第十六章 唾液及唾液斑检验ppt课件.ppt

第十六章唾液及唾液斑检验,1,2,罗卡定律,1910年，法国警官艾德蒙罗卡内容：所有接接触必留下痕迹凡两个物体接触，必定会有所交换（转移）意义：刑事鉴识人员攻克无数难关的核心武器法医学的黄金法则。,3,打喷嚏不光会传播疾病还会,4,5,6,7,第一节概述,一、唾液（斑）的特点概念：唾液（saliva）：唾液腺的分泌物唾液斑（salivastain）：唾液干燥后形成的斑痕唾液来源：颌下腺约70%，腮腺约25%,舌下腺约5%，其余小唾液腺,8,9,成分：（水分占99.4%）有机物-粘/球蛋白质、氨基酸、尿素、尿酸、唾液淀粉酶、麦芽糖酶、血型物质无机物-钠、钾、氯、钙、铵、磷酸盐、碳酸盐、硫氰酸盐，其余为固形物（口腔脱落上皮细胞、大量细菌、食物残渣）性状：无色、无味、接近中性（ph6.6-7.1）分泌量：正常成年人每日分泌唾液约1.01.5升，分泌量及性质受精神因素、刺激的强度和性质及食物种类有关系。,10,湿润口腔，调和润湿食物，使食物溶解并引起味觉，便于吞咽淀粉酶可水解淀粉及糖原，起到消化作用；防止口腔干燥，清除食物残渣，洁净口腔；其中硫氰酸盐及蛋白质抗体可杀灭细菌。某些动物唾液中含神经生长因子和表皮生长因子可有助于创面收缩，伤口愈合。中和胃酸保护胃壁。,二、唾液的功能,11,应用价值：主要是个人识别和亲子鉴定方面。目的要求：是否唾液（斑）；个人识别,三、唾液（斑）检验,能否正确收集与保存唾液（斑）是检材能否正确鉴定的关键所在。,12,第二节唾液（斑）的提取,可能出现的地方：现场的烟蒂、手帕、口罩、纸巾、瓜子皮、果核、嚼过的口香糖、喝过水的茶杯；尸体皮肤（口唇部、乳房）及其他物品上的咬痕等均可遗留有唾液斑。,唾液斑在白色背景下呈现淡黄色，紫外线下发淡青色荧光,13,14,一、中华人民共和国安全行业标准中制定了血液及体液检材的提取标准，其中也包括了唾液（斑）的相关内容。,15,1、新鲜唾液的提取：应要求被鉴定人先漱口，再将纱布或棉拭子放人口中，浸湿后取出，立即置通风干燥处晾干，分别包装，作好有关的记录。也可将自然流出的唾液12mL，置干净容器内置冰冻保存，或者立即放水浴中煮沸10min，灭活唾液中的血型分解酶活性，然后置4冰箱保存。,常用的唾液（斑）提取方法,16,2、现场发现可以痰迹或尸体皮肤及其他物体上咬痕部位的可疑唾液斑，应用生理盐水浸润的棉拭子或纱布，擦拭斑迹，再用干棉拭子或纱布擦拭相同部位，晾干，该两份提取物应装入同一物证袋晾干后包好，备检（两步法擦拭）。3、烟蒂、瓜子壳、果核均应用镊子提取，按不同提取部位分别装入物证袋，做好标记。,17,4.对可疑的用于堵嘴的手帕或衣物等均应整件提取，如有湿润部位，应晾干后包装送检。5.犯罪分子用过的可疑口杯、茶具等均可用两步擦拭法擦拭其边缘部位，或直接送检。6.信封口或邮票背面可疑遗留唾液斑时，对该信封和邮票整件提取，装物证袋，送检。,18,第三节唾液（斑）的检测,1、肉眼检验2、预实验3、确证实验4、个人识别,19,1、肉眼检验唾液斑在白色背景下呈现淡黄色唾液斑在紫外线下发出淡青色荧光,20,2、预实验（1）淀粉-碘试验（2）不溶性淀粉-染料复合物试验（3）斑点法,21,试验原理：淀粉遇碘呈蓝色。唾液中含有大量淀粉酶，能将淀粉分解为糖，糖与碘不呈蓝色反应。因此，将已知淀粉溶液与唾液斑作用后，再加碘，若不显蓝色，说明反应体系中淀粉已被唾液淀粉酶分解。然后再利用糖的还原作用验证淀粉分解产物糖的存在，便可判断检材中含有淀粉酶。,淀粉-碘试验,22,主要试验材料：0.01%淀粉溶液、碘液、1%氯化三苯基四氮唑溶液、碱性铜试剂等试验方法：首先证明淀粉酶的存在，然后阳性者进一步证明糖的存在。,23,试验结果分析：有无蓝色变化；有无红色沉淀试验注意事项：本试验灵敏度较高，要注意所出现假阳性如烟草浸出液；假阴性结果，如陈旧检材。,24,3、确证实验（1）口腔黏膜脱落上皮细胞检查（2）三氯化铁试验（3）其它（抗腮腺素血清、发射光谱法、叠氮钠法等）,25,唾液中含有口腔粘膜脱落上皮细胞，将检材用生理盐水充分浸泡，弃去载体，离心，取沉淀物涂片，干燥后HE染色，显微镜下检查。如发现口腔粘膜脱落上皮细胞，结合淀粉酶试验阳性结果，可判断为唾液斑，如同时查见食物残渣，则更支持此结论。,口腔粘膜脱落上皮细胞的检查,26,三氯化铁试验,试验原理：唾液中硫氰酸根离子在酸性条件下可与高价铁离子反应生成红色络合物。试验材料：40%三氯化铁溶液，2.9M盐酸,27,试验方法：将一滴可疑唾液或唾液斑浸液滴于白瓷板凹内，先加一滴2.9M盐酸溶液，再加一滴40%三氯化铁溶液，摇匀，观察结果实验结果：呈现浅红色者为阳性反应，证明是唾液斑。硫氰酸根离子浓度较高时，呈现棕红色或深红色，不变色或棕绿色则为阴性反应。,28,注意事项：本法的特异性优于淀粉酶检出法，灵敏度虽然低于淀粉酶检出法，但对于腐败唾液斑而言，该法不受影响。当淀粉酶检出试验阳性，在排除被硫氰酸盐、溴化钾、重铬酸钾等化学药品污染情况下，强阳性结果可以确证唾液斑。,29,4、个人识别（1）唾液（斑）红细胞血型检测（2）唾液（斑）多态性蛋白和酶的检测（3）唾液（斑）的DNA分析（4）唾液(斑)的性别鉴定,30,中和试验（测定原理及方法与精斑类似）免疫学方法：灵敏度高，适用于非分泌型和中和试验阴性者，斑点ELISA、ELISA-ABC等其它方法：解离试验、混合凝集试验,31,唾液（斑）多态性蛋白：唾液碱性蛋白、唾液酸性蛋白、唾液富含脯氨酸蛋白、唾液双带蛋白、腮腺唾液中带快蛋白等唾液（斑）多态性酶：唾液淀粉酶、唾液脂酶、唾液6-磷酸盐脱氢酶、唾液酸性磷酸酶等检测方法：酸性尿素淀粉凝胶电泳、碱性PAGE和等电聚焦电泳,32,图1聚丙烯酰胺凝胶电泳Pr表型模式图,等电聚焦电泳：唾液淀粉酶6种表型PAGE：唾液脂酶3种唾液过氧化物酶3种唾液富含脯氨酸蛋白3种（图1）唾液糖蛋白11种,33,口腔粘膜脱落上皮细胞：据报道，每15ml唾液及漱口水、每5cm2的唾液拭子与唾液斑DNA平均含量分别为12g、22g、1.3g及0.8g。测定10个烟头，每个烟头DNA的平均含量是12120ng。基因组和线粒体DNA分析DNA提取方法：Chelex-100法、有机溶剂法及其它,准确、有效地从唾液（斑）中提取DNA，是进行DNA分析的关键。,34,分析血痕、精斑DNA多态性的方法，均能应用于唾液。好的唾液斑检材，只要能提取出大分子DNA，可进行DNA指纹图分析；陈旧唾液斑，DNA部分降解，可用PCR法分析。所以分析DNA多态性是目前进行唾液(斑)个人识别的有效手段。,35,形态学分析X、Y染色质DNA分析1.染色体特异性片段：DXS4542.X-Y同源序列：牙釉基因(Amelogenin)、ZFYZFX基因3.Y-STR或X-STR,36,37,案例分析一,某日，在某地一大桥洞中发现一具无名男尸。经法医检验，确定为他杀。死因是棍棒致颅脑损伤死亡。现场勘验提取到的主要法医物证为2根带血迹的木棒、5处血迹、4堆瓜子壳、8枚烟蒂案。,38,物证检验结果：现场5处血迹、2根木棒上血迹均为死者所留；现场8枚烟蒂和3堆瓜子壳上唾液斑分别为不同于死者的另外4名男性所留，另1堆瓜子壳上唾液斑未检出STR分型数据。通过DNA数据库比对，直接认定案犯。,39,瓜子壳上唾液斑DNA提取的特点：按照一般人嗑瓜子的习惯，一堆瓜子壳为同一个人留下的可能性较大，所以在现场提取瓜子壳时应注意按照不同方位分堆提取，不能全部集中在一块提取。在DNA检验时可以在同一堆内选择2至3枚瓜子壳放入同一离心管中进行检验。由于每个人嗑瓜子的方式不同，在瓜子壳上留下的唾液量也有较大差异，因此对送检的瓜子壳要认真挑选比较新鲜的瓜子壳，要注意挑选相对潮湿的含唾液成分较多的进行检验，这样检验成功的概率比较高。瓜子在加工时一般加入糖、盐、味精等佐料，这些成分对DNA扩增有一定的抑制作用，所以用Chelex-100法提取后要进一步纯化处理。,40,案例分析二,2006年某日，在一出租房内，发现龙某(女，20岁，)下身裸露倒在床上，已死亡。现场位于一砖混结构的出租房内，有清理痕迹，地面倒有大量水痕，此现场为破坏现场，现场勘验没有提取到有价值的痕迹物证。死者龙某颈部勒有一条撕破的短裤，死因系机械性窒息。提取死者阴道拭子、地上水迹等相关物证。考虑到死者有被性侵犯的迹象，对尸体的左右乳房、口唇部斑迹进行提取。,41,物证检验结果：龙某阴道拭子和外阴拭子均检出精斑，均为龙某男友曾某所留；龙某口唇部擦拭物检出唾液斑成分，为龙某和曾某两人混合；龙某右乳擦拭物检出唾液斑成分，为排除龙某男友曾某外的另一名男性A所留；龙某左乳擦拭物检出唾液斑成分，为龙某、曾某和男性A混合。通过排查把目标锁定在案发后失踪的郭某身上。对郭某暂住房进行勘查，提取地3枚烟