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PCR测定临床应用及结果临床意义,北京大学人民医院张正100044,概述临床PCR检测三条件SDA批准使用的试剂盒国家批准符合要求的实验室经行政部门同意并培训后持证上岗,关于结核杆菌等5项检测的具体应用,结核分枝杆菌(TB),靶序列来源:a.单抗检出的TB抗原旦白编码基因b.TB特异性核酸片段克隆c.插入序列,实验设计特点,举例65KD,165bp;MPB64,240BP;IS6110,123bp;IS986,245bp;16sDNA,584bp.,注意事项标本处理：痰液化，抑制物去除试剂质控及灵敏度,临床评价结核的PCR临床主要应用a.结核与其他分枝杆菌区分b.结核耐药基因c.对含菌量低的标本的分离d.为临床可疑者捕捉信息,PCR方法与痰涂片及TB培养的比较应做比对研究,临床评价,沙眼衣原体(Ct),实验设计特点靶及引物选择外膜蛋白基因(MOMP-OMPI)7.5kb质粒隐蔽性基因质粒拷贝16srRNA基因,注意事项标本取材是关键,临床评价细胞培养McCoy.Hela-229金标准ELA法PCR法.专家希望此法为新金标,HBV-DNA,.实验设计特点S及C混合引物定量用治疗监测104,106,临床评价一般临床靠免疫标志但无法明确时可测拉米呋定及干扰素治疗监测新问题研究,HCV-RNA,实验室设计特点需扩增二次低温启动UDG系统-RNA不稳定性,注意事项防止RNase污染杜绝溶血,临床评估定性用于诊断(只有抗HCV无法决定病毒存在状况）定量用于治疗监测,HLA,方法:免疫学分子生物学：PCRSSCPRFLP基因芯片I类(A,B,C)与疾病发生频率有关II类(DR,DQ,DP)等移植配型,DR为例设计10条特异性引物:DR1-DR10设计2条组特异性引物:3568,DRB1选择其中某些组合成上,下游引物据bp数推算等位基因,局限性:DR6用排它法有6种表型(DR3/DR3,DR8/DR6等)不能区分,临床评价中共同问题,假阳:残余模板的污染其它假阴:标本处理不当其它,假阳性与假阴性,不能单向强调PCR的优势和检出率应与传统方法比对,合理判断,阳性率与“金标准”,临床实践是检验实验
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