3_唾液淀粉酶活性的观察ppt课件.ppt

实验三唾液淀粉酶活性的观察,动物医学院动物生化教研室,1,掌握酶的催化活性，酶的高效性和特异性了解各种因素（如温度、pH及一些化学物质）对酶活性的影响唾液淀粉酶的制备和活性观察,一、实验目的,2,二、实验原理,酶是生物体内具有催化功能的生物大分子，也叫生物催化剂。酶活性:酶的催化能力,用催化化学反应的速度表示酶活性的测定方法：1）定底物2）定时间影响酶活性的因素是多方面的，如温度、pH,激活剂和抑制剂等都会影响酶的催化活性。,3,二、实验原理,pH值的影响:能使酶活性达到最高时的pH值，称为该酶的最适pH。温度的影响:在一定温度范围内，随着温度的升高，酶促反应速度增加，直至达到最大值。在一定条件下，能使酶活性达到最高的温度即酶的最适温度。激活剂和抑制剂的影响:能增高酶活性的物质即称为酶的激活剂，能降低酶活性却又不使酶变性的物质叫酶的抑制剂。,4,本实验以淀粉为底物,淀粉酶作用下得到各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等水解产物。用碘液检查酶促淀粉的水解程度，来说明温度、pH及化学物质对酶活力的影响。淀粉酶淀粉酶淀粉糊精麦芽糖+少量葡萄糖加碘后；（兰色）（紫红色、暗褐色或红色等）（棕黄色，碘本身颜色）,二、实验原理,5,影响酶活性的因素1）温度2）pH3）激活剂和抑制剂酶的特性（专一性）还原糖和斑氏（Benedict）试剂的反应原理C6H12O6+2Cu(OH)2,C5H11O5.COOH+Cu2O,+2H2O,OH-,加热,实验原理,6,三、试剂及器材,1.试剂（1）0.5%(w/v)淀粉溶液（2）稀碘溶液（3）不同pH缓冲液(pH5.0、6.8、8.0)（4）1%(w/v)NaCl溶液（5）1%(w/v)CuSO4溶液2.器材比色板、水浴锅、刻度吸管及滴管,7,四、操作步骤,1.温度对酶活力的影响取3支试管，编号后按下表操作:,单位：mL,8,在干净的比色板上，于各孔穴中分别滴加2滴碘液。每隔1min从第2支试管中取反应液1滴，与比色板孔穴中的碘液混合，观察颜色的变化。待第2支试管中的反应液与比色板孔穴中的碘液混合后颜色呈棕色时，取出试管，并将在沸水浴中处理的试管用冷水冷却，然后向各试管中滴加碘液1-3滴。摇匀后观察并记录各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度，说明温度对酶活性的影响。,9,2.pH值对酶活力的影响取3支试管，按下表编号后进行实验。,四、操作步骤,单位：mL,10,摇匀后，将各管置于37水浴中处理。（1）每隔1min从pH6.8的试管中取出1滴反应液滴于预先滴加稀碘液的白瓷板上，观察其颜色变化。（2）待颜色呈棕色时，向各管中加稀碘液1-3滴。观察各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度，解释pH对酶活性的影响。,11,3.酶反应的特异性取2支试管，按下表编号后进行实验。,四、操作步骤,单位：mL,12,将各管摇匀后，一起放入37水浴中保温10min。取出试管，分别加入斑氏试剂1mL，混匀。将各管置于沸水浴中煮沸2-5min。观察并解释结果。,13,4.激活剂与抑制剂对酶活力的影响取3支试管，按下表编