HBV基因分型的检测方法及临床意义.ppt

HBV基因分型检测方法及其意义,杭州博赛基因诊断技术有限公司,HBV的基因型和分布,根据全基因核苷酸序列异源性或者基因区核苷酸序列异源性，将不同病毒株分为不同的基因型，迄今为止，可以分为个基因型，即、和型。,2.A型：西欧,北欧、北美洲及非洲地区;B型和C型：亚洲,澳大利亚;D型：中东、北非和南欧;E型：非洲撒哈拉沙漠地带;F型：美国;G型：法国和美国;H型：尼加拉瓜、墨西哥,及美国加里弗尼亚地区。,HBV的基因型和分布,17.2,81.4,53,32,12.2,84.7,0%,20%,40%,60%,80%,100%,中国(上海）,台湾,日本,其他基因型,HBV基因型C,HBV基因型B,亚洲部分地区的基因型分布,国内部分地区基因型分布,100%80%60%40%20%,沈阳北京广州上海,HBV基因型的临床意义,近年来研究发现,HBV基因型具有如下意义HBV标志物清除病毒致病性乙型肝炎的病程及转归药物敏感性与HBV血清型比较,HBV基因型具有更加重要的意义。,HBV基因型和的清除的关系,临床资料显示，的清除可能与基因型有关。与基因型相比，基因型有更高的阳性率，分别为与。基因型的自发性清除要比C基因型早年，并且在清除后，肝脏生物化学指标持续正常。,HBV标志物清除,HBeAg累积清除率,JournalofMedicalVirology70:350354(2003),HBV标志物清除,HBV基因型与HBsAg转阴的关系,Hepatology.2004Jun;39(6):1694-701.,HBV标志物清除,HBV基因型与病毒致制病性的关系,日本学者Shiina分析了1744例HBsAg阳性者的基因型与肝功能异常的关系后发现,与B基因型相比,C基因型的肝功能异常更为常见。,C基因型引起的临床表现及组织学损伤更严重。,HBV基因型与肝硬化的关系,病毒致病性,KAO等在进一步对67例无症状HBV携带,103例慢性肝炎,32例肝硬化,20例肝细胞癌患者进行基因分型研究中发现,各组均以B/C型为主,C基因型所占比例按上述顺序逐渐增大,而B基因型的比例逐渐减小;与B基因型比较,C基因型在肝硬化及50岁以上的肝细胞癌患者中比例较高,而B基因型与50岁以下,特别是35岁以下的肝细胞癌患者有关。,HBV基因型和肝细胞癌的关系,病毒致病性,HBV基因型与抗病毒药物敏感性的关系,不同基因型HBV感染对干扰素治疗的反应有差别,Kao对58例慢性乙型肝炎患者给予干扰素治疗48周,B基因型和C基因型的完全应答率(血清ALT恢复正常,HBeAg消除,HBVDNA转阴)分别为41和15,说明干扰素对B基因型治疗效果较好。,KaoJH,etal.JHepatol2000;33:9981002.,核苷类药物疗效与HBV基因型的关系。,Intervirology2003;46:373376,注：最近文献倾向于没有两者没有差异，但是基因型B除外。,检测基因分型的常见方法,基因测序法PCR-RFLPELISA生物芯片实时荧光PCR法,核酸序列测定法检测HBV基因分型方法,首先采用末端终止法，获得待检样本的核酸序列，通常按照国际惯例选择HBVS区基因进行扩增，获得HBVS区的序列，然后将该序列与国际基因库中HBV各个基因型的标准序列进行比对，建立亲缘树，分析待检HBV与何种基因型的遗传距离最近，即判断为该种基因型。,HBV亲缘树分析,B基因型,C基因型,B、C混合型,荧光PCR检测特点：1.准确性好:与核酸序列测定分型比较，两者结果吻合率100%。2.有效防污染:PCR反应和分析在完全闭管条件下进行，同时采用了d-UTP-UNG系统，有效防范PCR产物污染，提高检测结果的可靠性。3.操作简单、耗时短、结果判断直观明确:试剂在荧光PCR检测仪上进行扩增和分型分析，不需进行电泳、核酸纯化、紫