（劳动卫生与环境卫生学专业论文）太湖水华优势藻的环境特性及藻菌作用机制.pdf

m i i i l l i i l i i i l i i i l l i i l m l i i i i i i i l | i l l y 17 613 8 4 e n v i r o n m e n t a lc h a r a c t e r i s t i c so f t h ed o m i n a n ta l g a es p e c i e sa n d e f f e c tm e c h a n i s m sb e t w e e na l g a ea n d a l g i c i d a lb a c t e r i ai nl a k et a i h u at h e s i ss u b m i t t e dt o s o u t h e a s tu n i v e r s i 够 f o rt h ea c a d e m i cd e g r e eo fm a s t e ro fm e d i c i n e b y l ix i a o - q i n s u p e r v i s e db y p r o f e s s o rp u y r u e p u s c h o o lo fp u b l i ch e a l t h s o u t h e a s tu n i v e r s i t y n 丛y2 0 1o 东南大学学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含 其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构 的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均 已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 研究生签名：盘瀣日期：趔矿 东南大学学位论文使用授权声明 东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位 论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人 电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论 文被查阅和借阅，可以公布( 包括刊登) 论文的全部或部分内容。论文的公布( 包 括刊登) 授权东南大学研究生院办理。 研究生签名：兰垄庄导师签名：日期：沙h 侈一 目录 目录 i n d e x 中文摘要i 英文摘要 主要缩略词表 前言l 第一章基于p c r 的蓝藻、微囊藻、产毒微囊藻及其产毒特性检测方法的建立6 第一节蓝藻、微囊藻、产毒微囊藻全细胞p c r 检测方法的建立6 第二节微囊藻、产毒微囊藻环境丰度r t q 。p c r 检测方法的建立1 3 第三节产毒微囊藻产毒能力检测与评价方法的建立1 9 第二章太湖水华优势藻环境特性的研究2 6 第一节太湖水华优势藻的分离、检测和产毒能力的研究2 6 第二节太湖南泉水域水华优势藻的环境丰度及产毒能力的研究3 4 第三章斑点气单胞溶藻菌溶藻作用与溶藻活性物质的研究4 4 第一节斑点气单胞溶藻菌溶藻作用研究4 4 第二节斑点气单胞菌溶藻活性物质性质的初步研究5 2 第三节斑点气单胞菌溶藻活性物质的初步分离及溶藻效果评价6 0 总 结7 l 综述7 3 作者简介7 9 致j 射8 0 ：i一：和r。?。o 中文摘要 太湖水华优势藻的环境特性及藻一菌作用机制 研究生：李小琴指导教师：浦跃朴 东南大学公共卫生学院 中文摘要 近年来，太湖频繁爆发蓝藻水华，造成水质恶化和湖泊生态退化，成为影响水资源环境、制约 经济与社会可持续发展的一个重要因素。研究显示太湖水华优势藻为微囊藻，但关于蓝藻、微囊藻、 产毒微囊藻在太湖水华中的丰度、分布以及影响因素等生态特性研究极少，关于太湖产毒微囊藻类 的产毒特性和产毒效率的研究尚未见报道。本研究拟建立基于全细胞p c r 、r t q p c r 技术、能对藻 类环境丰度以及产毒能力进行测定与分析的检测方法；并对太湖水华藻的种类、环境生态特征以及 太湖产毒微囊藻的产毒特性进行分析；进一步研究太湖土著斑点气单胞溶藻菌的溶藻作用与机制。 预期结果为太湖水华的治理提供有效技术手段和重要基础数据。 一、基于p c r 的蓝藻、微囊藻、产毒微囊藻及其产毒特性检测方法的建立 利用针对藻蓝蛋白中间基因序列( p c i g s ) ，微囊藻1 6 sr d n a 保守序列( m 打1 6 sr d n a ) 以及微 囊藻毒素合成酶基因b ( m c y b ) 的特异性引物，以f a c h h7 8 0 6 标准铜绿微囊藻为阳性藻株，建立检 测蓝藻、微囊藻以及微囊藻毒素合成酶基因b 的全细胞p c r 检测法，并对全细胞p c r 检测法的灵 敏度、特异度进行测定。建立的全细胞p c r 快速检测方法不受藻细胞生长时期的影响，也不受其它 藻类细胞或杂菌的干扰。灵敏度测试结果表明，取l o 此藻细胞样品为模板，在3 0 止反应体系中， p c 1 g s 的检测下限为1 0 0 0 c e l l s 反应，m c y b 的检测下限为1 0 0 0 0 c e l l s 反应；在2 5 此反应体系中， 肋a 卵1 6 sr d n a 的检测下限为1 0 0 0 0 c e l l s 反应。 应用s rg r e e ni 标记技术，与上述的p c r 条件相结合，建立了实时荧光定量检测蓝藻、微 囊藻属、产毒微囊藻在环境中的相对丰度的r t q p c r 方法。该方法对蓝藻的检测范围为1 0 6 1 0 1 1 基 因拷贝数此( r 2 = 0 9 9 4 1 ) ，微囊藻属的检测范围为1 0 4 1 0 9 基因拷贝数p l ( r 2 = o 9 9 3 6 ) ，微囊藻毒素 合成酶基因b 的检测范围为1 0 2 1 0 5 基因拷贝数此( r 2 = o 9 9 5 1 ) 。蓝藻、微囊藻、微囊藻毒素合成 酶基因b 初始拷贝数与c t 值之间的线性关系曲线表达式分别为：c 卢3 1 4 6 6 l g c o p y n u m b e r h 5 8 1 6 ， c 每3 0 3 6 9 kc o p yn u m b e 什4 2 5 5 l ，c 产- 3 3 1 2 0kc o p yn u m b e 什3 1 2 9 7 。 应用本实验室研究的s p e h p l c 提取、分析微囊藻毒素的技术，绘制m c l r 标准曲线，并对 方法灵敏度、回收率和精密度进行测定，提出以单位藻细胞产m c u t 的量反映藻细胞的产毒能力的 概念。结果显示，建立的h i ，l c 检测法对m c l r 检测的浓度范围为o 1 1 0 o 陷m l ，标准曲线为 y = 3 8 7 9 7 x + 1 7 5 3 6 ( r = 0 9 9 9 0 ) ，平均回收率为9 2 1 ，变异系数为5 8 。 二、太湖水华优势藻环境特性的研究 利用全细胞p c r 检测法对自太湖梅梁湾分离获得的两株藻株t h l 、t h 2 进行鉴定，并结合 h p l c 、r 1 旧p c r 对产毒株t h l 的产毒特性进行研究。结果显示，自太湖梅梁湾分离获得的t h l 藻株为产毒微囊藻，t h 2 为不产毒微囊藻。培养1 5 天的太湖产毒藻株t h l 胞外藻毒素产量为 东南大学硕上学位论文 o 0 8 5 士0 0 1 7 峙1 0 8 c e l l s ，总藻毒素产量为0 5 9 4 士0 0 2 3 心1 0 8 c e l l s 。太湖产毒藻株t h l 微囊藻毒素合成 酶基因b 的表达能力为f a c h h 7 8 0 6 标准铜绿微囊藻的l 1 6 8 2 6 。 对太湖南泉水域进行了为期一年的水质、藻类环境丰度和产毒能力的监测与评价。结果表明， 南泉水域的水污染程度与富营养化程度均为中度：5 1 1 月总藻密度均超过水华阈值( 1 0 6 c e l l s l ) ， 9 月份达到1 0 9 c e i l s l 的最高值；微囊藻是太湖南泉地区的优势藻，其环境丰度维持在8 0 9 0 左右； 产毒微囊藻的环境丰度在5 1 0 月均高于4 0 ，随着水温的下降，其环境丰度迅速降低并在1 2 月降 到了5 6 6 ；总藻产m c l r 的能力在6 、1 1 月份，分别出现两个峰值；产毒微囊藻产m c l r 的能 力为1 6 6 l 9 2 9 3 烬亿细胞。l l 1 2 月随着水温和藻密度的急速下降，产毒微囊藻产m c l r 的能 力显著增强。结果提示太湖南泉水域全年大部分时间存在水华，微囊藻为其优势藻，产毒微囊藻的 环境丰度及其产m c l r 能力的动态变化与水温密切相关。冬季产毒微囊藻产毒能力显著增强。因此， 在水华和非水华期内，对有害藻华的防制都应予以重视。 三、斑点气单胞溶藻菌除藻作用与溶藻活性物质的研究 斑点气单胞菌对浓度为1 0 6 c e l l s m l 的标准藻、太湖野生微囊藻t h l 和t h 2 的4 8 h 溶藻率分别 为6 5 8 2 、7 8 0 4 和8 2 6 7 。其溶藻活性随溶藻菌浓度升高而增强，1 0 4 1 0 7 c e l l s m l 的斑点气单胞 菌4 8 h 溶藻率分别为1 6 2 5 、1 8 7 5 、4 8 7 5 、8 1 2 5 。其溶藻活性强弱与藻细胞初始浓度呈现负 相关，对1 0 1 0 6 个m l 藻细胞4 8 h 溶藻率分别为1 0 0 、1 0 0 、9 0 2 4 、8 0 4 6 。处于不同生长周 期的斑点气单胞溶藻菌对藻细胞的溶解能力差异较大，对数生长期、稳定生长期、衰退期的斑点气 单胞溶藻菌对1 0 6 m l 藻细胞4 8 h 溶藻率分别为3 0 5 4 、5 3 7 5 、7 2 5 0 。其对处于不同生长周期 的铜绿微囊藻溶藻能力略有不同，对浓度为1 0 6 ，m l 处于对数期、稳定期、衰退期的铜绿微囊藻4 8 h 溶藻率分别为4 7 3 4 、5 3 4 1 、7 4 6 8 。温度对其溶藻影响较大，随着温度的升高，溶藻能力升高， 1 5 、2 5 、3 5 组对l o o m l 藻细胞4 8 h 溶藻率依次为2 5 3 5 、5 6 7 1 、7 2 7 3 。斑点气单胞溶 藻菌主要通过分泌胞外活性成分来溶解藻细胞。在3 0 1 2 0 范围内，温度升高有助于提高胞外活性 成分的除藻能力。在p h 5 9 的范围内，偏碱性条件有助于提高胞外活性成分的除藻能力。石油醚、 氯仿、乙酸乙酯等不同极性有机溶剂萃取实验结果表明，随着有机溶剂极性的升高，溶剂有机相萃 取到的活性成分就越多。心k d a 活性组分4 8 h 溶藻作用是胞外滤液溶藻作用的8 7 2 7 。抗氧化测试 发现胞外滤液在常温下放置4 天后，溶藻活性降低了5 5 ，而添加了l 的抗坏血酸( v c ) 的胞外滤液 溶藻率仅仅只下降了4 。乙醇沉淀实验显示乙醇提取液4 8 小时的溶藻作用是胞外滤液溶藻作用的 9 2 1 7 ，而醇析沉淀物几乎没有溶藻作用。斑点气单胞菌胞外滤液中未检测到含有多糖、蛋白质、 核酸、抗生素虽有检测到，但乙醇沉淀实验否定了活性物质为核酸的可能。 溶藻活性物质经5 倍体积的无水乙醇4 冰箱中过夜抽提，抽提液经离心( 4 0 0 0 r m i n ，1 0 m i n ) 后旋转蒸发待无水乙醇完全蒸发，经硅胶( 1 0 0 2 0 0 目) 柱分离，以氯仿甲醇= 2 ：l 、l ：l 、0 ：l 进行梯度洗脱，得到两个主要溶藻组分。紫外( 3 6 5 m ) 灯下可见两组分均呈现蓝紫色荧光，组分1 呈 淡黄色，不定型颗粒状，组分2 呈棕黄色，油状。两组分均有一定的溶藻能力，但组分2 的溶藻能 力要强于组分l ，推断斑点气单胞菌分泌的溶藻活性物质为多组分抑藻物质。官能团显色实验和紫 外扫描结果提示斑点气单胞菌分泌的溶藻活性物质可能是含有苯环结构的胺类还原性物质。 l c m s i t - t o f 分析结果显示斑点气单胞菌分泌的溶藻活性物质含有两种主要成分，活性组分l 、2 i i 中文摘要 的分子量分别为1 8 9 1 2 3 2 、1 6 6 0 8 6 2 ，目前尚不能推断活性组分1 的结构，初步判定活性组分2 为 苯丙氨酸，有关两种组分的分离、提取、纯化、鉴定还待进一步研究。活性物质的4 8 h 溶藻e c 5 0 为 6 8 2 4 2 陷m l ( f a c h h 7 8 0 6 藻细胞浓度：1 0 6 c e l i 洳l ，反应温度：2 8 ，反应时间：4 8 h ) 。9 5 可信 区间为6 4 8 5 7 蠼加l l 7 1 8 9 2 协l 。 关键词：蓝藻，微囊藻，微囊藻毒素合成酶基因b ，全细胞p c r ，环境丰度，溶藻菌，溶藻活 性物质，太湖 i i i 东南大学硕士学位论文 e n v i r o n m e n t a lc h a r a c t e r i s t i c so ft h ed o m i n a n t 1 1 一一 a i g a es d e c l e sa n c le i i e c tm e c n a n l s m sb e t 、v e e n a l g a ea n da l g i c i d a lb a c t e r i ai nl a k et a i h u l ix i a o q i ns u p e r v i s e db yp r o f e s s o rp uy u e p u s c h o o lo fp u b l i ch e a l t hs o u t h e a s tu n i v e r s i t ) r a b s t r a c t i h e 骶q u e n t 伽t b r e a k so l 。b l o o mi ns u m m e r da u 咖o fl a k et a i h ui nr e c e n ty e a r sh a v er e s u l t e di n 廿1 ed e t e r i o r a t i o no fw a t e rq u a l i t ya n dt h ee c o l o g i c a ld e 铲a d a t i o n ，a n dd i r e c t l yi m p a c t e do nu r b a nw a t e r s u p p l y b e c a u s eo ft h ef b q u e n to c c u r r e n c eo fb l o o mi nl a k et a i h u ，i ti sn e c e s s a d rt os y s t e m a t i c u n d e r s t a l l d i n go ft h et ) ，p e s ，e n v i r 0 姗e n t a la b u n d a n c ea i l dt o x i np r o d u c t i o nc a p a c i t yo ft h ea l g a e a l t h o u 曲 蚰j d i e sh a v es h o w nt 1 1 a t 肋蚀彬廊w 勰t h ed o m i n a n ta l g a ei nl a k et a i h u ，t h ee c o l o 西c a lc h a r a c t e f i s t i c s s t u d y0 fe n v i r o n m e n t a la b u n d a n c e ，d i s 打i b u t i o na n da f f e c tf a c t o r so nt h ec y 锄o b a c t e r i a ，舭缈廊a i l d t o x i c 朋钯阳刁例妇，t o x i np r o d u c t i o nc h a r a c t e r i s t i c sa n de f e i c i e n c yo ft o x i c 胁鲈咖w a sf e w t h e r e f o r e ， t h em a i np u 印o s eo ft h i ss t u d yi st 0e s t 曲l i s hd e t e c t i o nm e t h o d so fe n v i r o l l i i l e n t a la b u n d a n c e 锄dt o x i n p r o d u c t i o nc a p a c 姆o ft o x i c 慨阳q 瞪廊i nl a k et a i h uu s e db yw r h o l e c e l lp c ra n dr 1 - q p c rt e c h n o l o 斟， a n dt oa 1 1 a l y s i st h et y p eo fb l o o m ，e n v i r o n m e n te c o l o g i c a ic h a r a c t e r i s t i c s ，t o x - np m d u c t i o nc a p a c 时肌d e 仟i c i e n c yo ft o x i cm i c r o c y s t i si nl a k et a i h u ，t of h n h e rs t u d yt h ee f r e c tm a c h a n i s nb e t 、) r e e na l g a ea n d a l g i c i d a jb a c t e r i ai nl a k et a i h u 1 e s t a b i i s h m e n to fw h o i e - c e i lp c rf o rd e t e c t i o no fc y a n o b a c t e r i a ，慨，d 筘f 扭，a n dt o x i c m i c r o 掣s t i s e s 协b l i s h m e n to fw h o l e - c e l lp c rf o rd e t e c t i o no fm ec y a n o b a c t e 渤，朋z c 阳哆珍廊a n dt o x i c 舭 凰 w 笛p e r f o 咖e dw i t ht h es p e c i f i cp r i m e r so fg e n es e q u e n c e s 锄o n gp h y c o b i l i p r o t e i n s ( p c i g s ) ，c o n s e r v e d s e q u e n c e so f16 sr d n ao f 舭c = 声廊a n dm i c r o c y s t i n 踟t 1 1 e s i sg e n eb ( m c y b ) 舭声廊础，蹭加。阳 f a c h h 7 8 0 6w 嬲郝p o s i t i v ea l g a e m e a n w h i l e ，s e i l s i t i v i 够a n ds p e c i f i c i 够o ft 1 1 ew h o l e c e l lp c rm e t h o d s w e r ed e t e n i l 洫e d t h ew h o l e - c e l lp c re s t a b l i s h e di i it i l i s 咖d y 、v 嬲i l o ta 低c t e db yg r o w i ho fa l g a lc e l l s 觚db t e r i a s e n s i t i v i 够s t u d ys h o w e dt 1 1 a tt a i ( i n gl o 此s 锄p l e so fa l g a lc e l l s 舔a t e m p l a t e ，n l ed e t e c t i o n l i m i to fp c - i g sa n dm c y bw 嬲1 0 0 0 c e l l 鲋e v e 巧他a c t i o n 锄d1 0 0 0 0 c e l l s e v e 巧豫a c t i o ni i l3 0 lr e a c t i o n s y s t e m ，代s p e c t i v e l y t h ed e t e c t i o nl i m i to f16 sr 【) n ac o n s e r v a t i v es e q u e n c eo f 触阳g 腰f 豇w 罄 10 0 0 0 c e l l s e v e 叮r e a c t i o ni n2 5 此，r e a c t i o ns y s t e m c o m b i n a t i o no fs y b rg r e e nil a b e l i n g 锄dp c rr 1 心p c rd e t e c t i o nm e t h o do fr e l a t i v ea b u n d a n c e i nt h ee n v i r o n m e n to fm 配r d c 筘廊拍dt o 虹c 蚴c r d c ：声凰w 勰e 啦出l i s h e d t h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h e d e t e m i n a t i o nr a n g e so fc y a n o b a c t e r i a ，朋钯阳c 筘廊a n dt o x i c舭 廊w e r el0 6 10 1 1g e n e 烈 英文摘要 c o p i e s i 止，l0 4 - l 0 9g e n ec o p i e s i 止a n d10 2 10 5g e n ec o p i e s 肛l ，r e s p e c t i v e l y ：t h es t a n d a r dc u r v e so f c y a n o b a c t e r i a ，朋泐够声脑a n d 白0 x i c 垆凰w e r ea sf o l l o w s ：c t - - 3 1 4 6 6 l g c + 4 5 8 1 6 ( r 2 = 0 9 9 4 1 ) ， c t = 一3 0 3 6 9 l g c + 4 2 5 5 l ( r 2 = o 9 9 3 6 ) ，c 严- 3 3 1 2 l g c + 3 1 2 9 7 ( r 2 = o 9 9 5 1 ) t e c l l n o l o g yo fe x n a c t i o n 雒da n a l y s i so fm i c r o c y s t i n sb ys p e - h p l cw a l sa p p l i e dt os t u d yt h e m n d a r dc u eo fm c - l r t h es e n s i t i v i t y ，r e c o v e 叮a i l dp r e c i s i o no ft h em e t h o dw e r ed e t e m i i n a t e d t h e t o x i np r o d u c t i o nc 印a c i 够w 雒e x p r e s s e db yp r o d u c t i o no fm c - l ro fu n i 够a l g a ec e l l s r e s u l t ss h o w e dt h a t t h ed e t e c t i o nc o n c e n t r a t i o ne x t e n to fm c l rb yt h ee s t a b l i s h e dd e t e c t i o nm e t h o do fh p l cw a so 1 1 0 o 协l ，s t a n d a r dc u n ，eo fm c - l rw a l sy 2 3 8 7 9 7 x + 1 7 5 3 6 ( r = 0 9 9 9 0 ) ，a v e r a g er e c o v e 巧w 邪9 2 1 ， c o e 伍c i e n to f v 撕a b i l i t yw a s5 8 2 s t u d yo ne n v i r o n m e n t a lc h a r a c t e r i s t i c so ft h ed o m i n a n ta l g a ei nl a k e1 a i h u t w oa l g a es t r a i l l st h1 锄dt h 2w e r ei s o l a t e da n di d e n t i f i e d 舶mm e i l i a i l g w a na r e ai nl a k et a i h u a n dt h et o x i np r o d u c t i o nc h a r a c t e r i s t i c so ft o x i cs t r a i nt hlw e r es t u d i e d r - e s u l t ss h o w e dt h a tt 、v oa l g a e s 舰i n st l ，1 h 2w e r et o ) 【i c m i c r o c y s t i s 锄dn o n t o x i cm i c r o c y s t i s ，r e s p e c t i v e l y t h ee x t l a c e l l u l a r m i c r o c y s t i np r o d u c t i o na n dt o t a lm i c r o c y s t i np r o d u c t i o nw e r e0 0 8 5 士o 0 17 飕r l0 8 c e l l sa n d0 5 9 4 士0 0 2 3 峙10 6 c e l l so f7 m la l g a es t r a i nc u l t u r e df o r l5d a y s 1 1 h em c y bg e n ee x p r e s s i o nc a p a c i t yo ft o x i cs t m i n t h lw 嬲l 1 6 8 2 6o f 力c 阳掣麻口p ，增锄傩口f a c h h 7 8 0 6 t h ew a t e rq u a l i 够，e n v i r o 啪e n t a la b u n d a n c e sa n dm c - l r p r o d u c t i o na b i l i t ) ro fa l a g ei nn a n q u a no f l a k et a i h uw e r em o n i t o r e da n de v a l u a t e df o ro n ey e a r t h e 陀s u l t si n d i c a t e dt h a tt h ew a t e rq u a l i 够i n n a l l q 呦r e g i o no fl a l ( et a i h uw a si nt h em o d e r a t ed e g r e eo fp o l i u t i o n 锄de u n o p h i c a t i o n a l g a ld e n s 时 e x c e e d e dt h et h r e s h o l do fb l o o m ( 10 6 c e l i s ，l ) n o mm a yt on o v e m b e r ，a 1 1 da c h i e v e dt h eh i 曲e s tv a l u eo f 10 c e l l s li ns e p t e m b e r 疗伽垆凰t o o ko nd o m i n 觚t ，t h ea b u n d a n c eo fi tm a i n t a i n e di n8 0 9 0 t h e a b u n d a n c eo ft o x i c 黼哆s 廊a c c o u n t e df o rm o r et h a i l4 0 o fc y a n o b a c t e r i a 自d mm a yt oo c t o b e ra n d t h e ns i g n i f i c a n t l yd e c l i n e dt 05 6 6 d u et 0t h eo b v i o u sr e d u c t i o no fw a t e rt e m p e r a t u 陀i nd e c e m b e r t h e m c l rp r o d u c t i o na b i l i 够o ft o t a la l a g et u m e do nt w op e a l cv a l u e si i lj u l ya n dn o v e m b e r ，r e s p e c t i v e l y t h ev 撕a t i o no fm c - l rp r o d u c t i o na b i l i 够w a s 啪g e df 而m1 6 6lt 0 9 2 9 3 u l0 8c e l l so ft o x i c m i c r o c y s t i s m t ht h es i 印i f i c a n td r o po fw a t e rt e m p e l i a t u r e 锄da l g a ld e n s i 劬t h em c l rp r o d u c t i o n a _ b i l i 够o ft 0 虹c 肋钯删，西w 邪o b v i o u s l yi i l c r e 雒e d 行l o mn o v e m b e rt od e c e m b e r ni sc o n c l u d e dt h a tt h e l a k ep 陀s e n t e db 1 0 0 m 锄d 舭垆廊t a l ( e s0 nd o m i l l 锄t “n gm o s to ft h ey e a lt 1 1 ee n v i r o n m e r n a l a b u l l d 锄c e 锄dt h em c l rp d o d u c t i o na b i l i t ) ，o ft o ) 【i c 舭声踟h a v eac l o s er e l a t i o n s h i pw i 廿1w 她r t e m p e r a ：t u 舱t h em c - l rp r o d u c t i o na b i l i t ) ro ft o x i c 朋j ：c _ 阳垆廊o b v i o u s l yi i l c r e 雒e si nw i m e r t h e r e f o r e ， t h ee 矗e c t i v ec o m m lo fh a n n 如la l a g eb l o o ms h o u l db ec o l l s i d e r e db o t hi i lm eb l o o mp e r i o d 觚dt h e n o n - b l o o mp e r i o d 3 t h ea i g i c i d a ie f f b c ta n dc h a r a c t e r so f a l g i c i d a lc o n l p o n e n t so f 4 伽，托口甩口sp “以c f n 胁 t h ea l g i c i d a le 任e c t2 i r l dc h a r a c t e r so fa l g i c i d a lc o m p o n e r l t so f 彳p 加聊d ，z 娜p 堋c 胁舰a n n a t i v e a l g i c i d a jb a c t e r i u mi s o l a t e d 丘。o ml a k et a i h u 、v e r es t u d i e d 1 1 圮4 8 hl ”i cr a t e so f 么p m 聊d ，z c 玷p z 们c 砌，口o f 蛐m d a r da l g ，t h la n d1 h 2w i t hc o n c e n t r a t i o no f10 6 m lw e 陀6 5 8 2 ，7 8 0 4 v 东南大学硕士学位论文 a n d8 2 6 7 ，r e s p e c t i v e l y t h ea l g - l ”i ca b i l 时o ft h e 彳p ，0 m d 刀傩p 堋c 触口w e r ee n h a n c e dw i t ht h e c o n c e n t r a t i o nm i s e d ，t h ea l g 1 y t i cr a t e so fl0 4 10 7 m lw e r e16 2 5 ，l8 7 5 ，4 8 7 5 ，81 2 5 ， r e s p e c t i v e l y 。t h ea l g a e _ l y t i ca c t i v i t yo f t h eb a c t e r i ah a dan e g a t i v ec o r r e la t i o nw i t ht h ec o n c e n 仃a t i o no f t h e a l g a e ，t h e4 8 ha l g a e l ”i cr a t e so fm eb a c t e r i ai n1o 一l0 6 c e n s m l 阴记阳c 筘凼口p ，z q 咖d 阳w e r elo o ，l0 0 ， 9 0 2 4 ，8 0 4 6 ，r e s p e c t i v e l y t h ea l g 纠y t i ca c t i v i t i e so f b a c t e r i ai nd i 行e r e n tg r o 叭hc y c l e ( 1 0 9 撕t h m i c g r o hp h 雒e ，p l a t e a up h a s e ，d e c l i n ep h a l s e ) w e r es i g n i f i c a n t l yd i 仔e r e n tf r o me a c ho t h e r ，t h e4 8 ha l g a e l ”i c r a t e so fd i f 诧r e mg r 咖hc y c l em 1 0 3 1 0 6 m l 朋钇，d 眵s 凼口e 朋苫伽傩aw e r e3 0 5 4 ，5 3 7 5 ，7 2 5 0 ， r e s p e c t i v c l y t h ea l g a e - l 舛ca c t i v i t i e so ft h eb a c t e 渤t ol0 6 m l 彳配阳哆s 凰船似g 加口i nd i 腩r e n tg r o 、劬 c y c l e ( 1 0 9 a r i t h m i cg r o w c hp h a l s e ，p l a t e a up h a s e ，d e c l i n ep h a s e ) w e r es l i g h t i yd i 仃e r e n t ，t h e4 8 ha l g a e l ”i c r a t e sw e r e4 7 3 4 ，5 3 4l ，7 6 6 8 ，r e s p e c t i v e l y t e m p e 咖r eh a dg r e a ti n f l u e n c eo nm ea l g - l ”i c a c t i v i t i e s ，w h i c hi n c r e a s e dw i t ht h et e m p e 枷r er a i s e d t h e4 8 ha l g a e l ”i cr a t e so fm i x e db a c t e r i at o 1 0 0 m l 研加声咖口p 哪口u n d e r1 5 ，2 5 ，3 5 w e r e2 5 3 5 ，5 6 7 1 ，7 2 7 3 ，r e s p e c t i v e l y 。i t w a l ss 打0 n g l ys u g g e s t e dt h a tm ed e g r a d a t i o no fa l g a eb y 爿p m 所d 疗船p 柳c 妇幻、】l ，a sm a i n l yt h r o u 曲t h e i n d i r e c tw a yw i t ht 1 1 ee x t r a c e l l u l a rs u b s t a n c e ss e c r e t e d w i t h i nt h el i m i t so f3 0 t 012 0 ，t h e a l g a c - r e m o v a la b i i i t ) ，o ft h ee x t r a c e l l u l a rf i l 仃a t ew a si n c r e a s e dw i m t h et e m p e r a t u r er a i s e d i nt h er 觚g eo f p h 5 9 ，w e a ka l k a l i n ec o n d i t i o n sc o u l de n h a n c et h ea l 髟峙一r e m o v a la b i l i t y t h ee ) ( t r a c e l l u l a rf i l t r a t e sw e r e e x 眦屺t e db yd i 行e r e n tp o i a ro 唱a n i cs o l v e n t ：p e t r o l e u me t h e r ，c h l o r o f o n l l ，e t h y la c e t a t e nr e v e a l e dt h a tw i t h t h ei n c r e a s eo fo 唱a n i cs o l v e n t s p o l 撕劬。唱锄i cp h a l s eo ft h es o l v e n tc o u l de x 仇l c tm o r e 锄dm o r e a l g i c i d a lc o m p o n e n t t h e4 8 ha l 西c i d a le f f e c to f t l l ea c t i v ec o m p o n e n tw h i c hm o l e c u l a r 2 i ( d aw a s8 7 2 7 o fa i g i c i d a le f 佬c to fe x t r a c e l l u l a rf i l t r a t e a n t i - o x i d a t i o nt e s ts h o w e dt h a tl ”i ca c t i v i t yo ft h ee x t r a c e l l u l a r f i l t r a t ew h i c hw 笛p l a c e d4d a y sa tr o o mt e m p e r a t u r ed e c r e a s e db y5 5 ，w h i l et h el 如ca c t i v i t yo f e x t r a c e l l u l a rf i l 乜a t e sw i t h1 a l s c o r b i ca c i do n l yf e l l4 e t h a i l o lp r e c i p i t a t i o ne x p e r i m e n t s