SNAP-tag蛋白标记技术.ppt_第1页
SNAP-tag蛋白标记技术.ppt_第2页
SNAP-tag蛋白标记技术.ppt_第3页
SNAP-tag蛋白标记技术.ppt_第4页
SNAP-tag蛋白标记技术.ppt_第5页
已阅读5页，还剩9页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

SNAP-tag蛋白标记技术在生物学领域的的应用研究进展,生物物理学报2014年6月第30卷第4期：251-263,背景,蛋白质是细胞的基本组成成分，是生命功能的体现者。研究蛋白质的结构、功能及其在细胞内的运动特征、相互作用和化学微环境等，对于了解细胞复杂的生命过程至关重要。1.绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein,GFP）的发现及应用，是活细胞蛋白特异性标记方法发展的一个里程碑，它可以在不额外加入任何底物的情况下发出荧光，结合荧光成像技术可实现对活细胞内蛋白质的可视化监测。缺点：GFP的荧光光谱较为单一，发光具有氧依赖性，且存在应答较为缓慢、灵敏度不高等。2.SNAP-tag蛋白标记技术克服了以上缺点，具有较高的特异性、稳定性及配体的多样性，在蛋白标记等众多领域获得越来越广泛的应用。,SNAP-tag的设计原理,SNAP-tag蛋白中作为反应位点的半膀氨酸亲和进攻O6修饰的苯甲基鸟嘌呤的苄基，脱去鸟嘌呤结构后，半膀氨酸与苄基形成稳定的硫醚共价键，实现对靶蛋白的共价标记。,SNAP-tag的配体及功能,优点,SNAP-tag技术的应用,SNAP-tag在细胞内蛋白质性质与功能研究中的应用,1.蛋白质-蛋白质相互作用研究(1)SNAP-tag荧光共振能量转移技术,Johnsson等将SNAP-tag及其突变体作为融合标签蛋白，成功应用于雷帕霉素介导的FKBP与雷帕霉素靶蛋白结构域的相互作用研究。,(2)SNAP-tag介导的选择性交联技术,Johnsson利用SNAP与BG之间不可逆的共价结合特点，设计了带有两个BG结构的交联剂，用于特异性、稳定交联两个SNAP-tag融合蛋白。,(3)SNAP-tag蛋白质片段互补分析技术,SNAP-tag蛋白由两个结构域组成，Mie等将其分裂成nSNAP和cSNAP蛋白片段的组装，分别与可能相互作用的两个蛋白融合，从而迅速恢复与SNAP-tag底物的反应活性，通过荧光检测两个蛋白是否相互作用。,2.蛋白质定位、运输的跟踪监测及动力学分析,细胞内的二氢叶酸还原酶常被融合于线粒体靶向序列，以用来研究线粒体输入的动力学过程，Krayl等通过构建细胞色素2-DHFR-SNAP-tag融合蛋白分析了线粒体前体蛋白的运输过程。,3.体内蛋白质半衰期监测,展望,SNAP-tag技术的缺陷：1.蛋白标签的分子量仍然较大，仅能与目标蛋白通过N端或C端融合，可能对某些融合蛋白的构象与功能产生影响2.配体分子与SNAP-tag蛋白的结合虽具有较高的特异性，但受配体分子本身性质的影响，仍可能产生非特异性标记的干扰,在今后研究中，应以生物学研究为设计依据，以功能性配体分子的设计为基础，发
人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论