的Premi抗生素快速检测产品 （由AOAC认证） ， 可以快速定性检测 出肉类 （牛肉、 猪肉、 鸡肉） 、 蜂蜜、 蛋、 鱼、 虾、 饲料、 乳品及尿液中的抗生素 残留， 包括-内酰胺类抗生素、 磺胺 类抗生素、 四环素类抗生素、 喹诺酮类 抗生素。 该试剂盒使用简单、 结果显示 直观可靠， 适合于屠宰场、 肉类加工厂 、 鱼虾养殖场等领域对抗生素进行现场 Mar 2011 CHINA FOOD SAFETY 41 快速检测。 更为重要的是， 该试剂盒检 测方法无需通过任何复杂设备， 4小时 内即可获得准确可靠的检测结果 （检测 结果通过国际认证和验证， 与仪器检 测结果完全一致） 。 与此同时， 该方法已通过多个国家 和地区的官方认证： 在法国， 已被用于 国家检查计划中； 在德国， 按照欧盟指 令2002/657/EC已对其进行了官方验 证； 在俄罗斯， 已成为No.14.6/01921的 官方认可方法； 在比利时、 斯洛伐克、 捷克、 塞尔维亚、 香港、 台湾、 阿尔巴尼 亚和南美等地均获得了官方认可。 乳品中微生物检测 乳品在生产、 加工、 储存、 运输、 销 售等各个环节中都有可能被微生物污 染。 一旦被污染， 微生物将大量繁殖而 引起乳品腐败变质， 或导致食源性感 染和食物中毒事件的发生。 乳品中微生物检测项目主要包括： 食源性致病菌检测、 卫生指标菌的计 数及商业无菌检测等。 传统的检验方法 由于涉及的实验多、 花费时间长、 操作 繁琐， 而且需要大量人员参与， 因此选 择准确、 省时、 省力和省成本的快速检 验方法成为乳品企业的迫切需要。 乳品中的致病菌检测 生物毒素是一类重要的天然污染 物， 根据来源可分为： 微生物毒素、 动 物毒素、 植物毒素。 近年来， 由生物毒 素引起的食物中毒事件和食品贸易争 端已引起各国政府的普遍关注。 在各 种食物中毒中， 微生物毒素中毒最为 常见。 其中， 金黄色葡萄球菌肠毒素的 危害最大， 现已成为世界性卫生问题， 在美国由其引起的食物中毒占整个细 菌性食物中毒的33%， 加拿大则多达 45%， 同时， 在我国由其引起的食物中 毒事件也非常多。 因此， 乳品中致病菌 检测已成为各个国家和地区卫生防疫 部门重点检测项目。 ELISA具有灵敏度高、 干扰小、 操作 简便快捷、 安全性高、 污染小等优点， 适合于食品中生物毒素的快速检测。 常 用的ELISA检测方法有， R-Biopharm德 国拜发公司生产的RIDASCREEN SET Tatol金黄色葡萄球菌肠毒素总量检测 试剂盒和RIDASCREEN SET A、 B、 C、 D、 E金黄色葡萄球菌肠毒素分型检测 试剂盒， 其具有方法简便、 无需特殊仪 器， 也不用特殊手段提取抗原等优点， 是目前少有的对金黄色葡萄球菌肠毒 素进行分型的检测产品， 现已成为国标 方法被广泛使用。 为了实现对乳品中致病菌的快速、 准确检测， R-Biopharm德国拜发公司 还推出了RIDASCREEN Salmonella沙门 氏菌检测试剂盒、 RIDASCREEN Listeria 李斯特菌检测试剂盒和RIDASCREEN Campylobacter空肠弯曲菌检测试剂盒， 这些产品均采用ELISA酶联免疫检测方 法。 其中RIDASCREEN Salmonella沙门 氏菌检测试剂盒可以在22小时内快速准 确 地 检 测出沙门 氏菌， 该 产品已通 过AFNOR （法国标 准协会） 认证， 并 被 认 定 为是目前 世界上最快的沙门氏菌检测方法之一。 RIDASCREEN Salmonella沙门氏菌检测 试剂盒在2009年和2010年的美国及欧 洲沙门氏菌爆发事件中， 得到官方卫生 机构的大量使用。 乳品中细菌总数 及微生物污染状况检测 乳品安全检测中的重点是对细 菌总数及微生物污染状况的检测。 R-Biophar德国拜发公司的RIDA Coun 系列微生物测试片， 可分别检测菌落总 数、 大肠菌群计数、 大肠杆菌计数、 霉 菌和酵母计数、 肠杆菌等。 RIDA Count系列产品与传统检测 方法之间的相关性非常好， 并且操作简 便、 快速、 省料。 例如， 采用菌落总数快 速检测片和大肠菌群快检纸片， 对乳品 生产线的表面、 操作人员的手掌、 器皿 表面及空气中的浮游菌进行检测时， 其 特异性、 敏感性与发酵法符合率非常 高。 采用霉菌和酵母菌快速检验纸片 检测乳品中霉菌和酵母菌， 仅需25恒 温培养， 在48小时内即可完全对样品中 的霉菌和酵母菌进行计数， 比现在的 国家标准检验方法缩短35天， 且菌落 典型， 易判定， 该产品已成为目前全球 最快的霉菌和酵母菌检测方法。 使用RIDA Count系列微生物测试 片不要求必须具备微生物实 验室，