（动物营养与饲料科学专业论文）苜蓿叶蛋白的提取与应用研究.pdf

摘要 摘要 苜蓿叶蛋白因具有来源广泛、营养丰富、不含动物性胆固醇，具有防病治病，防衰抗老，强身 健体等特点而备受关注，还含有丰富的矿质元素、维生素及天然色素被f a o 认为是一种具有高开 发价值的新型蛋白质产品。 本论文以压块苜蓿为材料，通过不同的加水量、浸泡时间、加热温度和p h 值等处理提取饲用苜 蓿叶蛋白，以寻求最佳的提取工艺。同时，用酶法( 纤维素酶) 和机械法( 组织捣碎机) 相结合对 细胞进行破壁提取苜蓿叶蛋白进行了初步的研究。得到最优的提取条件：浸泡时间为3 0 m i n ，料液 比为l ：7 ，加热温度为8 0 ，p h 值为4 0 影响蛋白提取率的因素主次顺序为：浸泡时间 温度 p h i 加水量。酶法破壁与机械法破壁相结合的提取工艺提取苜蓿叶蛋白，它的提取率为3 4 2 ， 粗蛋白的干基含量为5 0 0 3 提取率高于机械破壁的1 7 7 5 2 6 0 4 ，更高于酶法破壁的9 0 5 1 2 0 2 。并且蛋白质的干基含量提高到质量百分比5 0 0 3 ；另一方面，采用酸度法和离心法相结合 的方法提取苜蓿食用蛋白质，得到的蛋白质含量高达7 9 7 2 c p 基) ，明显高于饲用蛋白的5 0 0 3 也高于资料报道的5 0 6 5 。 首蓿叶蛋白带有很深的绿色和浓烈的青草味，使得苜蓿叶蛋白在食品中的应用受到限制。为了 脱去叶蛋白的绿色及大部分草腥味和提取天然色素，对苜蓿叶蛋白进行脱色和去味处理，脱去叶蛋 白的绿色及大部分草腥味。确定最佳的浸提溶剂是无水乙醇。最优的浸提条件为：浸提温度为6 0 ； 浸提时间为6 小时料液比为1 ：1 7 同时，本试验并较为系统地研究了蛋白质浓度、温度、口h 值和氯化钠对苜蓿叶蛋白的四种功能 特性( 吸水性质、溶解性质、乳化特性和泡沫特性) 的影响。结果表明：苜蓿叶蛋白虽没有良好的溶解 性，但具有良好的吸水性、乳化性及乳化稳定性和起泡性及泡沫稳定性，如能通过物理或化学方法 改进它的溶解性，定会增加苜蓿叶蛋白的应用范围。 最后，分析了苜蓿叶蛋白对面团流变学特性、烘焙特性的影响，初步探讨其营养强化程度和影 响机理，为苜蓿叶蛋白在食品工业上的利用提供工艺参数和理论依据。结果表明：苜蓿叶蛋白是怠 好的天然营养强化剂和面团改良剂( 弱筋剂) ，在面粉中添加苜蓿叶蛋白能有效调节湿面筋量和筋质 强度，弱化面筋，使制品品质酥松，解决了单纯使用面粉制作饼干时筋力过高的问题。添加苜蓿叶 蛋白的曲奇口感酥松，不粘牙；断面结构呈细密的多孔状。曲奇具有良好的色泽和组织结构，并带 有清淡而悦人的青草味。曲奇中苜蓿叶蛋白的最佳添加量为2 关键词：苜蓿叶蛋白提取工艺脓、脱色功能特性应用曲奇 江南大学硕士学位论文 a b s t r a c t a l f a l f al e a f p r o t e i nh a sb e e nk n o w nv e r yw e l l b e c a u s ei th a sm a n yc h a d k f i 鲥c ss u e l aa se x t e n s i v e s o t n c e ，a l m n d a n tn u t r i t i o n , e x c l u d i n ga a i m a l i t yc h o l e s t e r o l ，d e f e n d i n ga n dc u r i n gt h ed i s e a s e ，d e f e n d i n g d e c r e p i t u d e8 r i do l d n e s s ，a n ds t r e n g t h e r a n gb o d v a n da l f a l f al e a f p r o t e i nc o n t a i n sa b u n d a n tm i n e r a l e l e m e n t , v i t a m i n m a d n a t u r a l p i g m e n t a i f a l f a l e a f p r o t e i n i se o m i d e r e da s a n e w h i g h e x p l o i t i n g v a l u e p r o t e i ns o u r c eb yf a 0 ( f o o da g r i c u l t u r eo r g a n i z a t i o n ) c o m p a c t e da l 脚血w a su s e di nt h i se x p e r i m e n ta sr a wm a t e r i a l sf o re x l r a e t i n gp r o t e i nb yd i f f e r e n t m e t h o d ss u c h 鹤m o i s t u r ea d d i t i o n , s o c kt i m e , h e a t i n gt i m ea n dp hv a l u et of i n dt h eo p t i m u mt e c h n i q u e a n da d d i t i o n so f 【n 孤：l i n gn l f a l f al e a fp r o t e i n a tt h e 鞠m et i m e ，u s i n g 唧m e ( c e l l u l o s ee n z y m e ) d e s t z o y e dc e l lw a l l , a n dm a d eap r e p a r a t o r ys t u d yo l le x t r a c t i n gl e a f p r o t e i nb ye l l z y m l ，n 掂r e s u l t ss h o w e d t h a tt h ec l e e r e a s i a go r d e ro ft h ef a c t o r sa f f e c t i n gt h ea l f a l f ap r o t e i ny i e l da n dc r u d ep r o t e i nc o n t e n tw a s s o c k i n gt i m e t e m p e m u r e 却h a d d i n gw a t e r t h em o s to p t i l l l l l l l le x t r a c t i n gc o n d i t i o n s 哪3m i n u t e sf o r 5 0 e k , t h er a t i ol ：7f o rc o m d a c t e da l f a l f at ow a t e r , h e a t i n gt e m p e r a t u r ea t8 0 a n dt h ep h 4 0 t h ep r o t e i n e x t r a c t e dw i t ht h em c t l l o do f c o m b i n i n g i dw i t he e n l r i f u g a t i o nw h o s ep r o t e i ny i e l dw a s3 4 2 a n dc 1 1 1 d e p r o t e i nd r yc o l l t e r r tw a s5 0 0 3 1 1 地p r o t e i ny i e l dw 鹊h i g h c , rt h a n1 7 7 5 2 6 0 4 f o rm h i d e s n 口y i n gc e l lw a l l , m a df a rl l i 曲盱9 0 5 1 2 0 2 t h a nm i n g 蜘z y m e ( c e l l u l e 即z y m e ) d c 蚰奶，i i i gc e l l w a l l a 丑dt h em e t 】的dm a d ec l l l d ep r o t e i nd r yc o n t e n t 抽c f t o5 0 0 3 o nt h eo t h e rh a n d , t h e 毗i n t e dw i t ht h em e t h o do fc 锄b i n i n ga c i dw i 血n 1 f i l 窑a 廿o nw h 嘴n t e n tw a s7 9 7 2 m o r e1 h a n l ，f o t e i n 删4 6 - 7 0 r e p o r t e d o t h e rn t 盯锄惝 a l f 且l f al e a f p r o t e i ni sd a r kg r e e na n dg r l t s $ f h y o nw h i c hm 址i t 俺s 砸c t 研l y i n 窑缸枷抽血l s 吼f o r 曲u c k i l l g o f f 擎e e n d 霉毫辩f l a v o r 蕊d 韶c 臼鼬：t i i 壤口d ep i 鲫c m t h e 翻髓缸a c 赶【w a s d e u n d e r 也e c o n d i t i o no f f i n g 柚h y d r a 惦e t h a n o l a l 【i 1 嗜懿响嘲t h eo p d m a lo p 前鲥n 窑n d 描o k n t t u e n e e dt h e d e c o l o m i z a 士i o n d 丘s h yo d o re 1 抽1 删o no f t h el e a f p r o t e i nc o n c 口m 倒 e so f a l f a l f aw e 把d l 吐既m i n e db y o r t h o g o m ld e s i g nt h em o s to p i 面向c d i t i 咄w e 犯：l i q u i d s o f i do f1 ：1 7 ，a n d 如面( i l 培a t6 0 f o r 融 f u r t h 盯曲l l d i 瞄w e 坞虹由l c t e d 协i 玎v 嚣d g a 圭e 也ee f f e c t so f 盘c 幻想 n c i u d i d g 伽触c o 咀蛐s ， t e m p 钉a 士u 坤，p hl e v e l s ，n a c l 由衄删鞠聋i o no nt h ef i m c t i 蚴l 伽_ o p 酬船o f a l f a l f al o t e i n ，i e p i _ o t e i nw a l e r a b s o r p n o np l 口p e n i ，l u b i l i t y , e m u l s i f y i n g 讲_ o p e 柑船，m a df m i n g 埘u p e m 嚣t h er e s l l l t ss h o w e dt h 砒 a l 僦f sl e a rp r m e i nd on o th a v eg o o d l u b i l i t y ，b u th a v e9 0 0 d 幽i 铆n g 刚，酬鼯衄d 锄l l l s 毋咄 s t a b i l i 趱i p r o p e 柑船，a n df o m ，l i n g 讲叩卿i 船如df o 卸1 i n gs t a b i l i z a t i o np r o p 硎嚣i f 锄e l i o 船姆i 堪 s o l u b i l i t yb yp h y s i e l 甜c h e m i cm e t h o d s 。w h i c hm u s ti n c r e a s e 聊l i c a l i 3 c o p e bt h ee n d , t h ea n t i e l ea n a l y s i s e dt h ee f f e c to fa l 伽自础m 缸强p a s t em e o l o g yw o 币e sa n dc o o k i e b a k i n gp r 郇l e m t oa f f o r d i n gt e c l m i c sp a r a m e t e ra n dt h e m yf o t r a c t i o nf o ru s i n gi nf o o dj n d l h 扛y a n d 蛳l d y e dt h ed e g r e eo f n u t r i t i o na g g r a n d i z e m e n ta n d 地m e c h a n i s mo f e f f e c t 1 1 ”r e s u l t ss h o w e d 也a la l 脚纽 w a sag o o dc r u d en u t r i t i o na g g r a n d i z e m e n ta n dp a s t ej m p v e “w 雕l l 【e n i n 2w h e a t 窑】删嘲1 ) ，a l 伽hl e a f p r o t e i ni n c o 印咖e dj n ：c 0w h e a tf l o u rc a nm t e r c e d ee f f e c t i v e l yw e tw h e 砒g l 咖c o n t e n t ；a n di u c r e 魑e w h e a tg l u t e ns h g t h ，w e a k e nw h e a tg l u t e n ，觚dm a d ec o o k i e 喇印1 1 l cc o o k i ea d d e da l f a l f a1 e a f p f o 心i n w 勰v e r yc r i s p a n dt h ec o o k i eh a dg o o dc o l o u rl u s t e ra n do r 彰m i 盈垃o n 蛐m d i 鹏，a i l dh a dl i t ea n d 乎嘶移i 1 1 9g r a s sf l a v o r t h ep r o p e rl e v e li n c o r p o r a t e di n t ow h e a tn o i j f fw 勰2 ， i i ( e y w o r d j ：a l f a l f al e a fp r o t e i n ，e r t r a c te 强虬e l i m i n a t i n g 伍ee o l o u ri n dg r a s so d o r f u n c t i o n p r o p e r t i e s , a p p f i e a t i o n c k k n 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含 本人为获得江南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。 与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 签名： 关于论文使用授权的说明 f 月2 p 日 本学位论文作者完全了解江南大学有关保留、使用学位论文的规 定：江南大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和 磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编 入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、 汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。 保密的学位论文在解密后也遵守此规定。 繇叠番避导师躲鱼 日期：，庐。7 年9 月2 目 第一章绪论 第一章绪论 蛋白质是生命活动重要的物质基础，在人体及动物代谢和生长过程中起着重要的作用。随着世 界人口剧增，人们生活水平的不断提高，人类对蛋白质的需求越来越大。目前，大部分发展中国家 都面临蛋白质危机。据统计，全世界的蛋白质来源每年缺少6 1 0 ”t 。我国人多地少，蛋白质供应非 常紧缺，仅饲料蛋白每年就缺少1 1 0 t ，严重制约着饲料工业和养殖业的发展叫因此，积极开发 新的蛋白质资源具有重要的意义。 1 1 叶蛋白 绿色植物叶子是地球上最大的一种再生资源，它富含蛋白质和各种维生素，合理利用绿色植物 叶子以取代部分谷物饲料及大豆、鱼粉等蛋白饲料是解决饲源紧缺的一条重要途径。 叶蛋白是以新鲜的青绿植物茎叶为原料，经压榨取汁、汁液中蛋白质分离和浓缩干燥而制备的 蛋白质浓缩物( 1 e a f p r o t e i n c o n c e n t r a t i o n 。简称l p c ) 。植物叶蛋白属“功能性蛋白质”，主要由叶绿 体内基质蛋白和细胞质内溶解性良好的细胞质蛋白等组成叶绿体蛋白由基质蛋白( 占5 5 6 5 ) 和与脂质结合的结构蛋白( 3 5 4 5 ) 组成。基质蛋白的大部分是核酮# 自一1 ，5 - - 磷酸羧化酶，它 占叶绿体蛋白的7 0 8 0 。其分子量为5 2 5 6 万，属于大分子蛋白绿叶经提取后的叶饼中存在的 是难溶性的叶绿体和线粒体的结构蛋白核蛋白和细胞壁蛋白植物叶蛋白中水溶性和碱溶性蛋白 占5 4 8 1 1 1 1 叶蛋白的营养价值 植物叶蛋白因具有来源广泛、营养丰富、不含动物性胆固醇，具有防病治病，防衰抗老，强身 健体等特点而备受关注，被f a 0 认为是一种高质量的食品，是一种具有高开发价值的新型蛋白质资源 大量实验研究表明：叶蛋白制品含蛋白质5 0 9 6 6 5 ，可利用的碳水化合物5 2 0 ，粗纤维0 5 1 5 ，脂肪缁2 5 ，灰分o 5 1 5 ，总能量平均为4 3 9 k c a l l o o g “。叶蛋白含有1 8 种氨基酸，其 中包括8 种人体必需的氨基酸。且其组成比例平衡，与联合国粮农组织推荐的成人氨基酸模式基本相 符，特别是赖氨酸含量较高，这对多以谷物类为主食的第三世界国家尤为重要。它与日常食品的营 养比较见表1 1 。从表中可以看出，叶蛋白产品的蛋白质含量远高于鸡蛋、牛肉等食品，而且富含 v ，v c ，c a , f e 等营养物质。胡萝h 素和叶黄素含量比叶子分别高2 0 3 0 倍和4 - , 5 倍，李立人等从烟草 叶中制成的纯蛋白质结晶f - l - p ，是一种可溶性蛋白，其含量占叶中可溶性蛋白总量的5 0 以上，卜l - p 中的氨基酸成分非常完美，可与鸡蛋和牛乳的蛋白营养媲美，且极易被消化。此外，还有良好的乳 化，胶凝、发泡等理化性质，可应用于食品等工业。傅晓等对大鼠饲养结果证实：叶蛋白可提高谷 胱甘肽过氧化物酶( g s h - p 】【) 、超氧物歧化r e p h 值 加水量。压块苜蓿长期处于低水分条件下，打浆前的浸泡是非常必要的，而浸泡时间 决定着苜蓿粉的软化程度，直接关系到蛋白从细胞中的溶出效果，因此同其他因素相比对蛋白提取 率的影响最大。 表中计算后的较优的条件为a ，b 2 c 热，即浸泡时间为3 0m i n ，料液比为1 ：7 ，加热温度为8 0 。 p h 值为4 0 从压块苜蓿中提取蛋白质与从新鲜苜蓿中提取相比，加水量明显高于后者，而其他的提取条件 与后者基本相同 第二章苜蓿叶蛋白提取工艺的研究 表2 9 正交试验组合及结果 2 6 2 9 酶法破壁提取工艺条件的优化 正交试验结果见表2 1 0 ，按极差的大小，影响苜蓿叶蛋白提取率的因素主次顺序为：p h 值 反 应温度 加酶量 反应时间。p h 值不仅影响纤维素酶催化的反应效果。同时影响蛋白的溶解度，因 此同其他因素相比对苜蓿叶蛋白的提取率影响最大 表中计算后较优的条件为a 3 b t c - d l 。即加酶量为3 ；反应温度为4 5 ；反应时间为5h ；p h 值 为4 。5 比较两个正交试验结果可知，单独用酶法破壁提取苜蓿叶蛋白的提取率为9 0 5 1 2 0 2 0 , 6 ， 明显低于机械破壁( 即2 6 2 8 的实验结果) 的1 7 7 5 2 6 0 4 表2 ，1 0 正交试验组合及结果 江南大学硕士毕业论文 2 6 2 1 0 酶法破壁与机械破壁相结合对苜蓿叶蛋白提取率的影响 根据两个正交试验结果，确定酶法破壁与机械破壁相结合提取首蓿叶蛋白盼工艺条件，具体条 件及试验结果见表2 1 1 表2 1 1 苜蓿叶蛋白的最佳提取条件及试验结果 酶法破壁与机械破壁相结合确定的提取工艺提取苜蓿叶蛋白，它的提取率为3 4 2 ，粗蛋白的 干基含量为5 0 0 3 。提取率高于机械破壁的1 7 7 5 2 6 0 4 ，更高于酶法破壁的9 0 5 1 2 0 2 。 并且蛋白质的干基舍量提高到质量百分比5 0 0 3 。 2 6 3 食用苜蓿叶蛋白的提取 采用酸度法和离心法相结合的方法提取苜蓿食用蛋白质，得到的蛋白质含量高达7 9 7 2 ( 干基) ， 明显高于饲用蛋白的5 0 0 3 5 ，见表2 1 2 。 表2 1 2 苜蓿粉与提取蛋白的成分对照表 2 7 结论 本试验在前人的基础上研究了曹蓿叶蛋白的饲用和食用蛋白的提取工艺研究，等到结论如下： 浸泡时间、加水量、温度、p h 对提取的蛋白的影响大小顺序为：浸泡时间 温度 p h 值 加水量， 最优的提取条件为：浸泡时间为3 0 = i n ，料液比为h7 ，加热温度为8 0 ，p h 值为4 0 。 加酶量、反应温度、反应时间、p h 值对提取的蛋白的影响大小顺序为：p l 值 反应温度 加酶量 反应时间，鼍优的提取条件为：加酶量为3 ；反应温度为4 5 ；反应时间为5h ；p h 值为4 5 。 本试验使用了酶法破壁和机械破壁相结合的工艺，提高了从压块苜蓿提取叶蛋白的提取率和蛋白 含量，它的提取率为3 4 2 ，蛋白质量百分比为5 0 0 3 。虽然提取率高于新鲜莒蓿的2 0 3 0 ，但蛋 白含量仍低于从新鲜苜蓿中提取的蛋白含量5 0 9 6 6 5 一1 。 采用酸度法和离心法相结合昀方法提取苜蓿蛋白质能明显提高蛋白含量，得到的蛋白质含量高达 7 9 7 2 $ ( 干基) ，高于资料报道的5 0 - 6 5 。 1 4 第三章苜蓿食用叶蛋白脱腥、脱色工艺的研究 3 1 引言 第三章苜蓿食用叶蛋白脱腥、脱色工艺的研究 将苜蓿叶蛋白作为食品的营养强化成分，可以提高食品中蛋白质含量，提高其营养价值。但由 于苜蓿叶蛋白带有很深的绿色和青草味，从视觉和味觉上使人难于接受。目前国内对苜蓿叶蛋白 的研究大多局限于提取方法的研究，有关脱腥、脱色及苜蓿叶蛋白应用的研究还较少。对苜蓿叶蛋 白进行脱色和去味处理，脱去苜蓿叶蛋白的绿色及大部分草膳味，可以为开发苜蓿叶蛋白食品创造 条件，同时还可得到天然色素，从而提高苜蓿叶蛋白的利用率和经济效益m ， 苜蓿中的色素主要成分为叶绿素类色素，叶绿体中含有叶绿素和类胡萝h 素两大类色素，它 们与类囊体膜蛋白质结合形成色素蛋白复合体。叶绿体色素不溶于水。而溶于有机溶剂，叶绿体以 亲水部分与蛋白质结合，亲脂部分与类脂结合叶绿体色素易受光氧化，提取色素应在弱光中进 行，并避光保存色素。叶绿素主要用于化妆品、食品、脂肪、肥皂、油蜡及医药方面“ 从植物中提取色素的生产工艺主要有以下几种： 溶剂萃取法1 用溶剂浸提，然后再经过滤、减压浓缩、真空干燥精制等工艺过程得到最终产品。提取色素所 用的溶剂根据色素的性质、所用原料等情况有不同的选择，常用的有水、酸碱溶液、有机溶液，如 乙醇、丙酮、烷烯烃、苯等，油脂类及二氧化碳等。此法工艺简单。但产品质量不太理想，往往存 在色素溶解性差，色泽变化较大等缺点，且萃取过程要用大量的溶剂( 常用的如乙醇) ，回收困难， 导致产品生产成本高。常用于试验研究，是一种比较常用的方法。 超临界流体萃取法。 超临界流体萃取法是食品工业新兴的一项萃取和分离技术，是使用高于临界温度、临界压力的 流体作为溶剂的萃取过程处于临界点附近的流体不仅对物质具有极高的溶解能力，而且物质的溶 解度随体系的压力或温度的变化而变化，从而通过调节体系的压力或温度就可方便地进行选择性地 萃取分离物质，常用c o o 作为萃取剂 吸附精制法嘶嘲 采用大孔树脂吸附，大孔吸附树脂是一类以吸附为特点，对有机物具有浓缩、分离作用的高分 子聚合物，在有机物分离、制备与提纯等方面具有广泛的应用。吸附树脂对物质的吸附作用不仅同 树脂的物理和化学性质有关，而且同吸附物质的性质、介质的性质及操作方法等因素有关。多用于 提取花青素类色索，它是将植物用酸性溶液浸提后过滤，滤液用大孔吸附树脂吸附后再用合适的溶 剂洗脱，将洗脱液浓缩或喷雾干燥即得最终产品。经过大孔吸附树脂的处理，色素得到了纯化它 的工艺比溶剂法复杂，但产品的质量好，回收率高。 本章主要用有机溶剂法对苜蓿叶蛋白进行脱腥、脱色研究，并对脱腥、脱色工艺进行了优化 为营蓿叶蛋白在食品工业中的综合利用提供实验依据。 3 2 材料与仪器 3 2 1 材料 苜蓿叶蛋白，实验室提取 3 2 2 仪器 t d l - 5 离心机 t g 3 2 8 a 型电光分析天平 d e l t a 3 2 0 精密p h i - i j v 一2 1 0 0 紫外可见分光光度计 u v 一2 8 0 2 p c p c s 型分光光度计 上海安亭科学仪器厂 上海天平仪器厂 梅特勒一托得多( 上海) 仪器公司 尤尼科( 上海) 仪器有限公司 尤尼科( 上海) 仪器有限公司 扛南大学硕士毕业论文 3 3 试验方法 3 3 i 有机溶剂法 先通过初步试验确定浸提试剂，再通过单因素试验，分析影响苜蓿叶蛋白脱色、脱腥的各因素： 料液比、加热温度、加热时间。根据色素吸光度，蛋白质的含量分析结果，再在单因素的基础上设 计正交试验，得到最佳工艺参数。 3 3 1 1 吸光度铡定 由l a m b e r t - b e e r 定律：d = k c i ( d 是吸光度值，k 为吸光系数。c 为有色溶液浓度，1 为液层厚度) 知，色素溶液的浓度与吸光度值成正比。因此，浸提液用i n - 2 1 0 0 紫外可见分光光度计在6 4 9 珊、6 6 5 n m 波长条件下测其吸光度，以相应试剂为参比，室温下分别在6 4 9 n m 和6 6 5 n m 处测定吸光度，由a m o n 公式 计算叶绿素a 与叶绿素b 的含量： 叶绿素8 含量( m g g ) = ( 1 2 7 a 6 6 5 - 2 6 9 a 6 4 9 ) v 1 0 0 0 叶绿素b 含量( m g g ) ( 2 2 7 a 6 4 9 - 4 6 8 x a 6 6 s ) x v i 0 0 0 叶绿素总含量( m g g ) ：叶绿素a 含量+ 叶绿素b 含量 式中a 6 6 5 ，a 6 4 9 分别为相应波长下的吸光度值，v 为提取液体积。