（作物栽培学与耕作学专业论文）黏菌显型原质团显微—亚显微形态及核骨架的研究.pdf

摘要 非细胞黏菌的原质团是真黏菌在生活周期中的营养生长阶段，根据性状，原质团 可以分为三个类型，显型原质团、隐型原质团、原始型原质团。绒泡菌目、发网菌目、 刺轴茵目分别形成这三种原质团。本文是以绒泡茵目的几种黏菌显型原质团为材料， 进行了原质团形态特征、显微结构、亚显微结构等的观察，并对扁绒泡原质团中的细 胞核进行了核骨架研究。 黏茵原质团的形态大小、颜色、结构等都具有分类学上的意义，原质团具有的迁 移、摄食等特性和最终形成不动的子实体使黏菌的归属问题一直争论不休。对它进行 显微结构和亚显微结构的研究，试图为它的归属问题提供依据。 黏茵原质团中的细胞核是游离存在的，并且进行着同步有丝分裂。这使得对细胞 核的提取比较容易，并能获得同一时期的细胞核，这一点对细胞核的遗传学、生物化 学的研究极为有意义。就以核骨架研究为例，不同时期的细胞核核骨架一定会有差别。 以扁绒泡原质团中的细胞核为材料进行核骨架的研究，期望黏茵原质团成为研究核骨 架及其它细胞周期中生化事件的模式材料。在以其它生物材料进行核骨架研究时，在 提取细胞核时就会对核骨架造成破坏，因为核骨架在细胞中是和核纤层及胞质骨架构 成统一的整体。原质团中的细胞核是独立存在的，得到的核骨架将更加完整，使核骨 架的研究在材料上大受裨益。这就是本文的目的年口意义。 本实验对几种黏茵显型原质团进行了长时间的喂饲培养，在体视显微镜下研究了 原质团的一般形态特征。在光学显微镜下观察了原质团的内含物，原质团中进行同步 有丝分裂的细胞核以及在子实体形成前进行减数分裂的时期。在电镜下观察了原质 团、幼胞囊及茵核的超显微结构。茵核是利用饥饿一干燥法，对原质团进行诱导所得。 利用分光光度测定法，得到了几种黏菌原质团的总蛋白和d n a 含量，对黏菌原质团的 盐溶蛋白进行酸性电泳分析，试图在原质团的水平上鉴定黏茵的种类。 结果表明：黏菌的原质团可以在水琼脂，喂饲燕麦粉或燕麦粉培养基上继代长期 生长。显型原质团一般形态比较大而明显，是具有胶黏性的半流动体，伸展面的前部 常呈扇型，边缘明确，后部则为网脉状，原生质有流动现象。原质团没有细胞壁，是 裸露的原生质，但原质团包有一层胶黏质的鞘，鞘舍有微纤丝，并随着原质圊在基物 上的爬行而被蜕去留下痕迹。黏菌原质团具有摄食性，线虫和霉菌可以侵染原质团。 光学显微镜下在原质团中可以看到大型的石灰质颗粒、晶簇、斜方晶。原质团中 的细胞核是游离存在的，细胞核的同步有丝分裂不伴有胞质分裂，最终形成多核的原 质团。在形成子实体前进行减数分裂，发生时期是在胞囊形成期，当形成幼孢子时， 减数分裂就已经结束了，得到了减数分裂形成的二分体和四分体，也观察到不均衡的 减数分裂，这可能是造成孢子染色体数不一致的重要原因。 在电镜下观察到的原质团是非细胞结构的。除含有细胞核外，还舍有线粒体，消 化胞，一些代谢中间产物，还有其它一些不能确定的物质。超微结构的观察表明，原 质团的一些特性，更象动物而非植物，高等真核生物具有的它也具有。在幼子卖体的 电镜观察中，得到了解旋的染色质。 在不良的环境下，显型原质团可以形成坚硬角质的菌核，内含有大量的内胞囊， 茵核可以认为是内胞囊的集合体，内胞囊中含有核、线粒体和油滴。 当原质团遇到不良的环境，或是形成子实体，或是形成菌核，这是黏茵生活周期 的两个方向，煤绒菌在形成子实体时，需要的原质团量大，在培养皿上培养很难满足， 所以更容易形成茵核，针箍菌更容易形成子实体，在研究菌核时选煤绒菌，在研究子 实体形成时选针箍茵。煤绒菌和针箍菌是我们研究的材料中生长量较大的原质团。 原质团中的总蛋白含量以煤绒菌为最高，扁绒泡最低。d n a 的提取可以采用简单 的氯仿异戊醇的方法进行。在d n a 含量测定中，煤绒茵的d n a 含量最高，扁绒泡的 最低。原质团中化学物质的含量，尤其是d l q a 的含量和核提取的难易没有相关性。 在对原质固的盐溶蛋白进行酸性电泳的分析中，不同的原质团得到了特征谱带， 并具有一定的重复性。 真核细胞的细胞核中存在有骨架系统，它和细胞质骨架及染色体骨架构成一个完 整的体系。核骨架主要由非组蛋白弄口少量的i ) n a 、r n a 组成。非组蛋白是核骨架的主 体，d n a 可能是遗传物质和核骨架的功能结合，r n a 对核骨架的结构起着重要的作用。 核骨架是细胞核中的一种重要组成成分。它在染色质定位、染色体包装、d n a 复制、 转录、h n r n a 的加工、以及细胞程序性死亡等诸多生物学事件中有重要的作用。就已 经识剐、鉴定争详细研究过的蛋白质而言，它们无论是与细胞核争染色体的结构有关， 或是与细胞核内的生命活动相关的酶类，还是各种各样的调节因子，都构成了核骨架 的结构和( 或) 功能的分子基础。目前只有少数核骨架的非组蛋白得到了识别和认定， 同时，细胞核内的非组蛋白的研究远不如组蛋白的全面深入，今天，对于蛋白质是否 为遗传物质问题的重新探讨，更加深入地认识蛋白质，尤其是非组蛋白具有着时代意 义。 本文以扇绒泡的原质团为材料，根据前人的经验设计了一个可行的提取实验步 骤，得到了较为纯净的细胞核，对核骨架蛋白用l i s + n p 4 0 、l i s + t r i t i o n x 一1 0 0 、 n a c i + n p 4 0 、n a c l + t r - t i o n x - 10 0 不同的抽提方式进行s d s 一凝胶电泳分析。采用 e p o n 8 2 的包埋技术，饿酸固定，醋酸双氧铀及柠檬酸铅后染色方法，在电镜下，以 使用r n as e 和不使用r n a s e 作为对照，观察核骨架的形态，研究r n a 在核骨架结构中 的作用。 ， 结果表明：原质团中的细胞核是游离存在的。在提取过程中，不需要较大的剪切 力，也不需要细胞的低渗溶胀作用。并可以得到同一时期的细胞核，在核的生物学研 究上要优于一般的组织，也优于悬浮培养的细胞。所以它是研究细胞核的良好材料。 在核提取过程中采用黏i 滞j 陛的介质，是为了增加缓冲作用，减少对核的损害，以 原质团为材料进行核提取时，不宜采用黏滞性较大的介质，否则原质团很难彻底匀质， 对核产率不利，而原质团自身的黏滞性对核就有较大的保护性。 s g s 一凝胶电泳分析表明，用四种方法都能有效地抽提掉组蛋白和部分非组蛋白。 至少可以分辨出2 0 条蛋白谱带，所得到的蛋白质谱带几乎非常相似，证明了低等的 真核生物在某些方面不如高等生物敏感。 在电镜的包埋中可以利用同种原质团代替低熔点琼脂糖，并可以获得更好的效 果，使切片更加容易。在电镜的观察下，发现了去除组蛋白和部分非组蛋白后，细胞 核内仍残留有纤维网络样的结构，本文认为这是扁绒泡原质团的核骨架。并随着 r n a s e 的使用或不使用，得到的结果也有所差异，所以，r n a 在核骨架的结构中起到 一个连接各种非组蛋白的作用，同时我们也认为核骨架在电镜下的状态完全是随着实 验方法的不同而有所变化的。 本丈在实验材料的选择上是一次板有意义的尝试，黏菌原质团细胞核存在的特 点，将逐渐让人们认识到它在细胞核研究上的巨大潜力。 以扁绒泡的原质团为材料进行的核骨架的研究，在电镜下看到了完整的核骨架， 和未经r n as e 处理的网状的骨架形态，证实了原质团中的细胞核富舍骨架系统，也为 她a 在核骨架中的作用提供了有力的证据。 关键词：黏菌；显型原质团；显徽结构：亚显微结构；核骨架 i a b s t r a c t p l a s m o d i ao fm y x o m y c e t e si st h e v e g e t a t i v eg r o w t hp h a s e i ni t sl i f e c y c l e p h a n e r o p l a s m o d i u m ，a p h a n o p l a s m o d i u m a n d p r o t o p l a s m o d i u m b r ed i v i d e db a s e do ns o m e c h a r a c t e r s w h i c ha r ef o r m e db yp h y s a r a l e s , s t e m o n i t a l e sa n de c h i n o s t e l i a l e s i nt h i s t h e s i s ，u s i n gs e v e r a lp h a n e r o p l a s m o d i u m i np h y s a r a l e sa sm a t e r i a l s ，t h em o c h a c h a r a c t e r , m i c r o s t r u c t u r e ，u l t r a s t r u c t u r eo fp l a s m o d i u m ，a sw e l la st h en u c l e a rm a t r i xo fp h y s a r u m c o m p r e s s u m ，w e r e s t u d i e d t h e s h a p es i z e ，c o o u r , a n ds t r u c t u r eo f p l a s m o d i u m r r ei m p o r t a n tt r a i t so n t a x o n o m y i ti sac o n t r o v e r s i a li s s u et h a tw h e t h e rm y x o m y c e t eb e l o n gt of u n g if o rt h ec h a r a c t e ro f m i g r a t i o n ，t a k i n gf o o da n df o r m i n gi m m o b i l i t yf r u i tb o d y t os t u d yo n m i c r o s t r u c t u r e a n du l t r a s t m c t u r em a y p r o v i d es o m e i n f o r m a t i o nf o rm y x o m y c e t e t a x o n o m y t h ee x i s t e n tf o r mo f p l a s m o d i u m n u c l e ia r ef r e e w i ms y n c h r o n o u sm i t o t i cd i v i s i o n s t h i sf e a t u r em a k e si te a s i e rt oe x t r a c tn u e l e if r o mp l a s m o d i a , a n do b t a i ns y n c h r o n o u s n u c l e i t 1 1 i sp o i n ti si m p o r t a n ti ng e n e t i c sa n db i o c h e m i s t r yo fn u c l e i ，f o re x a m p l e ，t h e n u c l e a rm a t r i xf r o md i f f e r e n ts t a g en u c l e u sa r ev a r i e d s t u d i e do nn u c l e a rm a t r i xo f 户 c o m p r e s s u mw h i c hw a se x p e c t e dt o b em o d e lf o rk a r y o s k e l e t o na n do t h e rm a t t e r so f b i o c h e m i s t r yi nc e l lc y c l e t h em a t r i xw e r ed e s t r o i e dw h i l ee x t r a c t i o nn u c l e if r o mo t h e r m a t e r i a l s ，f o rl ( ；a r y o s k e l e t o ni sc o m p l e t es y s t e m w i t hl a m i n aa n d c y t o s k e l e t o n i tc a l lo b t a i n i n t a c tn u c l e if r o mp l a s m o d i u m a si ti si n d e p e n d e n t t h e p l a s m o d i u m i sp r o f i t a b l ef o r s t u d y o f k a r y o s k e l e t o n t l l i si so n e o f t h eo b j e c t i v e so f t h i ss t u d y i nt h i st h e s i s ，s e v e r a lp h a n e r o p l a s m o d i aw e r ef e e da n d c u l t u r e df o rl o n gt i m e s t u d i e d o ng e n e r a lm o c h ao fp l a s m o d i u mu n d e ra n a t o m i c a ll e n s o b s e r v e do nm a t e r i a l si nt h e p l a s m o d i u m ，n u c l e u s w i t h s y n c h r o n o u sm i t o s i s ，p o s i t i o n o fm e i o s i su n d e r o p t i c a l m i c r o s c o p e o b s e r v e d o nu l t r a s t r u c t u r eo fp l a s m o d i u m ，i m m a t u r es p o r a n g i u ma n d s c l e r o t i u mw h i c hw a si n d u c e d v i a h u n g r y d r y u n d e rt r a n s m i s s i o ne l e c t r o n m i c r o s c o p e ( t e m ) d e t e r m i n a t i o n o nt o t a lp r o t e i na n dd n ac o n t e n to fs e v e r a lp l a s m o d i a w a sd o n eb yu s i n gs p e c t r o p h o t o m e t r i cm e a s u r e m e n t a n a l y s e so ns l a t - d i s s o l v e dp r o t e i n e l e c t r o p h o r e s i so fs e v e r a l s l i m em o l d sp l a s m e d i aw a sp e r f o r m e d t r yt oi d e n t i f ys l i m e m o l do n p l a s m o d i u m 1 e v e l i v t h er e s u l ts h o w e d ：t h e g r o w t ho f p l a s m o d i u m o nan o n n u t r i e n t a g a rp l a t es u b s t m t eo f o a t m e a lo ro a t m e a la g a rh a sb e e nc o m m o n t h e g e r e r a ls h a p e so fp h a n e r o p l a s m o d i aa r e a l w a y sl a r g ea n do b v i o u s ，s t i c k ya n ds e m i - f l u i d ，i nt h ef r o n to f i t ss p r e a d e ds u r f a c es h o w s f a n - s h a p e dw i t hc l e a re d g e ，a n di nt h eb e h i n ds h o war e t i c u l a t e s h a p e dw i t hr e c i p r o c a t i n g f l o wo fc y t o p l a s mr e p l a c e sc o n v e n t i o n a lc e l l u l a ro r g a n i z a t i o n b a r e n e s sp l a s m o d i u mn o c e l lw a l l ，c o v e r e dw i t hs t i c k ys h e a t ho u t s i d ec o n t a i n i n gm i c r o f i b e r sw h i c hl e a v eb e h i n d m o t i l i t yp l a s m o d i u m p l a s m o d i u nt a k ef o o dl i k ep r o t o z o a c r u d ec u l t u r es u c ha st h e s e w e r e f r e q u e m l yo v e r g r o w nb yc o n t a m i n a t i n gm o l d sa n dn e m o t o d e s l i m eg r a n u l a r , s t a r - a r i s t a , s l a n t i n gs q u a r e c r y s t a lw e r ef o u n di np l a s m o d i au n d e r o p t i c a lm i c r o s c o p e n u c l e ia r ef l e e i np l a s m o d i a , a n dn u c l e a rd i v i s i o nd o e s n tf o l l o w c y t o p l a s ts e p a r a t i o n ，a n dp l a s m o d i a b e c o m ei n t om u l t i - n u c l e ia tl a s t u n d e r g o i n g s y n c h r o n o u sm i t o t i cd i v i s i o n t h ep o s i t i o no fm e i o s i si nl i f ec y c l ei si nt h ed e v e l o p i n g s p o r a n g i u mp r e c e d i n gs p o r ef o r m a t i o n d y a d ，t e t r a da n da b e r r a n td a u g h t e rc e l lw e r es e e n ， t h i sm a y b et h er e a s o n w h yv a r i n gc h r o m o s o m en u m b e r i nt h es p o r e t h en o n s t r u e t u r ep l a s m o d i u mw a so b s e r v e du n d e rt e m ，w h i c hc o n t a i n s n u c l e i ， m i t o c h o n d r i o n , d i g e s t i o nv a c u o l e ，m e t a b o l i cp r o d u c t sa n du n i d e n t i f i e dm a t e r i a l s t h i s s h o w e dt h ep l a s m o d i u ml i k ea n i m a l st h a np l a n t s o m em a t e r i a l sp o s s e s s i n g b yh i g h e u k a r y o t i co r g a n i s mw e r ef o u n di np l a s m o d i u m u n w o u n dd n a w a sf o u n di ny o u n g s p o r a n g i u m a l s o 。 t h e p l a s m o d i u m b e c o m es t r o n gh o r n ys c l e r o t i u mi nt h eb a d e n v i r o n m e n t ，i n v o l v i n g a l o t so f d o r m a n c yc e l l s ( s p h e r u l e s ) as c l e r o t i u mc a n b ec o n s i d e r e da sa g r o u p o f s p h e r u l e s n u c l e i ，m i t o c h o n d r i o na n d o i ld r o p sw e r ei n v o l v e di ns p h e r u l e s f r u i tb o d ya n ds c l e r o t i u ma r et w od e v e l o p i n gw a yi nl i f ec y c l eo f m y x o m y c e t ew h i c h f a l la c r o s sb a d n e s ss u r r o u n d i n g + i ti sd i f f i c u l tt oi n d u c ef r u i tb o d yf r o mf u l i g os e p t i c a , t o f o r ms c l e r o t i u mf r o mp h y s a r e l l ao b l o n g a t h eb e t t e rm a t e r i a lt os t u d ys c l e r o t i u mi se s e p t i c a ，a n d t os t u d yf r u i tb o d yi sp o b l o n g a t h e p r o t e i na n dd n a c o n t e n to fp l a s m o d i u mo fe s e p t i c ai sh i g h e rt h a no t h e r s ，a n d v p c o m p r e s s u m i sl o w e rt h a no t h e r s ac o n v e n i e n tm e t h o ds u i t a b l ef o rd n a e x t r a c t i o nf r o m p l a s m o d i u m a n a l y s e s s l a t d i s s o l v e d p r o t e i na c i d i t ye l e c t r o p h o r e s i s o fs e v e r a ls l i m e m o l d s p l a s m o d i a o b t a i n e dc e r t a i nt h es p e c i a ls p e c t r u m t h er e s u l tc a r lb e r e p e a t e di ns o m e e x t e n t m a t r i xs y s t e mw h i c he x i s t si nt h en u c l e io fe u k a r y o t i cc e l l c o m p o s eac o m p l e t e s y s t e mw i t hc y t o s k e l e t o na n dc h r o m o s o m eb a c k b o n e ，t h ef i b r i l l o g r a n u l a rn e t w o r ki s c o m p o s e do f n u c l e a rm a t r i xp r o t e i n s ，aw i d ev a r i e t yo fw h i c hh a sb e e nd i s c o v e r e da n d n u c l e i ca c i d t h ec o m p l e xs e r i e so f n o n - h i s t o n ef o r mt h ei n t e r n a ln e t w o r ko f t h em a t r i xa s o b s e r v e db yt e m 1 1 1 ed n a b i n d i n gt ot h em a t r i xi sf u n c t i o nc o m b i n a t i o n r n ai st h e p a r to fm a t r i xa n di m p o r t a n tr o l e i nm o r p h o l o g y i th a sb e c o m ec l e a rt h a tt h en u c l e a r m a t r i xn o tw a y p r o v i d e sas w a c l u r a lb a s i sf o rn u c l e a ra r c h i t e c t u r eb u ta l s op l a y sap a r ti n r e g u l a t i n gn u c l e a rf u n c t i o n ，f o re x a m p l e s ，c h r o m a t i nl o c a t i o n ，c h r o m o s o m ep a c k a g i n g ， d n a r e p l i c a t i o n , d n at r a n s c r i p t i o n ，h n r n ap r o c e s s i n g ，a n da p o p t o s i s s of a ra st h e p r o t e i nt h a th a sb e e nr e c o g n i z e dc o m p o s em o l e c u l eb a s i so fs t r u c t u r ea n df u n c t i o n ，n o m a t t e rt h ep r o t e i n sr e l a t e dt os t r u c t u r eo fn u c l e u sa n dc h r o m o s o m e ，o rt h ee n z y m e sr e l a t e d t on u c l e a ra c t i v i t i e s ，o rr e g u l a t i v ef a c t o r s a tp r e s e n t ，o n l yal i t t l en o n h i s t o n eo fn u c l e a r m a t r i xw e r er e c o g n i z e d ，a n dr e l a t i v e l yl i t t l ek n o w na b o u t n o n h i s t o n e t o d a y , i t i si m p o r t a n t s i g n i f i c a n tt os t u d y n o n h i s t o n e i nt h i st e x t ，u s i n gt h ep l a s m o d i ao fp c o m p r e s s u ma sm a t e r i a l s ，d e s i g n e daf e a s i b l e t r i a lp r o g r a mb a s i n go nt h eo l d e r s e x p e r i e n c e s , a n do b t a i n e dp u r i f i e dn u c l e i a n a l y s e so f s o d i u md o d e c y ls u l f a t ep o l y a c r yl a m i d eg e le l e c t r o p h o r e s i s ( s d s p a g e ) o fn u c l e a r m a t r i xp r o t e i n e x t r a c t e d b yl i s + n p 4 0 、l i s + t f i f i o n x l o o 、n a c l 扑吧4 0 、n a c l + h t i o n x l o o o b s e r v e dt h en u c l e a rm a t r i xm o r p h au n d e rt e m ，w h i c he m b e dw i t he p o n 8 1 2 ，o s m i u m f i x a t i o n ，u r a n y la c e t a t ea n d l e a dc i t r a t es t a i n i n g ，a n dp r e p a r a t i o nn u c l e a rm a t r i x 砸m r n a s e ， o rw i t h o u ti no r d e rt of i n dt h er o l eo f r n ai nk a r y o s k e l e t o n t h er e s u l t ss h o w e d ：t h en u c l e ii np l a s m o d i u ma r ef r e e ，n ol i n k a g eb e t w e e nc e l l s ， n e e d n ts t r o n gc u tf o r c e ，n e e d n tr e m o v ec y t o p l a s m ，a n da c q u i r et h es a l n en u c l e i t h e p l a s m o d i u m i ss u p e r i o rt h a no t h e rt i s s u e ，a n ds u s p e n d e dc u l t u r ec e l l d u r i n gt h ep r o c e s so f i s o l a t i o nn u c l e i ，u s i n gv i s c i d i t ym e d i u mm a yp r o t e c tn u c l e i t h ev i s c i d i t ym e d i u mi s n t s u i t a b l ep l a s m o d i u m ，o t h e r w i s et h ep l a s m o d i ac o u l d n tb eh o m o g e n i z e dt h o r o u g h l y , a n d v l t h es t i c k yo f p l a s m o d i a i se n o u g ht op r o t e c ti t s e l f t h es d s _ p a g ei n d i c a t e d ：h i s t o n ed e p l e t e dn u c l e ic o u l db ee f f e c t i v e l yp r e p a r e db y s u i n g 4k i n d sm e t h o d s ，a tl e a s t2 0b a n d s o f p r a t e i n s c o u l db e d i s t i n g u i s h e d t h es a m e p l a s m o d i u mm a yr e p l a c el o w e rm e l t i n gp o i n ta g a r o s et oe m b e dn u c l e i ，t h a t m a k ei te a s i e rt oc u tm a t e r i a l si n t os l i c e s t h er e m a i n e df r a m e w o r ka f t e r d e p l e t i o no f h i s t o n e sw a sa l s oo b s e r v e du n d e rt e m ，w h i c hi sr e g a r d e da sa p o s s i b l en u c l e a rs c a f f o l d t h em a t r i xi sv a r i e dw i t ho rw i t h o u tr n a s e ，t h i si se v i d e n c et h a tt h er o l eo fr n a i s c o n n e c tv a r i e dn o n h i s t o n e t h em e t h o d s c u r r e n t l ye m p l o y e dt o p r e p a r e t h en u c l e a r s c a f f o l do rm a t r i xm a yc r e a t ev a r i e dr e s u l t s t h a tm e a nt h a tc e r t a i n e x p e r i m e n t a lf i n d i n g s a r en o tc o n s i s t e n tw i t ht h ee x i s t e n c eo f t h en u c l e a r m a t r i xi nv i v o i ti s i m p o r t a n ts i g n i f i c a n ta t t e m p tt o u s ep l a s m o d i u ma sm a t e r i a l t h ep l a s m o d i a f o r ma n d s y n c h r o n o u sm i t o t i cd i v i s i o no ft h e s eo r g a n i s m sm a k et h e m g r a d u a l l ya p p e a l i n g m o d e l sf o rm a n ys t u d i e so f c e l l b i o c h e m i s t r ya n dp h y s i o l o g y i n t a c tn u c l e a rm a t r i xa n dr e t i c u l a t i o n k a r y o s k e l e t o n w e r e o b s e r v e d ，i n d i c a t e d a b u n d a n tc h e r i s hm a t r i xi nn u c l e io f m y x o m y c e t e p l a s m o d i u m , a n d t h er o l eo f r n a k e y w o r d s ：m y x o m y e e t ep h a n e r o p l a s m o d i u m m i c r o s t r u e t u r e u l t r a s t r u e t u r e n u c l e a rm a t r i x v i i 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其他教育机 构的学位证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均 己在论文中作了明确的说明并表示谢意。 撇一签名锄磁伽 签字日期：矿移年多月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解吉林农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即 吉林农业大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许 论文被查阅和借阅。本人授权吉林农业大学可以将学位论文的全部或部分内容编 入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。( 保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名- 7 苫纱仞嚷歹7 确 导师签名学位论文作者签名： p 欠q 导师签名 签字日期：乞矽叼年多月 日签字日期： 学位论 工作单 通讯地 月日 r址， r 0p o彦 ， ，。扩 ； d 沪； p， 话 编 电 邮 鹅 内容提要 显型原质团是绒泡菌目真粘菌的营养生长阶段，本文对几种显型原质团进行了 一系列的研究。 对几种黏茵原质团进行了长期的喂饲培养，在不同的显微水平上观察其内含物。 对煤绒菌等的原质团进行菌核诱导观察结构，测定不同原质团间总蛋白和d n a 含量的 差异。 这些在国内尚属首次，获得的原质团生活特性的显微证据表明：真粘菌的营养 生长阶段在显微水平上更像动物而非植物。 以扁绒泡菌原质团为材料，对细胞核进行分离提纯，以不同的处理方法抽提组 蛋白和部分非组蛋白，使用r n a s e 或不使用进行对照，进行核骨架形态的观察并确定 r n a 在骨架结构中的作用。 首次以扁绒泡菌为材料进行核骨架形态的研究。获得了游离存在的核富含核骨 架的论点。再次证实r n a 对核骨架的形态有重要的作用。同时在理论和实践上提出并 证明由于原质团中细胞核是独立存在的、非细胞结构并进行着同步有丝分裂，因此它 是研究核骨架及其它生物学事件的好材料。利用黏菌原质团分离提纯细胞核需要的剪 切力较小，并处于同一时期，也不需要细胞的溶胀作用。对核骨架的损害较小，因为 核骨架是和胞质骨架构成统一的整体。 对提纯的细胞核进行包埋时，首次以同种原质团代替低熔点琼脂糖，获得较好 的切片效果，在方法上有一定的创新。 吉林农业大学博士学位论文 黏菌显型原质团显徽一亚显微形态及核骨架的研究 刖吾 黏菌在系统发育上是一个独立类群，系统发育已达到相当商的水平，它和真菌是 个源相远而向相近的独立类群。 黏菌原质团的迁移及摄食特性及类似真菌的繁殖方式，含有纤维素的孢子壁，使 得它的归属一直没有一个统一的认识。它和真菌的吸收营养生活方式显然不同，是能 够进行消化的异养生物。原质团中含有具膜的细胞核，说明它是真核生物。它和真菌 有相似的生活环境，又具有孢予，所以一直和真菌放在一起t 2 1 0 对原质团进行一般形态、显微形态、亚显微形态的研究，目的在于更清晰地认识 黏菌以及在不同的研究水平上为它的亲缘关系及分类提供一些资料。 非细胞黏菌的原生质团是黏菌生活周期中的营养生长阶段，自然条件下，大多数 黏菌的原生质团大部分时间隐藏在各种基物的空隙中，到形成子实体时才移到基物表 面，原质团的形态大小，颜色和结构都有分类的意义。根据已知的原质团，可以把它 大致分为三个类型，显型原质团、隐型原质团和原始型原质团h 1 。 显型原质团是典型的合胞体，原质团中只进行核分裂而没有胞质分裂，使同一原 质团中存在大量的核，并进行同步有丝分裂。正因为如此，它被认识到是研究细胞周 期中生物学事件的良好材料。 在实验室中培养黏菌原质团，大约已有1 5 0 年的历史，原质团的获得一是从野外 采集，一是从孢子葫发获得。最初描述原质团中核同步有丝分裂的是l i s t e r ( 1 8 9 3 ) ， 从那时起，人们逐渐认识到了原质团中核的有丝分裂和孢子形成时的减数分裂，但在 相当长的时问内，研究也仅仅局限在多头绒泡( p h y s a r u m p o l y c e p h a t u m ) 上 4 - 5 1 0 显型原质团中，核是游离存在的，并且是自然同步化的，这就为获得大量同一时 期的核提供了方便。以它为材料进行核骨架的研究就具有了其它材料不可比拟的优 点。 目前，核骨架被认为是普遍存在的。随着研究的不断深入秘制备方式的不同，核 骨架的名称也经历了以下几个阶段。 n u c l e a rm a t r i x ( 核基质1 此术语最早有b e r e z n e y 和c o f f e y ( 1 9 7 7 ) 提出，现在主 要用于高离子强度缓冲液和核酸酶处理分