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果蔬中1 2 种农药的高效液相色谱测定方法研究 i 1 ) q 大学硕士学位论文( 2 0 0 5 ) 中文摘要 果蔬中12 种农药的高效液相色谱测定方法研究 硕士研究生 导师 李永新 孙成均教授 本文建立了同时测定蔬菜水果中1 2 种农药的反相高效液相色谱分析方 法。1 2 种农药分别是：二嗪农、氧化乐果、甲基对硫磷、稻丰散、辛硫磷、 二甲戊乐灵、甲氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、氟胺氰菊酯和氯 菊酯。分析方法：将样品捣碎，用乙酸乙酯超声提取，经f l o r i s i l 固相萃取柱 净化、正己烷一二氯甲烷( 1 ：1 ，v v ) 洗脱、氮气吹干浓缩、甲醇定容后用 高效液相色谱柱分离、紫外检测，外标法峰面积定量。还对色谱柱选择、流 动相组成及比例、流动相流速、柱温和紫外检测波长等试验条件进行优化， 确定了最佳分析条件。色谱柱：p h e n o m e n e x ( u s a ) ，c 1 8 ，5 1 a m ，2 5 0 4 6 m m ； 柱温：2 5 ；流动相：乙腈一水；流速：1 2 m l m i n ；洗脱梯度：o 1 0 o o m i n 内乙腈由5 0 缓慢上升至6 4 ，再在1 0 o o m i n 1 0 0 1 m i n 内快速上升至6 7 ，1 0 ，0 1 3 5 o o m i n 内乙腈由6 7 缓慢上升至9 4 。采用波长切换，在o l o o o m i n 波长为2 0 0 n t o ，1 0 o o 1 3 0 0m i n 波长为2 7 2 n m ，1 3 0 0 1 6 o o m i n 波长为2 3 0 n m ，1 6 0 0 2 2 0 0 r a i n 波长为2 8 9 n m ，2 2 0 0 2 5 8 0 m i n 波长为 2 3 8 r m a ，其余时间波长为2 0 6 n m 。1 2 种农药标准曲线的相关系数范围为 o 9 9 8 5 0 9 9 9 9 ；相对标准差( r s d ) 为0 9 9 0 一6 ，8 5 ；检测限为0 1 4 2 6 5 1 0 m g k g ；在水果中加标平均回收率6 5 9 一1 0 3 o ，蔬菜中为 6 2 馏一1 11 5 。 用本文建立的方法成功地测定了白菜、莲白、黄瓜、苹果和梨等4 0 份样 果蔬中1 2 种农药的高效液相色谱测定方法研究四川大学硕士学位论文( 2 0 0 5 ) 品中的农药残留。 本法具有快速、简便、准确、灵敏、重现性好的特点，适用于果蔬样品 中多种微量农药残留的测定。 关键词：高效液相色谱法，农药残留，固相萃取，果蔬，有机磷农药， 拟除虫菊酯类农药 墨蔓! ! ! 登查垫箜壅望堕塑鱼堕型塞查些塑壅 婴型查兰堡主堂垡堡壅! ! ! ! 翌 a b s t r a c t s t u d y o nt h es i m u l t a n e o u sd e t e r m i n a t i o no fm u l t i r e s i d u a l p e s t i c i d e si nv e g e t a b l e sa n d f r u i t sb yh i g hp e r f o r m a n c e l i q u i dc h r o m a t o g r a p h y p o s t g r a d u a t es t u d e n t ：l iy o n g x i n a d v i s o r s s u nc h e n g j u n i nt h i ss t u d y , ah i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h i cm e t h o df o rt h e s i m u l t a n e o u sd e t e r m i n a t i o no f1 2p e s t i c i d e si nv e g e t a b l ea n df r u i ts a m p l e sw a s d e v e l o p e da n de v a l u a t e d t h e 1 2 p e s t i c i d e s w e r e ：d i a z i n o n ，o m e t h o a t e ， p a r a t h i o n m e t h y l ，p h e n t h o a t e ，p h o x i m ，p e n d i m e t h a l i n ，f e n p r o p a t h i o n ， c y p e 1 1 e n l r i n ，d e l t a m e t h r i n ，f e n v a l e r a t e ，f l u v a l i n a t e ，p e r m e t h r i n t h ea n a l y t i c a l p r o c e d u r ei n v o l v e di nu l t r a s o n i ce x t r a c t i o nw i t he t h y la c e t a t e ，p u r i f i c a t i o nu s i n ga f l o r i s i l s p e ( s o l i dp h a s ee x t r a c t i o n ) c o l u m n( 6 m l ，1 0 0 0 m g ) a n dn h e x a n e d i c h l o r o m e t h a n e ( 1 ：1 , v v ) t h ee l u t ef r a c t i o nw a sb l o w nt o d r i n e s su n d e rt h e s t r e a mo fn i t r o g e na n dt h er e s i d u ew a sd i s s o l v e di no 10 m lo fm e t h a n o l ，f o l l o w e d b ys e p a r a t i o na n dq u a n t i t a t i v ea n a l y s i sb yr e v e r s ep h a s eh p l cu s i n gg r a d i e n t e l u t i o nf o rt h eb a s e l i n es e p a r a t i o no f t h e1 2p e s t i c i d e sa n dp r o g r a m m e du l t r a v i o l e t w a v e l e n g t hs h i f td e t e c t i o ni n3 2 m i n e t h y la c e t a t ew a ss e l e c t e da se x t r a c t i o n s o l v e n t t h ec h r o m a t o g r a p h i cc o n d i t i o n s ，i n c l u d i n gc o l u m nt e m p e r a t u r e ，m o b i l e p h a s e ，f l o wr a t ea n du l t r a v i o l e td e t e c t i o nw a v e l e n g t hw e r ei n v e s t i g a t e d t h e o p t i m i z e dc h r o m a t o g r a p h i cc o n d i t i o n sw e r e ：a n a l y t i e a lc o l u m n ，p h e n o m e n e xc 1 8 ， 5 1 m a ，2 5 0 x 4 6 m m ；c o l u m nt e m p e r a t u r e ，2 5 1 2 ；m o b i l ep h a s e ，a c e t o n i t r i l e w a t e r ； f l o wr a t e 1 2 m l m i n ；g r a d i e n te l u t i o nf r o m0m i n 砒5 0 a c e t o n i t r i l e w a t e rt o l o m i na t6 4 a c e t o n i t r i l e w a t e r f r o m1 0 0 0m i na t6 4 a c e t o n i t r i l e w a t e rs h a r p l y t o1 0 0 1 m i na t6 7 ，f i n a l l ya t1 0 0 1 m i nc h a n g e di n t o9 4 a e e t o n i t r i l eu n t i l 3 墨蔓! ! 堑垒垫塑壹墼亟塑鱼堕塑塞查鲨塑塑 堕塑丕兰堡主兰壁垒奎! 垫! 旦 3 5 o o m i nw h e nr e t u r n e dt o5 0 o fa c e t o n i t r i l e w a t e r w a v e l e n g t hs h i f t sw e r e a d o p t e dt oa c h i e v em o s ls e n s i t i v eu l t r a v i o l e tw a v e l e n g t hf o rl o w e rr e s o l u t i o n p a i r e dp e a k s w es e tt h eu l t r a v i o l e tw a v e l e n g t ha t 2 0 0 n ma tt h eb e g i n n i n g , a n d s w i t c h e dt o2 7 2 n ma tl o 0 0 r a i n ，t h e n2 3 0 h ma t 1 3 o o m i n ， 2 8 9 n ma t1 6 0 0 m i n ， 2 3 8 n ma t2 2 0 0 r i m ，a n df i n a l l y2 0 6 n ma t2 5 8 0 r a i n t h ed e t e c t i o nl i m i to ft h e m e t h o dw a s2 6 5 p g k gf o rd i a z i n o n ，0 1 4 p g k gf o ro m e t h o a t e ，0 7 3 1 a g k gf o r p a r a t h i o n m e t h y l ，1 19 p g k gf o rp h e n t h o a t e ，o 8 8 p g k gf o rp h o x i m ，0 3 9 u g k gf o r p e n d i m e t h a l i n ，0 2 9u g k gf o rf e n p r o p a t h i o n ， o 5 0 u g k g f o rc y p e r m e t h r i n o 3 8 u g k gf o rd e l t a m e t h r i n ，0 3 3 u g k gf o r f e n v a l e r a t e ，o 2 3u g k gf o rf l u v a l i n a t e a n do 3 0 u g & gf o rp e r m e t h r i nr e s p e c t i v e l y t h er e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n s r a n g e df r o mo 9 9 t o6 8 5 t h ea v e r a g er e c o v e r i e sf o rt h es p i k e df r u i ts a m p l e s r a n g e d f r o m 6 5 9 1 0 3 o ，a n d f o r t h es p i k e d v e g e t a b l e s f r o m6 2 8 t 0 1 1 1 5 。 t h em e t h o dw a s a p p l i e dt od e t e r m i n i n gv e g e t a b l e sa n df r u i ti nt o t a lo f 4 0s a m p l e s i tw a sc o n c l u d e dt h a tt h i sm e t h o dw a s r a p i d ，a c c u r a t e ，s e n s i t i v ea n dr e p e a t a b l ef o r t h ed e t e r m i n i n gt r a c ep e s t i c i d e si nv e g e t a b l es a m p l e sa n df r u i ts a m p l e s k e yw o r d s ：h p l c ，m u l t i r e s i d u a lp e s t c i d e s ，s o l i dp h a s ee x t r a c t i o n ( s p e ) ， v e g a t a b l e ，f r u i t ，o r g a n o p h o s p h o r u sp e s t i c i d e s ，p y r e t h r o i d sp e s t i c i d e s 4 果蔬中1 2 种农药的高效液相色谱测定方法研究 四川大学硕士学位论文( 2 0 0 5 果蔬中12 种农药的高效液相色谱测定方法研究 1 前言 蔬菜是我国重要的经济作物，目前年产量约4 亿吨，全国人均蔬菜年占 有量在3 1 2 公斤以上。近年农业产业结构的调整，带来蔬菜生产的迅猛发展。 但由于生产方式落后及农民素质和生产技能不适应蔬菜生产发展的要求，不 合理地使用农药，造成蔬菜农药残留问题比较严重。据农业部门统计，1 9 9 7 年全国农药使用量就已达1 2 0 万吨，不同程度遭受农药污染的农田面积达1 4 亿亩。其中，淮河流域农药平均用量超过0 5 k g 亩，以杀虫剂量为最大，杀 菌剂次之，除草剂和生长素较少。近两年来，由于农药残留引起的食物中毒 事件在食物中毒总数中占有很大的比例，且死亡率较高。据有关部门统计， 1 9 9 7 年夏季，江苏省发生食用农药残留超标的蔬菜而中毒的事件，见诸报道 的达7 0 多起；1 9 9 8 年共收到食物中毒报告5 5 起，其中，农药残留引起的1 4 起，占2 5 ；1 9 9 9 年l 9 月，共收到食物中毒报告7 8 起，其中农药残留引 起的3 1 起，占4 0 。2 0 0 0 年农业部农药检定所对5 0 个蔬菜品种，1 2 9 3 个样品的农药残留进行抽样检测，农药残留量超标率达3 0 0 , 6 ，残留浓度高者 为允许残留量的几倍甚至几十倍。 不仅如此，当前创汇蔬菜产业也面临新的挑战和考验。有些国家对我国 出口农产品制定了严格的环保技术标准，尤其是食品卫生、安全指标，对农 产品农药残留等有毒、有害物质控制的要求非常高。如2 0 0 2 年1 月起，日本 对从我国进口的1 8 种蔬菜实行逐批检验的临时性严格措施。欧盟、美国也以 我国蔬菜生产缺乏农药残留控制体系为由，严格控制进口量，我国蔬菜进入 国际市场面对着“绿色壁垒”。不久前，山东、福建等省出口日本的蔬菜相继 被检查出农药残留超标而退货0 1 。 有鉴于此，加强农药残留检测工作势在必行，只有及时对农副产品进行 果蔬中1 2 种农药的高效掖相色谱测定方法研究四川大学硕士学位论文( 2 0 0 5 ) 检测、及时公布检测结果，才能有效保证食品的安全和广大人民群众的生命 健康；才能增强农业自身竞争力、突破“绿色”壁垒，提高农产品出1 3 创汇 额。 随着农药品种不断增加，为了提高病虫害防治效果和抑制病虫害的抗药 性，常常交替使用不同种类的农药，或使用多类农药混配的复合农药，从而 弓 起蔬菜水果中的多农药残留。杀虫剂的混配主要集中于拟除虫菊酯类与有 机磷类、有机磷之间及氨基甲酸酯类与有机磷间的混配。杀虫混剂涉及的单 剂达9 0 种以上，其中有机磷约2 8 种，拟除虫菊酯类1 2 种。”。 滥用农药造成粮食和果蔬农药残留，可对人体健康产生不同程度的危害作 用。动物实验表明，拟除虫菊酯类农药对哺乳类动物中枢神经系统的锥体外 系、小脑、脊髓和周围神经产生毒性作用，有些品种还有“三致”作用。有 机磷农药进入机体后，即与胆碱酯酶结合，使胆碱酯酶失去活性，不能分解 乙酰胆碱，从而使组织中的乙酰胆碱大量蓄积，使一些以乙酰胆碱为传导介 质的神经处于过度兴奋状态，最后转入抑制和衰竭。有研究表明，二甲戊乐 灵能加强肝细胞代谢和甲状腺素排出“i 。美国环保署( e p a ) 将二甲戊乐灵 定为三级毒性类物质，是人类可疑致癌物。 6 山 o z = 王 ! 毫墨 pp 孽 嫂嬷h - i z 硒 。 弗 婶蝶措冥窭眯嘲 辨廿埘精鲁咖、r茛 k ，醛* 岫旺 恒鞯掣特佃智 。*椒制懈瑚on2 最 詈v o旨rl掣特叫廿5 d c _ h o 们廿 ed|8善羔u寸暴君isqd世暮芏皂廿薹每ln。io吕量j置盘葚j芑=豪j基8矗lno皇olu兰卜 一曲i q 盘 蟮越甚剐越哪卅求，幅霎姆，铽m求g差嚣n _ 【僻 卉oog戗秘掣扑书辱扑k臣 状奄军椒波露罄蛐罂鞯辩幄窖鱼垂嚣n_【*椿眯 u 呛 嚣世神犟舞，媒抖，摧，磔4廿 滞壬 ，撑嚣巾匠挈f 。蓓甚礞情骀导 蜘岳 冒醯越悻刍dn畦k掣 棚幕堂、0。_ 。o=k趟骈赳 孵嘏o。*k寒 ogh 0导i蛙o譬00蚺o_【畦mkooj列掣艚 k铎趟特=蛳碉茛棒单删，姐，爱 霉世神磔攥，霹眯 ，撑嚣*旺蝌 霉擎摊蝶檑，嚣撩，霹眯，撑嚣：匠膏 i丑嫌潜，旧k冥州撑，撑嚣，碱懒，鼹*巽* h ，雾晕糕转帐* 旺盎芒旨岂to 采 棚 盛鼷蜘k 峨譬叫样惜 与垂畦爿撩联10柱姑掣。铽狮露蛾解* 导 援巾畦 臻嚣忙裁瓶k斗缝龊，g巡譬缝岳柔瓣郴澈牵林廿*惮。掣心瓣壤蛊蟾邻怔壤、诎鞭岳峰去世，掣链晦惮。罹瓣甚忙赧艄k埭蠼旧薛，爨蝼，将*缝翟。*卅昂镶。装c髓琏肄譬壬赋椒，斌#谊，赋毽鎏弹1喜。最避难瓣廿*，i面目co最g越 琏瓣蛊导蔷挂j面毒2状导器般，ih基g柱哥将融毫芎譬最世骏臻譬岳磕暧豫惮。桨鞋葛怛鞋蚺k*瓣晦眭求米辎嗥肄悻，f， 掣越击f、删器謦程嚣 。琏求嗥单二l旺世嚣州纂景鹾鬟惮。涟隶嗥卜啊惺趟哥攥辫埘鬈撑议辫罟蜒辨掣铡犀埘导埘。幕建暴忙毒媳忡缝晦*瓣馔 p咎二。一蜒竣 再8 n 。po唾匿 p、0n0导吨苫 一。葛 p1葛。峨缝捌帐*艚i。o霉葛_【v蓉_【pv爨由pv竣 j 6 o f 驴艮气申9 手，、 0 0裾& + ，u、。z仁|占 啦。_n匕赛 oz一2=霜uou6iiu 8 2 8 l _ 飞ud 。嚆黾u 山c0窖：heu | ( u l 皇 1。目=ov 凝豫鼙璐 c _ 皇p g a 占v 程穰鼙黛口。一案 d眦4e- 瀣擦蟮睁 口一鼍告 u 基ip a q乱v 嘁长牛 目州h o i l o v 舔罐舟 一80n一议智q将_千隧扑kf臣 硬摩军5忙心簿期哪罂罄榛恒g垂搂熏n_【岳继眯 叫糕耀足霉捌枢窝龋幕，嚣眯，撑罂，嚣世球耜帐舞特警监巾匠蚪l 盎旨0000n蛊，l蹦 ：蚕；掣艚。詈一0ja廿山 olj暑dhh量。0 uu意目。dj(u口。j专d(=agmli焉专目一q口q厶目馒0 q a h叶皇0nno 嚣宝苗eo 寸q也啦：=卜 oiliz曩口 鬟vo一芍掣日 - o o硼il廿20山 一。_o一)i暑邑q刊u苫 = n j iq基矗$、_ 一。一_曹一 蠹-菪8=o) 等8 on霉罱=j出oh q禹ocig霉。一案蔷咖oohis弓写10口暑8苗普曩o丑口口菪ou o l i 卜 o可=v眯好波嚣咯龚a僻 一no。已议牲掣扑书器扑k n 密 靛窿军枉似嚣密脚罂甓裁挺盆糯谗川【壬缮眯 果蔬中1 2 种农药的高效液相色谱测定方法研究 四川大学硕士学位论文1 2 5 ) 4 小结 经典有机磷农残和拟除虫菊酯类农残的检测是分别用不同的分析方 法来实现的，方法繁琐、耗时长，不适合大量果蔬的农残检测。采用乙 酸乙酯一次同时提取果蔬中有机磷及拟除虫菊酯类农药，通过固相萃取 技术净化，建立高效液相色谱快速测定果蔬中5 种有机磷农残、1 种除草 剂及6 种拟除虫菊酯类农残的方法，最终克服了实际工作中检测这两类 农药需使用两套标准方法的不便。更重要的是该方法的步骤简单、试剂 用量少、检测周期短，与经典方法相比具有显著的优越性和实用价值。 本文建立的同时测定1 2 种农药的高效液相色谱分析法，具有以下特 点及创新点： 1 本方法采用乙腈一水作流动相进行梯度洗脱，在3 2 r a i n 内实现良好的 基线分离，可同时对1 2 种农药进行定量测定。方法简便、快速、准确， 满足微量有机磷农药和拟除虫菊酯类农药分析的要求。 2 文献中大多数方法都是采用乙腈、丙酮等水溶性溶剂提取样品中农残， 然后须荐经过一次或多次的非水溶性溶剂萃取。本文则采用非水溶性溶 剂乙酸乙酯作为提取溶剂，并同时加入无水硫酸钠除去样品中的水份， 让溶剂能更有效渗透到样品中提高萃取效率，而杂质可通过f l o r i s i l 固相 萃取小柱除去，从而减少操作步骤和溶剂用量。 3 本方法已成功地应用于果蔬样品中1 2 种农药的同时测定，并获得满 意结果。据文献检索，这在国内液相色谱的农残分析中尚未见报道。而 且对二甲戊乐灵和稻丰散的液相色谱测定，国内也未见报道。本法可用 于果蔬中农药残留的调查。 墨蔓主! ! 壁窒堑盟蔓垫鎏塑鱼堕型塞查婆堡壅 凹型查堂堡圭兰堡堡塞i ! ! 塑! 参考文献 l 王海东。国家监督，2 0 0 1 ：( 8 ) ：1 6 1 7 ，3 0 2 h t t p ：w w w l y y a g r i g o v c n n s i v n s i y a l l v i e w a s p ? n s b t = c a d f b 2 c b c 5 a 9 q 2 监2 1 笪竖曼2 竖壁三塑3 竖壁坦鱼竖旦2 竺垒堡生竖旦q 竖竖竖壁! 盐旦墨竖旦! 皇鱼2 3 杨向黎，林爱军，王军。山东农业大学学报：自然科学版，2 0 0 1 ：3 2 ( 4 ) ：5 4 4 5 4 8 4 j ho p p e n h e i m e r , h ls c h w a r t z , c nm a r i a s h e ta 1 e n d oc r i r t o tr e v ，1 9 8 7 ；8 ：2 8 8 3 0 8 5 m a a y u bs h a n s k g a r g , k mg a r g i n d i aj o u r n a lo f p h a r m a c o l o g y ，1 9 9 7 ；2 9 ：3 2 2 3 2 4 6 j i t k az r o s t l i k o v i , j a n ah a j l o v f i t o m 直薹c a j k a j o u r n a lo f c h r o m a t o g r a p h ya ，2 0 0 3 ； 1 0 1 9 ，1 7 3 1 8 6 7 f j a r r e b o l a , j l m a r t7 ：，n e zv i d a l m m a t e u - s f i n c h e z , e t c a n a l y t i c ac h i m i c aa c t a ， 2 0 0 3 ：4 8 4 ，1 6 7 1 8 0 8 刘永波，贾立华，牛淑妍。青岛科技大学学报。2 0 0 3 ；2 4 ( 5 ) ：4 9 1 4 9 5 9 安捷伦科技有限公司。环境化学，2 0 0 1 ；2 0 ( 5 ) ：5 1 7 5 2 0 1 0 d a r i n k a t a j n b a h e r ，l u c i j a z u p a n c i c k r a l j j o u r n a lo f c h r o m a t o g r a p h y a ，1 0 1 5 f 2 0 0 3 ) 1 8 5 1 9 8 11 胡小钟，储晓刚，余建新等。分析测试学报，2 0 0 3 ；2 2 ( 6 ) ：2 6 3 1 1 2 李云飞，彭云霞，张承聪。云南大学学报：自然科学版，2 0 0 4 ；2 6 ( b 0 7 ) ：1 7 6 1 8 0 1 3 张兵，周向阳胡祥娜等。食品科学，2 0 0 3 ：2 4 ( 8 ) ：1 2 4 1 2 6 14 c a r l og z a m b o n i n ，m a u r i z i oq u i n t o ，n i e o l e t t ad ev i e t r o ，f r a n c e s c op a l m i s a n o f o o dc h e m i s t r y8 6 ( 2 0 0 4 ) 2 6 9 2 7 4 1 5 e m a r i ak r i s t e n s o n ，e s t h e rg j h a v e r k a t e ，c e e sj s l o o t e n ，l o u r d e sr a m o s ，e t c j o u r n a lo f c h r o m a t o g r a p h ya ，9 1 7 ( 2 0 0 1 ) 2 7 7 2 8 6 1 6 杨春龙，王鸣华，陈道文等。农药，1 9 9 5 ：3 4 ( 6 ) ：2 1 1 7 朱鲁生幕卫，樊德方。农药学学报，1 9 9 9 ；1 ( 1 ) ：6 9 7 3 1 8 朱鲁生，樊德方，王军等。植物营养与肥料学报，2 0 0 2 ；8 ( 2 ) ：2 4 4 2 4 7 墨蔓竖苎壅垫垫塞塾塑塑垒壁翌塞立塑壅 婴坐查堂要圭兰垡兰皇鲤! 墨 1 9 王静，周国春。分析化学。1 9 9 8 ，2 6 ( 1 ) ：3 8 - - 4 9 2 0 c h r i s t e rj a n s s o f l ，t u i j ap i h l s t r 6 m ，b e n g t - g 6 r a nt d s t e r d a h l ，e t c j o u r n a lo f c h r o m a t o g r a p h ya ，1 0 2 3 ( 2 0 0 4 ) 9 3 1 0 4 2 1 h a n sg j v i o l ，r u u dc j v a i ld a m ，o d i l em s t e i j g e r j o u r n a lo f c h r o m a t o g r a p h ya 1 0 1 5 ( 2 0 0 3 ) 11 9 1 2 7 2 2e l a c a s s i e ，m 一f d r e y f u s s ，j l d a g u e t ，e r e j o u r n a lo f c h r o m a t o g r a p h ya ，8 3 0 ( 1 9 9 9 ) 13 5 1 4 3 2 3 k o i c h il , y o s h i h i r oy ，t s t m e h i s am ，h i r o y u k in a n a l y s t 2 0 0 0 ，1 2 5 ：t 9 5 9 - - - 1 9 6 1 2 4 洪蔚萍，陈枝华，杨忠强。色谱，2 0 0 4 ；2 2 ( 3 ) ：2 8 9 2 5 j i t k az r o s f l i k o v a ，j a n ah a j l o v f i , t d m 鳃c a j k a j o u m a lo f c h r o m a t o g r a p h ya ，2 0 0 3 ： 1 0 1 9 ，1 7 3 1 8 6 2 6 c h r i s t e rj a n s s o n ，t u b ap i h l s t r 6 m ，b e n g t g 6 r a no s t e r d a h l ，e t c j o u r n a lo f c h r o m a t o g r a p h ya ，2 0 0 4 ：1 0 2 3 ，9 3 1 0 4 2 7 h a n sg j m o l ，r u u dc j v a nd a m ，o d i l em s t e i j g e r j o u r n a lo f c h r o m a t o g r a p h y a ，2 0 0 3 ：1 0 1 5 ，11 9 1 2 7 2 8 黄玉兰，马海燕，吴平谷。中国公共卫生，1 9 9 9 ；1 5 ( 9 ) ：8 1 5 2 9 周飞，卢娜。监督与选择，2 0 0 3 ；( 6 ) ：4 2 4 3 3 0 f j a r r e b o l a , j l m a r t i ，n e zv i d a l ，m m a t e u s 矗n e h e z ，e r e a n a l y t l c ac h i m i c a a c t a ，2 0 0 3 ：4 8 4 ，1 6 7 1 8 0 3 1 a c o l u m 6 ，s c f i r d e n a s ，m g a l l e g o ，e t c a n a l y t i c a c h i m i c a a c t a ，2 0 0 1 ；4 3 6 1 5 3 1 6 2 3 2 陶传江郑姗姗，刘伟婷。农药科学与管理，2 0 0 1 ；2 2 ( 2 ) ：1 8 2 0 3 3 王龙根。安徽农业科学，2 0 0 4 ；3 2 ( 1 ) ：9 1 ，1 0 8 3 4 h t t p ：w w w a g r i s h c n s h n j s h o w i n f o s h o w i n f o a s p x t i n f o i d = 2 9 3 5 & s i t e i d 5 】& c a t e g o r y n u r n = 0 5 0 2 3 5 h t t p ：w w w a g r i s h c n s h n j s h o w i n f o s h o w i n f o a s p x ? i n f o i d = 1 6 8 5 & s i t e i d = 1 & c a t e g o r y n u m = 0 5 0 2 3 6 h t t p ：w w w a g r i s h c r d s h n j s h o w i n f o s h o w i n f o a s p x ? i n f o i d = 1 6 8 7 & s i t e i d 2 1 & c a t e g o r y n u m = 0 5 0 2 3 7 h t t p ：# s t o c k 2 l c n c o m h t m l 1 8 2 1 1 5 0 7 5 3 0 h t m l 果蔬中1 2 种农药豹高效液相色谱铡定方法研究四川大学硬士学位论文( 2 5 ) 致谢 衷心感谢我的导师孙成均教授。在这三年期间，孙老师不仅在学业 上给予我谆谆教导和启发，还在生活中给予我体贴入微的关怀和无私帮 助，他强烈的责任心和敬业精神，严谨的科研态度和治学作风，公正平 实的待人之道，以及理解关爱学生的言行，是我终生学习的榜样。我的 课题设计、实施过程都离不开孙老师的悉心指导和帮助，使我能克服种 种困难，顺利完成课题，在此，向孙老师表示敬意和感激! 感谢黎源倩教授和张克荣教授给予的热心指导和帮助。公共卫生学 院研究生科张晓玲老师三年来在我学习和生活中给予了诸多关怀和帮 助；教研室的严浩英副教授和其他老师及研究生为本课题的完成给予了 大力支持和热心帮助，向他们表示衷心的感激和诚挚的谢意! 在课题完成过程中，还得到了成都市疾控中心杨元老师和欧阳华学 师兄的无偿赞助和热心帮助，在此，向他们表示深深的谢意! 最后，感谢我的家人，是他们精神上和经济上的支持，使我顺利完 成学业! 果蔬中1 2 种农药的高效涟相色谱测定方法研究四川大学硕士学位论文( 2 0 0 5 ) 本人研究生在读期间情况简介 1 获奖情况 2 0 0 4 1 1 四川大学优秀硕士毕业生 2 0 0 2 2 0 0 3 四川大学优秀硕士研究生一等奖学金 2 发表论文情况 3 声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外， 论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四 川大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的 同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢 意。 本学位论文成果是本人在四川大学读书期间在导师指导下取得的， 论文成果归四川大学所有，特此声明。 果蔬中l 2 种农药的高效液相色谱测定方法研究 四川大学硕士学位论文( 2 0 0 塑 综述 果蔬中多农药残留及其分析方法 李永新综述 孙成均审校 1 、前言 蔬菜与人们的日常生活密切相关，随着生活水平的提高，人们不但 关心蔬菜的营养成分，而且更加重视其可能受到的各种污染情况。1 9 8 0 年代以来，温室、大棚等蔬菜种植面积迅速增加，重茬、连作导致蔬菜 病虫害加重，造成每年总产量损失2 0 以上。各地在防治蔬菜病虫害中， 大量使用化学农药，长江流域一般每年每亩( 6 6 7 平方米) 使用农药2 3 k g ，多的达5 k g 以上；北方保护地蔬菜用量更大。据有关调查，北京郊 区菜地用量每6 6 7 平方米9 k g 以上。多年来由于大量和连续使用化学农 药，使得蔬菜病虫害对化学农药产生了普遍的抗药性，菜农只能加大农 药的使用量，由此，农药使用和依赖程度呈现出恶性循环状态。农药的 大量使用，使得蔬菜中农药残留量超标问题突出。 2 0 0 0 年5 月份农业部农药检定所组织北京、上海、重庆、山东和浙江 等5 省市的农药检定所，对5 0 个蔬菜品种，1 2 9 3 个样品的农药残留进行 抽样检测，农药残留量超标率达3 0 ，残留浓度高者为允许残留量的几倍 甚至几十倍。蔬菜中农药残留量的严重超标，导致中毒事故时有发生。 1 9 9 1 年山东省博* 县湖滨乡“1 6 0 5 ”污染韭菜，造成1 2 0 人中毒；1 9 9 7 年夏季，江苏省发生食用农药残留超标的蔬菜而中毒的事件，见诸报道 的达7 0 多起；1 9 9 8 年共收到食物中毒报告5 5 起，其中，农药残留引起 的1 4 起，占2 5 ；1 9 9 9 年1 9 月，共收到食物中毒报告7 8 起，其中 农药残留引起的3 1 起，占4 0 。 不仅如此，当前创汇蔬菜产业也面临新的挑战和考验。有些国家对 果蔬中1 2 种农药的高效液相色谱测定方法研究四川大学硕士学位论文( 2 0 0 5 ) 我国出口农产品制定了严格的环保技术标准，尤其是食品卫生、安全指 标，对农产品农药残留等有毒、有害物质控制的要求非常高。如2 0 0 2 年 1 月起，日本对从我国进口的1 8 种蔬菜实行逐批检验的临时性严格措施。 欧盟、美国也以我国蔬菜生产缺乏农药残留控制体系为由，严格控制进 1 ：3 量，我国蔬菜进入国际市场面对着“绿色壁垒”。近年来，我国各地农 产品出口受阻于“绿色壁垒”的警钟频频响起。不久前，山东、福建等 省出口日本的蔬菜相继被检查出农药残留超标而退货。1 。 随着农药品不断增加，为了提高病虫害防治效果和抑制病虫害的抗 药性，常常交替使用不同种类的农药，或使用多类农药混配的复合农药， 从而引起蔬菜水果中的多农药残留。杀虫荆的混配主要集中于拟除虫菊 酯类与有机磷类、有机磷之间及氨基甲酸酯类与有机磷间的混g d t 3 4 1 。杀 虫混剂涉及的单剂达9 0 种以上，其中有机磷农药约2 8 种，拟除虫菊酯 类农药1 2 种吼 拟除虫菊酯杀虫剂是在仿造天然除虫菊花有效成分及其化学结构的 基础上发展起来的高效、安全新型杀虫剂，是替代高毒农药的理想产品【6 1 。 拟除虫菊酯类化合物中第一个商品化的品种是1 9 4 9 年进入市场的丙烯菊 酯。7 0 年代初开始在农业上得以推广应用，8 0 年代初拟除虫菊酯蓬勃发 展，新品种不断涌现。目前全世界销售量最大的品种有氯氟菊酯、氰戊 菊酯、溴氰菊酯和氯氟氰菊酯等。 有机磷杀虫剂出现于2 0 世纪4 0 年代初。由于不同的有机磷品种效 能方面各具特色，因此直到现在许多有机磷杀虫剂仍然是重要的正在使 用的农药品种，如氧化乐果、辛硫磷、稻丰散、二嗪农等。其中二嗪磷、 稻丰散是有机磷杀虫剂的两个新品种。国外企业早于1 9 8 0 年代在我国正 式登记。近几年来，国内企业涉足登记生产，二嗪磷已形成多企业生产 原药，稻丰散原药生产正在起步“1 。 聚蔬中1 2 种农药的高教液相色谱测定方法研究 1 3 1 1r l 大学硕士学位论文( 2 0 0 5 ) 近年来除草剂也得到了极快的发展，出现了多种高活性、对作物无 害、持效期适中及易于降解的品种。二甲戊乐灵于1 9 7 2 年由美国氰胺公 司首先开发，是一种选择性苗前二硝基胺类除草剂【8 1 。二甲戊乐灵在美国、 欧洲、日本、中国台湾、以色列、印度、澳大利亚等许多国家和地区早 已大面积推广使用。德国巴斯夫股份有限公司于1 9 9 1 年在我国正式登记 施田补3 3 - 孚l 油，目前在国内，二甲戊乐灵主要用于蔬菜田、棉花、烟 草、花生除草及作为烟草抑芽剂使用。 农药残留对人体健康带来可能的危害。动物实验表明，拟除虫菊酯 类农药对哺乳类动物中枢神经系统的锥体外系、小脑、脊髓和周围神经 产生毒性作用，有些品种还有“三致”作用。有机磷农药进入机体后， 与胆碱酯酶结合，使胆碱酯酶失去活性，不能分解乙酰胆碱，从而使组 织中的乙酰胆碱大量蓄积，使一些以乙酰胆碱为传导介质的神经处于过 度兴奋状态，最后转入抑制和衰竭。有研究表明，二甲戊乐灵能加强肝 细胞代谢和甲状腺素排出【9 1 0 。美国环保署( e p a ) 将二甲戊乐灵定为三 级毒性类物质和人类可疑致癌物。 有鉴于此，加强农药残留检测工作势在必行，只有及时对农副产品 进行检测、对农残超标的农副产品采取有效措施，才能保证食品安全和广 大人民群众的生命健康。 蔬菜水果中的多农药残留使传统的单一农药残留测试方法已不能适 应新的监测要求。国际上1 9 7 0 年代开始研究多农药残留测试方法，国内 则在1 9 8 0 年代后期才起步。多农药残留常用气相色谱和高效液相色谱法 检测。近年来液相色谱一质谱联用法也越来越多的应用于多农药残留的 测定。本文将对果蔬中多类农药的性质、样品处理、近年来常用的分析 测定方法等作一综述。 2 、果蔬中农残提取和净化方法 果蔬中1 2 种农药的高效液相色谱测定方法研究 四川大学硕士学位论文( 2 0 0 s ) 2 1 样品提取方法 在果蔬样品中，待测成分的含量往往较低而共存的干扰物质常常较 多，因此，在测定前，首先应对待测成分进行提取、净化和浓缩，才能 进行分析。样品预处理是为了达到以下目的；浓缩被测组分，提高测定 的精密度和准确度；消除共存组分对测定的干扰；除去样品中对分析仪 器有害的组分，延长仪器的使用寿命。文献已详细论述的提取溶剂种类 较多，常用的提取溶剂有丙酮、正己烷、二氯甲烷、甲醇、乙腈、石油 醚、乙酸乙酯、氯仿和乙酸等。根据分析目的和样品基体情况，可以单 独使用一种溶剂或两种溶剂按一定比例混合提取。早期的液一液萃取法先 是用乙腈提取，1 9 8 5 年以后，逐步用丙酮“5 ”2 “”“、乙酸乙酯”“ ”1 ”等代替了乙腈，主要是因为乙腈有剧毒，而且价格昂贵，而丙酮、乙 酸乙酯具有低毒、价廉的优点，并且它们既能萃取极性物质，也能萃取 非极性物质。同时剧毒的二氯甲烷也逐步被正己烷“”“等取代。可根据 待测农药的性质、样品种类和实验室条件选择适当的提取方法。常用的 方法有以下几种。 2 1 1 漂洗法 这是农药提取最