（免疫学专业论文）不同类型的dcs在调节性t细胞产生中的作用及其机制研究.pdf

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bp l a ya ni m p o r t a n tr o l ei nt h eg e n e r a t i o no ft r e g s i na l l o g e n e i cd c ss t i m u l a t e ds y s t e m s 4 5 d i s c u s s i o n 。4 7 s u m m a r y 5 0 p a r ti i t h ee f f e c to fr e o x y g e n a t e dd c so nt h eg e n e r a t i o no fr e g u l a t o r ytc e l l sa n di t s m e c h a n i s m i n t r o d u c t i o n 。51 1 t h ee f f e c to fh y p o x i ao nt h ei m m u l l ec e l l s 51 i i i 山东大学博士学位论文 2 t h ee f f e c to fr e o x y g e n a t i o no nt h ei m m u n ec e l l s 5 2 3 t h es i g n a l i n gp a t h w a yo f o x y g e n i cc h a n g e s 5 4 4 p 1 l r p o s oo fs t u d y 5 5 m a t e r i a l s ”5 5 m e t h o d s ”5 9 r e s u l t s 6 7 1 r e o x y g c n a t i o nr e v e r s e dt h ee f f e c to fh y p o x i ao nt h ep h e n o t y p i cm a t u r a t i o no f d c s ”6 7 2 r e o x y g e n a t i o ne n h a n c e dt h ea b i l i t yo fh y p o x i cd c s t os t i m u l a t ec d 4 + tc e l l p r o l i f e r a t i o n 6 8 3 r e o x y g e n a t e dd c si n d u c e dt h l ，t h l 7c e l li m m u n er e s p o n s e sw i t hd e c r e a s e d f o x p 3 + t r e gc e l l s 。6 9 4 t h ea d e n o s i n e - a 2 a rp a t h w a yp l a y sa ni m p o r t a n tr o l ei nt h ep r o c e s so f h y p o x i a - r e o x y g e n a t i o no fd c s ”7 0 4 1r e o x y g e n a f i o nu p r e g u l a t e dt h em r n al e v e lo fa 2 a ro nt h ed e s ，b u th a dn o e f f e c to nt h ee x p r e s s i o no f a l a 2 出a n da 3 r 7 0 4 2t h ee f f e c to fa d e n o s i n er e 魍p t o ra g o n i s t so nt h ep h e n o t y p eo fr e o x y g e n a t c d d c s 7 1 4 3t h ea 2 a rs p e c i f i ca g o r t i s ta f f e c tt h ep h e n o t y p eo fr e o x y g e n a t e dd c si na c o n c e n t r a t i o n - d e p e n d e n tm a n n e r 7 1 4 4t h ea 2 a ra g o n i s tc 觚o b v i o u s l yi n h i b i tt h ep r o i n f l a m m a t o r yc y t o k i n e ss e c r e t i o n b yr e o x y g e n a t e d d c s ， b u t p r o m o t e t h e a n t i - i n f l a m m a t o r yc y t o k i n e s e c r e t i o n 7 1 d i s c u s s i o n “7 2 s u m m a r y 7 6 f i g u r e sa n dt a b l e s 7 7 r e f e r e n c e s 9 4 a c k n o w l e d g e m e n t 。1 0 9 p u b l i c a t i o n 1l0 a t t a c h m e n t1a r t i c l e1 a t t a c h m e n t2a r t i c l e2 i v 山东大学博士学位论文 中文摘要 不同类型的d c s 在调节性t 细胞产生中的作用及其机制研究 博士研究生：刘春梅 指导教师：张利宁教授 专 业：免疫学 目的 调节性t 细胞( r e g u l a t o r ytc e l l ，t r e g ) 是具有免疫负调控作用的t 亚群，它 在维持外周免疫耐受，控制自身免疫性疾病、过敏反应和诱导移植耐受等方面发 挥重要的保护作用，成为近几年来免疫学的研究热点之一。目前，在调节性t 细 胞的研究中，对c d 4 + c d 2 5 + 调节性t 细胞( c d 4 + c d 2 5 + t r e g ) 的特性研究得较多。 已知c d 4 + c d 2 5 + t r e g 主要有两大类：一类是天然c d 4 + c d 2 5 + 调节性t 细胞( n a t u r a l o c c u r r i n gr e g u l a t o r ytc e l l ，n t r e g ) ，在胸腺中产生，存在于正常机体内，在小鼠脾 脏和人外周血中占c d 4 + t 细胞的5 1 0 ；另一种是诱导性c d 4 + c d 2 5 + 调节性t 细 胞( i n d u c i b l er e g u l a t o r y tc e l l ，i t r e g ) ，在外周合适的条件( 如t c r 刺激和细胞因 子t g f p 或i l - 1 0 ) 下可以由c i m + c d 2 5 t 细胞转化而来。i t r e g 与n t r e g 具有相 同的表面标记和抑制功能，主要标记有c t i 。a 4 、g i t r 和f o x p 3 ，其中转录因子 f o x p 3 是目前广为应用的t r e g 最重要的特异性标志，不仅是后者分化发育的标志， 更是其功能性标志。近年来，利用t r e g 的免疫抑制效应控制机体过度或不适的免 疫应答进而防治疾病成为免疫治疗的新策略。然而，有限的t r e g 数量限制了t r e g 的临床应用，因此寻找扩增或诱导c d 4 + c d 2 5 + t r e g 的有效方法，并深入探索其机 制，成为推动t r e g 临床应用的前提和基础。 树突状细胞( d e n d r i t i cc e l l s ，d c s ) 是机体重要的抗原递呈细胞。已有的研究 显示d c s 不仅在效应性t 细胞的活化和增殖方面发挥重要作用，而且具有扩增和 诱导t r e g 产生的作用。负载抗原的d c s 在外源性i l 2 存在的情况下可以扩增n t r e g ： 在细胞因子如t g f b 、i l 1 0 或v i t a m i nd 等存在的情况下，d c s 可以将c d 4 + c d 2 5 - t 细胞诱导转化为f o x p 3 + t r e g 。然而，在这些诱导和扩增的实验方法中，c d 4 + c d 2 5 1 细胞和c d 4 + c d 2 5 + t 细胞都需要从c i ) 4 + t 细胞群体中分离纯化出来，然后在体外 山东大学博士学位论文 加入不同的外源性细胞因子进行诱导或扩增，使得整个实验过程变得复杂化而且成 本也相对较高。既然c d 4 + t 细胞群体不仅含有c d 4 + c d 2 5 + 的n t r e g ，也含有 c i m + c d 2 5 。的i t r e g 前体细胞，那么我们是否可以不加外源性细胞因子，不需分离 纯化而利用d c s 直接刺激c d 4 + t 细胞群体产生t r e g ? 故本研究的目的一是探索 d c s 是否可直接从c d 4 + 群体中产生t r e g ，哪种类型d c s ( 同种同型与同种异型、 未成熟与成熟) 作用最强，机制如何? 进而建立简便、价廉的产生t r e g 的方法， 推动t r e g 的临床应用。 d c s 在体内分化、成熟和发挥作用时常常处于不同的微环境，氧压是微环境中 的重要因素。生理或病理情况下组织细胞经常处于不同氧压的微环境，如在动脉 栓塞、器官移植过程中，早期局部组织是处于一种远远低于大气氧压的低氧或乏 氧状态。当外界因素撤除或手术致使原本处于低氧状态的组织血流通畅，氧供随 之恢复，即发生再氧合。这种乏氧再氧合的病理生理过程，经常见于缺血再灌注 损伤。那么不同氧压对d c s 的分化成熟及功能有何影响? 不同氧压微环境中产生的 d c s 对t 细胞分化特别是对t r e g 分化有何影响? 目前都尚不清楚。我们在前期研究中 发现乏氧可抑带f j d c s 的表型成熟和对t 细胞的刺激功能。故本课题的目的二是在前 期研究的基础上，进一步研究乏氧再氧合条件下小鼠d c s 表型及功能变化，分析 再氧合d c s 对t h 细胞及调节性t 细胞的分化影响，并对其内在分子机制进行探讨。 这为解释缺血再灌注损伤的发病机制，控制器官移植的排斥反应以及肿瘤免疫治 疗奠定一定的基础。 总之，本课题包括两部分内容：一、同种异型d c s 在调节性t 细胞产生中的作 用及其机制研究；二、再氧合d c s 在调节性t 细胞产生中的作用及其机制研究。 第一部分同种异型d e s 在调节性t 细胞产生中的作用及其机制研究 方法 一、小鼠骨髓来源d c s 的诱导 1 分离c 5 7 b l 6 或b a l b e 小鼠的骨髓细胞，利用细胞因子g m c s f 和i 诱 导b m d c s 。 2 隔2 天半量换液，第6 天时给予l p s ( 1 p 酌：1 1 1 ) 刺激2 4 h ，以诱导成熟。 = 、自体d c s 或同种异型d c s 刺激c d 4 * r 细胞产生 l y e g 的能力 2 山东大学博士学位论文 1 用免疫磁珠分离纯化b a l b e 小鼠脾脏c d c t 细胞，分别与自体( 同基因型) d c s 或同种异型d c s 共培养。 2 流式细胞术( f c m ) 检测培养体系中c d 4 + c d 2 5 + t r e g 的比例。 三、人外周血单个核细胞来源的d c s 刺激c d 4 + t 细胞产生t r e g 的能力 1 获取不同人外周血1 0 - 1 5 m l ，分离单个核细胞( p b m c ) 。 2 免疫磁珠法分离c d 4 + t 细胞。 3 p b m c 静置2 h 后去除未贴壁细胞，给予重组人g m c s f 和i l 4 诱导成d c s 。 4 将不同人的c d 4 + t 细胞与d c s 做同种异型或自体的细胞共培养。 5 流式细胞术( f c m ) 检测培养体系中c d 4 + c d 2 5 o x p 3 + t r e g 的比例。 四、增殖抑制试验检测c d 4 + c d 2 5 + t r e g 的抑制功能 1 将第一步中同种异型混合淋巴细胞培养产生的t r e g ( g e n e r a t e dt r e g ) 纯化后作 为抑制细胞，同种异型d c s 作为刺激细胞，标记了c f s e 的c d 4 + c d 2 5 t 细胞 作为反应细胞，反应细胞：抑制细胞按照不同比例共培养。 2 新鲜分离的天然t r e g 作为实验阳性对照，流式检测反应细胞的增殖情况。 五、细胞因子在c d 4 + c d 2 5 + t r e g 产生中的作用 ( 一) 探索i l - 2 在同种异型d c s 刺激t r e g 产生中的作用 1 分离小鼠脾脏c d 4 + c d 2 5 + t 细胞，标记c f s e ，与同种异型d c s 共培养，并给 予i l - 2 刺激，5 天后f c m 检测同种异型d c s 对c d 4 + c d 2 5 + t 细胞的增殖情况。 2 分离c d 4 + c d 2 5 + t 细胞，标记c f s e ，然后与c d 4 + c d 2 5 t 细胞按照原来比例 混合成c d 4 + t 细胞整体，与同种异型d c s 共培养，培养5 天后收集上清，e l i s a 检测i l 2 的水平。 3 i l - 2 阻断试验：上述体系中加入抗i l 2 的中和性抗体，对照组加入同型对照 i g g ，5 天后流式检测c d 4 + c d 2 5 + t 细胞的增殖情况。 ( 二) 探索t g f - 1 3 在同种异型d c s 刺激t r e g 产生中的作用 1 分离小鼠脾脏c d 4 + c d 2 5 t 细胞，标记c f s e ，与同种异型d c s 共培养，不同 时间后流式检测f o x p 3 的表达和c f s e 的情况。 2 收集不同时间的上清，e l i s a 检测t g f b 水平。 3 t g f p 阻断试验：上述体系中加入不同浓度的t g f p 受体i 激酶抑制剂i i ( a l k - 5 抑制剂i i ) ，培养5 天后检测f o x p 3 的表达。 3 山东大学博士学位论文 结果 一、在无外源性细胞因子存在的情况下，小鼠同种异型d c s 可刺激c d 4 + t 细胞高 效产生t r e g ，但自体d c s 无此作用 新鲜纯化的c d 4 + t 细胞纯度大于9 5 ，其中c d 4 + c d 2 5 + f o x p 3 + t 细胞的比例 小于1 0 。自体b m d c s 与抗c d 3 抗体联合刺激c d 4 + t 细胞3 5 天后，t 细胞大 量活化，c d 4 + c d 2 5 + t 细胞的比例明显增加( 9 0 ) ，但其中f o x p 3 + 1 细胞的比例 仍然小于1 0 。然而，用同种异型b m d c s 刺激c d 4 + t 细胞后，尽管活化的 c d 4 + c d 2 5 + t 细胞的比例较自体d c s 刺激体系低( 5 0 - 7 0 ) ，然而其中f o x p 3 + t 细胞的比例高达8 0 以上。随着培养时间的延长，体系中c d 4 + c d 2 5 + f o x p 3 + t 细胞 的比例增加5 7 倍。值得注意的是，未成熟同种异型d c s 和成熟同种异型d c s 刺 激c d 4 + t 细胞产生t r e g 的能力无明显差异。 二、人同种异型d c s 在没有外源性细胞因子的情况下，同样可以增加c d 4 + t 细胞 中t r e g 的比例 为了进一步证明同种异型d c s 刺激t r e g 产生的能力，我们从人p b m c 中用重 组人g m c s f 和i l - 4 分别诱导同种异型或自体d c s ，与c d 4 + t 细胞共培养，流式 检测体系中c d 4 + c d 2 5 + f o x p 3 + t r e g 的比例。结果显示，自体d c s 活化的 c d 4 + c d 2 5 + t 细胞中f o x p 3 + 细胞表达在1 0 左右，而同种异型d c s 活化的 c d 4 + c d 2 5 + t 细胞中f o x p 3 + t r e g 的比例高达4 0 左右，其作用与小鼠的同种异型 d c s 相似。 三、同种异型d c s 产生的t r e g 在体外具有抑制功能 为了进一步证明同种异型d c s 刺激产生的t r e g ( g e n e r a t e dt r e g ) 在体外是否 保持其特有的抑制功能，我们将小鼠同种异型d c s 刺激产生的c d 4 + c ：d 2 5 + t 细胞 纯化后作为抑制细胞，按照不同比例与反应细胞c d 4 + c d 2 5 + r 细胞共培养，一定 时间后流式检测反应细胞的增殖情况，结果发现，同种异型d c s 刺激产生的t r e g 在体外具有明显的抑制功能，与新鲜分离的n t r e g 一致。 四、内源性几- 2 和t g f - j 在同种异型d c s 刺激c d 4 + t 细胞产生t r e g 中发挥重要 作用 为了探讨同种异型d c s 刺激c d 4 + t 细胞高效产生t r e g 的机制，我们进一步研 究了内源性i l - 2 和t g f - p 在同种异型d c s 刺激c d 4 + t 细胞产生t r e g 中的作用。 4 山东大学博士学位论文 1 i l - 2 在同种异型d c s 刺激t r e g 扩增中发挥重要作用 1 ) 用c f s e 标记和流式细胞术证明在外源性i l 2 存在的情况下，d c s 可以有效的 扩增n t r e g 分离纯化c d 4 + c d 2 5 + t 细胞后用c f s e 标记，然后与同种异型b m d c s 共培养， 并给予外源性i l - 2 刺激，5 天后流式检测细胞增殖情况，发现同种异型d c s 可以 有效扩增c d 4 + t 细胞中的n t r e g 。 2 ) 用抗体阻断的方法证明内源性的i l - 2 在同种异型d c s 刺激t r e g 扩增中发挥重 要作用 分离纯化c d 4 + c d 2 5 + t 细胞后用c f s e 标记，然后与c d 4 + c d 2 5 1 细胞按照原 有的比例混合，与同种异型b m d c s 共培养，e l i s a 检测上清中细胞因子i l - 2 的 水平，发现同种异型d c s 刺激组中i l - 2 的水平明显高于对照组。为了进一步验证 体系中i l - 2 的作用，在如上体系中同时加入抗i l - 2 的中和抗体，5 天后收集细胞， 流式检测细胞c f s e 增殖情况，发现与对照组i g g 相比，i l - 2 阻断抗体可以明显抑 制c d 4 + t 细胞群体中c d 4 + c d 2 5 + t 细胞的增殖。这说明同种异型d c s 对 c i m + c d 2 5 + t r e g 的有效扩增依赖于体系中的内源性，2 。 2 t g f - i 在同种异型d c s 诱导t r e g 产生中发挥重要作用 1 ) 用c f s e 标记和流式术证明同种异型d c s 可以诱导t r e g 的产生 新鲜分离小鼠脾脏c d 4 + c d 2 5 t 细胞，用c f s e 标记，然后与同种异型b m d c s 共培养不同时间后，收集细胞，流式检测f o x p 3 的表达情况。结果显示，第5 天时， 同种异型d c s 刺激的c d 4 + c d 2 5 t 细胞与新鲜分离的c d 4 + c d 2 5 t 细胞相比， f o x p 3 + t 细胞比例明显增加。随着培养时间的延长，f o x p 3 + t 细胞比例逐渐增加。 当培养到第1 3 天时，f o x p 3 的表达达到第5 天时的两倍。这表明在没有外源性t g f p 存在的情况下，同种异型d c s 可以诱导c d 4 + c d 2 5 t 向c d 4 + c d 2 5 + f o x p 3 + t 细胞 转化。 2 ) 同种异型d c s 刺激体系中存在内源性t g f d 的产生 收集培养不同时间的上清，e l i s a 检测上清中t g f p 的水平，结果提示，培 养到第5 天时，总的t g f p 水平明显增加。并随着培养时间的延长，其水平逐渐 升高。当培养第1 3 天时，t g f b 水平达到第5 天时的2 3 倍。 3 ) 用抑制剂阻断的方法证明内源性t g f b 在同种异型d c s 刺激t r e g 产生中发挥 山东大学博士学位论文 重要作用 为进一步验证产生的t g f p 在c d 4 + c d 2 5 + f o x p 3 + t 细胞诱导中的作用，我们 在如上体系中加入不同浓度的t g f p 受体i 激酶抑制剂i i ( a l k - 5 抑制剂i i ) ，一 定时间后，流式检测f o x p 3 的表达。结果显示，体系中c d 4 + f o x p 3 h i g ht 细胞的百 分比和绝对数随着a l 妊5 抑制剂i i 浓度的增加而逐渐降低，且c d 4 + f o x p 3 凼mt 细 胞的百分比和绝对数显著下降，与加入的a l k - 5 抑制剂i i 浓度具有明显的剂量依 赖关系。所以我们推测c d 4 + f o x p 3 c u r et 细胞可能是转化的f o x p 3 + t 细胞的潜在群 体，且t g f p 在转化过程中发挥着重要的作用。 结论 1 小鼠同种异型b m d c s 和人p b m c 诱导的同种异型d c s ，在无外源性细胞因子 的情况下，都可以增加c d 4 + t 细胞中t r e g 的比例，产生的t r e g 在体外对t 细胞增 殖具有抑制功能。 2 同种异型b m d c s 刺激的体系中，内源性i l - 2 和t g f b 在t r e g 的产生中发挥 着重要的作用。 创新性和意义 1 首次发现同种异型b m d c s 在没有外源性细胞因子的情况下可以刺激c d 4 + t 细 胞高效产生t r e g ，并探讨了其机制。 2 首次将c d 4 + t 细胞作为一个整体来寻找获得足够数量t r e g 的方法，为优化后续 研究的实验方法、制定t r c g 的临床治疗策略提供了一定的理论依据。 研究的局限性 1 同种异型b m d c s 刺激c d 4 + t 细胞产生t r e g 的具体内在分子调控机制有待于进 一步深入研究。 2 所获得t r e g 应用于临床，其条件仍需进一步优化。 关键词 d c s ；i l - 2 ；t g f p ；调节性t 细胞 6 山东大学博士学位论文 第二部分再氧合d c s 在调节性t 细胞产生中的作用及其机制研究 方法 一、再氧合对d c s 的表型影响 1 分离c 5 7 b l 6 小鼠骨髓细胞，分别在常、乏氧条件下利用g m c s f 和i l - 4 诱导d c s ，并给予l p s 刺激。 2 对乏氧条件下分化的d c s 进行再氧合不同时间。 3 流式检测再氧合d c s 表面协同刺激分子及m h c i i 类分子的表达。 二、再氧合对d c s 的t h 细胞增殖、分化的影响 1 分离c d 4 + t 细胞并标记c f s e ，与再氧合的同种异型d c s 或自体d c s 共培 养，后者给予抗c d 3 抗体刺激。 2 流式检测再氧合d c s 刺激c d 4 + t 细胞增殖的能力。 3 收集细胞，流式检测再氧合d c s 刺激c d 4 + t 细胞的分化情况。 三、再氧合影响d c s 表型及功能的分子机制研究 1 将乏氧下分化的d c s 进行再氧合，r e a lt i m ep c r 的方法检测其表达四种腺 苷受体的m r n a 水平。 2 以不同腺苷受体激动剂处理再氧合的d c s ，流式检测其表型的变化。 3 流式检测不同浓度a 2 a r 腺苷受体激动剂对再氧合的d c s 表型的影响。 4 e l i s a 检测a 2 a r 激动剂对再氧合d c s 的细胞因子表达的影响。 硅蟹 二日木 一、再氧合可逆转乏氧对d c s 成熟表型的抑制 为了研究再氧合对d c s 表型的影响，我们在乏氧条件下诱导d c s 后对其进行 再氧合不同时间，流式检测细胞表面分子的表达。结果显示乏氧抑制d c s 协同刺激 分子c d 8 0 、c d 8 6 以及m h c i i 类分子的表达。再氧合6 小时后其表达百分比和荧 光强度均明显上调，且荧光强度随再氧合时间的延长而逐渐增加，再氧合2 4 h 、4 8 h 可达到高峰。这提示再氧合可以逆转乏氧对d c s 表型的抑制，促进d c s 向成熟方 向分化。 二、再氧合d c s 刺激c d 4 + t 细胞增殖的能力较乏氧d c s 明显增强 无论是在同种异型混合淋巴细胞反应体系中，还是在c d 3 单抗刺激的体系中， 7 山东大学博士学位论文 乏氧d c s 刺激c d 4 + t 细胞增殖的能力与常氧d c s 相比非常弱。再氧合后，其诱导 c d 4 + t 细胞增殖的能力明显提高。这提示无论针对同种异型抗原，还是自体抗原， 再氧合d c s 均具有很强的抗原递呈功能。 三、再氧合d c s 降低t r e g 的数量而上调t h l 7 和t h l 细胞应答 进一步我们检测了同种异型混合淋巴细胞反应体系中，再氧合的d c s 对c d 4 + t 细胞分化的影响。结果显示，再氧合d c s 诱导产生的c d 4 + c d 2 5 + f o x p 3 + 1 r c 缪，与 常氧成熟和未成熟d c s 相比，明显减少；相反，再氧合d c s 可显著诱导c i m + t 细 胞向i l 广1 广1 1 1 1 7 细胞分化，其比例明显高于未成熟d c s ，甚至常氧成熟d c s 刺激 产生的i l 1 7 + 1 1 1 1 7 细胞。同时，i f n - 丫+ t h l 细胞的比例和上清中n 吖的水平也明 显高于常氧成熟和未成熟d c s 刺激组。我们进一步研究了再氧合d c s 的细胞因子 分泌情况。结果证实再氧合2 4 h 的d c s 上清中i l 6 水平显著升高，而t g f b 的水 平则与乏氧组相比明显降低。这提示再氧合d c s 分泌的细胞因子更有利于使c d 4 + t 细胞向t h l 7 方向分化。总之，这些结果表明再氧合d c s 具有很强的驱动t h l 7 和 1 1 1 l 细胞介导的炎性反应的能力。 四、腺苷a 2 a r 通路在d c s 乏氧再氧合过程中发挥着重要的作用 1 再氧合可上调腺苷受体a 2 a r 在d c s 的表达，而对a l r 、a 2 s r 及a 3 r 的表达 无明显影响 为了研究腺苷通路是否参与乏氧再氧合对d c s 表型和功能的影响，我们首先 采用r e a lt i m ep c r 方法检测了再氧合d c s 的四种腺苷受体的m r n a 表达水平，结 果显示，与常氧及乏氧d c s 相比，再氧合d c s 表达的a 2 a r 水平呈现明显升高趋 势；而各组之间a l r 、a 2 b r 及a 3 r 的表达则无明显变化。 2 a 2 a r 受体激动剂可抑制再氧合d c s 成熟相关表型的上调 为了进一步确认腺苷通路在乏氧再氧合对d c s 表型和功能的影响，我们在将 乏氧下分化的d c s 进行再氧合时，给予不同腺苷受体激动剂刺激，流式检测d c s 的表型。筛选结果提示，与对照组( 再氧合组) 相比，a 2 a r 受体选择性激动剂 c g s 2 1 6 8 0 可以抑制再氧合对乏氧d c s 表型的上调作用，即抑制m h c i i 和协同刺 激c d 8 0 、c d 8 6 的表达。而a l r 、a 2 b r 、a 3 r 的激动剂则没有此功能。 3 a 2 a r 激动剂对再氧合d c s 表型的抑制具有浓度依赖性 体外迸一步检测了不同浓度的a 2 a r 受体选择性激动剂c g s 2 1 6 8 0 对再氧合 8 山东大学博士学位论文 d c s 表型的影响。流式结果显示，随着c g s 2 1 6 8 0 浓度的增加，协同刺激分子c d 8 0 、 c d 8 6 及m h c i i 表达的平均荧光强度逐渐降低，与对照组相比有显著性差异，这 进一步提示a 2 a r 通路确实在d c s 的乏氧再氧合过程中发挥着重要的作用。 4 a 2 a r 激动剂可明显抑制再氧合d c s 促炎细胞因子产生，而上调抑炎细胞因子产 生 我们进一步检测了不同腺昔受体激动剂对再氧合d c s 的细胞因子分泌情况， e l i s a 结果显示a 2 a r 选择性激动剂c g s 2 1 6 8 0 可以明显抑制再氧合d c s 炎性细胞 因子，l p 、i l 6 和t n f - 妇t 等的分泌，而上调其免疫抑制因子t g f p 的分泌。这说 明腺苷受体通路参与再氧合逆转乏氧对d c s 功能的影响，a 2 r 受体通路可能是再 氧合上调d c s 表型和功能的一个重要调节分子。 结论 一、再氧合可以逆转乏氧对d c s 成熟表型及功能的抑制作用 1 再氧合可明显促进乏氧下分化d c s 的表型成熟。 2 再氧合可明显促进d c s 对同种异型及同种同型抗原的递呈功能，明显增强d c s 对c d 4 + t 细胞增殖的能力