（动物学专业论文）粘虫免疫血淋巴中抗菌物质的研究.pdf

粘虫免疫血淋巴中抗菌物质的研究摘要 粘虫免疫血淋巴中抗菌物质的研究 摘要 物理或化学刺激均能诱导粘虫( 一种鳞翅目昆虫) 的幼虫产生抗菌物质。本 文主要对粘虫血淋巴中的抗菌肽、溶菌酶及抗菌蛋白进行诱导、抑菌活性分析、 分离纯化、理化性质分析，并在此基础上探讨昆虫体内抗菌物质的产生机理及 其对实践的指导意义。 ， 用针刺、注射大肠杆菌、注射生理盐水及注射白僵菌分生孢子的方式可 f 以谤导粘虫体内产生抗菌物质，使其抗菌活性较未经处理前升高。每种诱导方 式都有一个诱导期并持续一定时间后才会自行消失。诱导前向粘虫体内注射放 线菌素d 会抑制抗菌物质的合成；而在诱导后4 小时后注射放线菌素d 则不会 影响抗菌物质的合成。 通过用比浊法、菌落计数法和常规抑菌圈法对四种免疫血淋巴进行溶菌及 杀菌活性测定( 以大肠杆菌e s c h e r i c h i ac o l i 及溶壁微球菌鲋c r d c d c c 姻 v s o d e i k t i c u s 为指示菌) ，证明在诱导前后粘虫血淋巴中的溶菌酶及抗菌肽 蛋白的水平均有较大幅度的提高。实验还表明，在四种免疫血淋巴中，以针刺 9 6 小时的免疫血淋巴活性最高。常规抑菌圈实验证明免疫血淋巴对某些革兰 氏阴性及阳性细菌有一定程度的抑制作用( 如大肠杆菌e s c h e r i c h i ac o l i ， 枯草芽孢杆菌b a c i l l u ss u b t i l i s ，金黄色葡萄球菌s t a p h l o c o c c u sa u r e u s ) ， 而对另外一些作用不明显或基本无作用。 酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳( p a g e ) 显示，在针刺9 6 小时的免疫血淋巴中 有三种抗菌物质产生或含量增高，分别称为x l 、x 2 、x 3 。进一步经阳离子交 换琼脂糖分离纯化、溶菌活性测定及s d s 聚丙烯酰胺凝胶电泳，可以初步确 定x 1 是溶菌酶，分子量约为1 4 ，0 0 0 d a ；x 2 为抗菌肽，分子量约为8 ，0 0 0 d a ； x 3 为抗菌肽，分子量约为3 ，5 0 0 d a 。p 关键词。粘叁免疫乒弈西抗菌4 旁质抗菌肽蛋白 溶言 大肠痒溶壁微濠备 放线菌素d 粘虫免疫血淋巴中抗菌物质的研究 s t u d i e so na n t i b a c t e r i a ls u b s t a n c e s i nt h el m m u n e h e m o l y m p h o fm y t h i m n a s e p a r a t a a b s t r a e t t h el a r v a eo fm y t h i m n as e p a r a t a ( o n es p e c i e so fl e p i d o p t e r a ) c a nb ei n d u c e d t op r o d u c ea n t i b a c t e r i a ls u b s t a n c e sb yp h y s i c a la n dc h e m i c a ls t i m u l i t h ep a p e r f o c u s e do n s t u d y i n g t h ei n d u c t i o no fa n t i b a c t e r i a l p e p t i d e s ，l y s o z y m e a n d a n t i b a c t e r i a l p r o t e i n s i nt h e h e m o l y m p h o fm y t h i m n as e p a r a t a ，a s s a yo f b a c t e r i o l y t i ca c t i v i t y , p u r i f i c a t i o na n da s s a yo fp h y s i c a la n dc h e m i c a lc h a r a c t e r s i t a l s op r o b e di n t ot h em e c h a n i s m so ft h ep r o d u c t i o no fa n t i b a c t e r i a ls u b s t a n c e sa n d t h ei n s t r u c t i v es i g n i f i c a n c ei ns c i e n t i f i cp r a c t i c e t h ei n s e c tc a l lb ei n d u c e dt op r o d u c ea n t i b a c t e r i a ls u b s t a n c e sb yt h ei n j u r yw i t h ah y p o d e r m i cn e e d l e ，t h ei n j e c t i o no f e c o l i ，t h ei n j e c t i o no f p h y s i o l o g i c a ls a l i n ea n d t h ei n j e c t i o no ft h ec o n i d i o s p o r e so fb e a u v e r i ab a s s i a n a e a c hk i n do ft r e a t m e n t a b o v ec o u l di n c r e a s et h eb a c t e r i o l y t i ca c t i v i t yo ft h eb e m o l y m p hc o m p a r i n gt ot h e s i t u a t i o no fu n t r e a t m e n t , a n dw o u l dd i s a p p e a ra f t e rl a s t i n gac e r t a i nt i m e p r e t r e a t m e n to fi n s e c tw i t ha c t i n o m y s i ndb l o c k e dt h es y n t h e t i co fa n t i b a c t e r i a l s u b s t a n c e s ；h o w e v e r , i n j c o t i n ga c t i n o m y s i nd 4h o u r sa f t e rt h ei m m u n i z a t i o nh a s1 1 0 e f f e c to nt h es y n t h e t i co f a n t i b a c t e r i a ls u b s t a n c e s t h ed e t e r m i n a t i o no fb a c t e r i o l y t i ca c t i v i t ya n dt h ek i l l i n ga s s a y ( e s c h e r i c h i a c o l ia n dm i c r o c o c c u s 如o d e i k t i c u sw e r eu s e d 鹅i n d i c a t i v eb a c t e r i a ) b yu s i n gt h e m e t h o do fn e p h o l o m e t r y , c o u n t i n go fc o l o n i e sa n di n h i b i t i o nz o n ea s s a yp r o v e dt h a t t h el e v e ro fl y s o z y m ea n da n t i b a c t e r i a lp e p t i d e s p r o t e i n sg r e a t l yi n c r e a s e d t h e e x p e f i m e ma l s op r o v e dt h a tt h eh e m o l y m p hc o l l e c t e d9 6h o u r sa f t e rt h ei n j u r yw i t h an e e d l eh a st h eh i g h e s ta n t i b a c t e r i a la c t i v i t y i nt h e f o u rk i n d so fi m m u n e h e m o l y m p h i n h i b i t i o nz o n ea s s a yp r o v e d t h a ti m m u n eh e m o l y m p hc a ni n h i b i ts o m e k i n do fb o t hg r a m n e g a t i v ea n dg r a m - p o s i t i v eb a c t e r i at os o m ee x t e n t ( f o re x a m p l e ， 苎望塑塑塑主垫堕塑堡竺竺窒 ! 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