高效液相色谱仪的原理及应用ppt课件.ppt

2019/12/4,高效液相色谱仪的原理及应用,1,2019/12/4,一、高效液相色谱法的定义和分类,流动相是液体的色谱称为液相色谱（LC）。在液相色谱中，采用颗粒十分细的高效固定相，并采用高压泵输送流动相，全部工作通过仪器完成，这种色谱称为高效液相色谱（HPLC）。,第一节高效液相色谱法原理,2,2019/12/4,一、高效液相色谱法的定义和分类,液相色谱：平板色谱和柱色谱。液相色谱：分配色谱、液固色谱、离子交换色谱、尺寸排阻色谱。气相色谱：挥发性物质，不能用于热不稳定物质分析。液相色谱：可分析各种物质，热不稳定物质，但流动相有毒，运行操作比GC难。能用GC就用GC。,3,2019/12/4,二、液相色谱中常用术语和参数,只针对HPLC特有的，其余术语与第三章同。粒间体积（V0）：色谱柱填充剂颗粒间隙中流动相所占有的体积。孔体积（Vp）：色谱柱中多孔填充剂的所有孔洞中流动相所占有的体积。,4,2019/12/4,二、液相色谱中常用术语和参数,柱外体积（Vext）：从进样系统到检测器之间色谱柱以外的液路部分中流动相所占有的体积。液体总体积（Vtot）：粒间体积、孔体积和柱外体积之和。淋洗体积（V）：从进样开始计算的通过色谱柱的实际淋洗体积。,5,2019/12/4,三、反相高效液相色谱,由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系。其代表性的固定相是十八烷基键合硅胶(ODS柱），代表性的流动相是甲醇和乙腈。是当今液相色谱的最主要分离模式。溶质在填料表面的烃类和流动相之间进行分配。溶质在吸附于填料表面烃类上的“改良固定相”和流动相之间进行分配溶质被吸附于填料表面烃类分子上，类似吸附色谱。,6,2019/12/4,四、正相高效液相色谱,是由极性固定相和非极性（或弱极性）流动相所组成的HPLC体系。其代表性的固定相是改性硅胶、氰基柱等，代表性的流动相是正己烷。吸附色谱也属正相HPLC。溶剂洗脱强度近似地随溶剂的介电常数增加而增大，洗脱能力越弱，溶质在柱上保留时间越长。,7,2019/12/4,第二节高效液相色谱仪的组成,Agilent1100,8,2019/12/4,1.输液系统2.进样系统3.分离系统4.检测系统5.数据处理系统,一高效液相色谱仪系统,高压泵,流动相溶剂,废液,色谱柱,进样口,检测器,9,2019/12/4,1、输液系统,贮液装置脱气装置高压输液泵梯度淋洗系统,输液系统的功能:1.提供足够的驱动力使流动相通过填充柱2.使流动相流量精确和稳定3.使流动相组成精确,10,2019/12/4,分析用高效液相色谱的流动相贮罐，常用1L的锥形瓶加一个电磁搅拌器，在连接到泵入口处的管线上要加一个过滤器。,(1)贮液装置,11,2019/12/4,(2)脱气装置用于脱去流动相中的溶解气体，流动相先经过脱气装置再输送到色谱柱。脱气机、超声脱气、真空脱气等。,12,2019/12/4,(3)高压输液泵主要部件之一，压力：150350105Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（甲酰胺乙腈甲醇乙醇丙醇丙酮二氧六环四氢呋喃甲乙酮正丁醇乙酸乙酯乙醚异丙醚二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小),32,2019/12/4,1、环境中有机氯农药残留量分析固定相：薄壳型硅胶(3750m)流动相：正己烷流速：1.5mL/min色谱柱：50cm2.5mm(内径)检测器：折光示差检测器,可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。,第三节HPLC的应用,33,2019/12/4,2、稠环芳烃的分析,稠环芳烃多为致癌物质。,固定相：十八烷基硅烷化键合相流动相：20%甲醇-水100%甲醇线性梯度淋洗，2%/min流速：1mL/min柱温：50C柱压：70104Pa检测器：紫外检测器,34,2019/12/4,例：液相色谱法测定食品中苯并(a)芘原理：样品经过提取、皂化以及柱层析净化，除去脂肪类物质、色素等杂质后，再通过液相色谱仪中的色谱柱，将苯并芘从多环芳烃物质中分离出来。求出样品中苯并芘的含量。仪器：(1)液相色谱仪：色谱柱：ODS柱，柱长250mm，4mm；柱温：30；流动相：75甲醇；流速：2mLmin。(2)检测器：荧光检测器，激发波长369nm，荧光波长405nm。,35,2019/12/4,操作步骤：(1)定性测定用微量注射器吸取一定量的苯并芘标准溶液和样液，注入色谱仪内，根据苯并芘的出峰保留时间和样品中加标准样产生重叠的情况进行定性。(2)标准曲线的绘制用微量注射器准确吸取每1mL含1g的苯并芘标准溶液1、2、3、4、5uL按照上述实验条件进行操作，以获得相应的色谱图。然后，分别测量各个色谱的峰面积。以峰面积为纵坐标，标准苯并芘量为横坐标，绘制标准曲线。(3)样品的测定：在上述实验条件下，吸取一定量经过柱净化的样品提取液，注入液相色谱仪中进行分离、分析，测得峰面积，然后从标准曲线上查出相应于此面积的苯并芘含量。,36,2019/12/4,Waters515高效液相色谱泵，Waters717自动进样器，Waters2487双波长紫外检测器，联想数据处理机，Waters3.9X150mmC18不锈钢柱,流动相：甲醉、水体积比30：70和15：85两种，超声波除气泡,3、鱼组织中喹乙醇残留量的检测,