（微生物学专业论文）三种虫生真菌比较生态学研究.pdf

摘要 本论文对于球孢白僵菌( b e a u v e r i ab a s s i a n a ，以下简称b b ) 、金龟子绿僵菌 ( m e t a r h i z i u ma n i s o p l i a e ，以下简称m a ) 和粉棒束孢( i s a r i a f a r i n o s u s ，以下简称i f ) 等三种虫生真菌的各两个菌株进行了室内和室外比较生态学的研究。研究的内容包括 不同温度、湿度以及不同紫外波长对它们孢子活力的影响，以及这些真菌抗土壤拮抗 作用；此外，还研究了球孢白僵菌孢子粉和无纺布这两种菌剂在森林中的宿存情况以 及不同宿存期菌株毒力的变化情况。 在研究温度对虫生真菌孢子活力影响的试验中，利用平板测萌发率法，以孢子萌 发率为指标，比较不同温度对六株虫生真菌的影响，最终得出如下的结果：适合球孢 白僵菌的温度范围是2 2 2 8 ，而适合金龟子绿僵菌的范围是2 5 2 8 ，而适合 粉棒束孢的温度区间是1 8 c 2 2 。而通过比较半数萌发时间( g t 5 0 ) ，得出三株菌 株在不同温度下总的萌发力比较为b b 8 9 7 b b 2 0 2 m a 4 5 m a 8 3 i f l 0 2 i f l 0 4 。 通过对4 8 h 不同虫生真菌在不同温度下4 8 h 萌发率的比较发现，所有真菌的萌发 率皆随湿度的减少而下降；在湿度为9 9 时，粉棒束孢的萌发率明显低于球孢白僵 菌和金龟子绿僵菌；而在湿度为7 5 时，萌发率接近甚至高于这两种真菌。这表明， 粉棒束孢的抗旱能力比球孢白僵菌和金龟子绿僵菌强。 通过用控制不同紫外线的照射条件所测得的三种真菌的各五个菌株的孢子萌发 率的结果发现，在u v b 的波长范围内，其对孢子的杀伤力随着波长的增加而降低。 而通过对所得结果进行聚类分析，发现所有的菌株对于紫外的敏感性可以分为两类： 金龟子绿僵菌的五个菌株分为一类，它们对u v b 非常敏感，在长时间照射下容易失 活；而其他两种真菌的1 0 个菌株对u v b 照射的敏感性稍差，但种间差异不明显。 土壤拮抗性试验的结果表明，在灭菌的处理中，各个菌株的孢子萌发率均随着土 壤浓度的增加而增加，而在未灭菌的土壤中，各个菌株的孢子萌发率均随着土壤浓度 的增加而减少。在浓度为0 0 2 5 9 m l 的这个水平上，虫生真菌对土壤微生物的拮抗能 力大小为i f l 0 4 i f l 0 2 m a 4 5 b b 8 9 7 m a 8 3 b b 2 0 2 ；在0 0 5 9 m l 的浓度水平上， 拮抗能力大小为i f l 0 4 i f l 0 2 m a 4 5 m a 8 3 b b 8 9 7 b b 2 0 2 ；而在0 0 7 5 9 m l 的浓 度水平上，拮抗能力大小为i f l 0 2 i f l 0 4 m a 4 5 b b 8 9 7 m a 4 5 m a 8 3 i n 0 2 i f l 0 4 t h ec o m p a r i s o no nt h eg e r m i n a t i o no ft h ef u n g iu n d e rd i f f e r e n tt e m p e r a t u r es h o w e d t h a tt h eg e r m i n a t i o no fa l lt h ei s o l a t e sd e c r e a s e da sh u m i d i t yd e c l i n e d ；t h eg e r m i n a t i o no f i fw a sl o w e rt h a tt h o s eo fb ba n dm aa t9 9 r h ，w h i l em a tw a sc l o s et oo re v e nh i g h e r t h a nt h o s eo ft h et w of u n g ia t7 5 ，s u g g e s t i n gt h a ti fw a sm o r et o l e r a n tt od r o u g h tt h a nb b a n d m 乱 1 1 1 er e s u l to fag e r m i n a t i o nt e s to nt h ec o n i d i ao f5i s o l a t e so fe a c hf u n g u si r r a d i a t e d w i t hd i f f e r e n tu vr e v e a l e dt h a tt h ed a m a g eo fu v bd e c l i n e da sw a v el e n g t hi n c r e a s e d w i t h i ni t sw a v el e n g t hr a n g e ac l u s t e r i n ga n a l y s i ss h o w e dt h a tt h es u s c e p t i b i l i t yt o 叭 w a sc a t e g o r i z e di n t ot w ot y p e s ：a l l5i s o l a t e so fm aw e r ev e r ys e n s i t i v ea n dg o te a s i l y d e a c t i v a t e d ，w h i l et h e10i s o l a t e so fb ba n di fw e r el e s ss e n s i t i v e , w i t hn o to b v i o u s i n t e r s p e c i e sd i f f e r e n c e i nt h es o i la n t a g o n i s mt e s t ，c o n i d i u mg e r m i n a t i o no fa l lt h ei s o l a t e sr o s ew h e nt h e c o n c e n t r a t i o no fs t e r i l i z e ds o i lw a si n c r e a s e da n dd e c l i n e dw h e nt h ec o n c e n t r a t i o no fn o n s t e r i l i z e ds o i li n c r e a s e d t h ea n t a g o n i s ma b i l i t yo ft h e6i s o l a t e st os o i lm i c r o b e sw a si nt h e f o l l o w i n go r d e r ：i f l 0 4 i f l 0 2 m a 4 5 b b 8 9 7 m a 8 3 b b 2 0 2a t t h ec o n c e n t r a t i o no f 0 0 2 5 9 m l ，；i nt h ef o l l o w i n go r d e r ：i f l 0 4 i f l 0 2 m a 4 5 m a 8 3 b b 8 9 7 b b 2 0 2a t o 0 5 9 m l ；a n di f l 0 2 i f l 0 4 m “5 b b 8 9 7 m a 8 3 。对于 粉棒束孢，其g t 5 0 在2 2 。c 时最小，其中i f l 0 4 i f l 0 2 。以上结果可以证明，相对于 球孢白僵菌和金龟子绿僵菌，此实验中的粉棒束孢确实是低温型真菌。在野外防治策 略上也应该注意其释放季节的选择，这样可以提高其放菌成功率。 而从图7 可以看出b b 2 0 2 和b b 8 9 7 在2 5 ( 2 时，g t 5 0 均在最低值，而m a 8 3 和 m a 4 5 也是在2 5 时，g t 5 0 最小，孢子萌发最快。而与之形成对比的是i f l 0 2 和i f l 0 4 在2 2 。c 时g t s o 达到最低。因此，我们可以发现适合球孢白僵菌孢子萌发的温差范围 是2 2 c 2 8 ( 2 ，适合金龟子绿僵菌的范围是2 5 2 8 ，而适合粉棒束孢的温度区间是 18 c 2 2 。c 。虽然在2 2 金龟子绿僵菌的g t 5 0 均小于1 2 h ，低于粉棒束孢的g t 5 0 ， 可是针对于金龟子绿僵菌来说，其在2 8 * ( 2 和2 5 明显小于2 2 。在2 8 一1 8 这四 个区间中，粉棒束孢由于种间的差异影响，其萌发中时除了在2 2 时近乎等于金龟 子绿僵菌以外，其他时刻的萌发中时均长于球孢白僵菌和金龟子绿僵菌，因此可以证 明其最适萌发温度为2 2 。而球孢白僵菌适合的温度域相对较宽，且萌发速度为三 个种中最快的。金龟子绿僵菌适合的温度域相对较窄，而其萌发力是在三种菌株中居 中，所以，6 株菌株在不同温度下总的萌发力比较为b b 8 9 7 b b 2 0 2 m a 4 5 m a 8 3 i f l 0 2 i f l0 4 。 4 1 2 不同湿度对六株虫生真菌萌发率的影响 4 1 2 1 六株不同虫生真菌在2 5 ( 2 时在不同湿度梯度下孢子萌发率比较 虫生真菌的孢子萌发受到湿度的影响，其中湿度对不同的虫生真菌有不同的影 响，在2 5 测得的在四个不同湿度梯度下的萌发率数值如表9 ： 表9 下六株虫生真菌孢子在2 5 ( 2 不同湿度下2 4 小时萌发率 ：! 垒垒! 竺21 ：塾竺g ! ! 巴! 竺兰! i 2 坚! 璺! 兰12 11 1 三! ! ! 苎i 旦! 垡! 翌1 2 巴2 9 ! 翌2 坚! ! 变翌g i 竺旦璺! 璺! ! ! 竺! 竺翌! 塾竺巴! 璺i 垃! 翌三! 塾 菌株9 9 9585 7 5 从表9 可以看不同菌种间的差异显著，而同种不同株的差异相对显著程度较小。 球孢白僵菌和金龟子绿僵菌的显著性差异比较小，而粉棒束孢和其他两株间的差异显 著性比较大，证实了粉棒束孢相对于其他两种虫生真菌来说，其萌发速度相对较慢。 新复极差检验结果表明，在9 9 的湿度下，两株金龟子绿僵菌与两株球孢白僵 菌间的孢子萌发率差异不显著，萌发率均可以达到9 5 以上。而两株粉棒束孢的孢 子萌发率与其他四株差异极其显著，其萌发率在7 5 左右，其种间孢子萌发率差异 不显著。在9 5 的湿度下，同种间的菌株差异均不显著，而粉棒束孢与其他四株菌 株的孢子萌发率差异显著，b b 2 0 2 和m a 4 5 间孢子萌发率差异也不显著。在8 5 的湿 度下，各株虫生真菌的孢子萌发率均有明显的降低，球孢白僵菌的孢子萌发率维持在 2 0 的水平，金龟子绿僵菌孢子萌发率的水平略高于球孢白僵菌，这四株菌株的萌发 率差异不显著；而粉棒束孢的孢子萌发率与其他四株相比差异极显著，而种间差异不 显著，其萌发率维持在1 6 1 8 水平。当相对湿度进一步降低至7 5 时，两株球孢 白僵菌的孢子萌发率与两株绿僵菌的孢子萌发率的差异极显著，而粉棒束孢与其他四 株的孢子萌发率依然差异极显著，而相对来说，这六株虫生真菌种间的孢子萌发率差 异均不显著。从该表可以得知，在2 5 这一温度下，随湿度降低，虫生真菌的孢子 萌发率均受到较大影响，在2 4 h 后，六株虫生真菌孢子萌发率种间差异不明显，而粉 棒束孢在四个梯度下与其他菌株的孢子萌发率差异均比较明显；在湿度降为7 5 时， 两株球孢白僵菌的萌发率与金龟子绿僵菌显著差异。 表1 0 六株虫生真菌孢子在2 5 ( 2 下不同湿度下3 6 小时萌发率 t a b l e1 0t h eg e r m i n a t i o nr a t e so fs i xs t r a i n so fe n t o m o g e n o u sf u n g iu n d e rd i f f e r e n th u m i d i t yi n3 6 h 根据表l o 数据表明，相对湿度为9 9 时，b b 8 9 7 与b b 2 0 2 间的孢子萌发率差异 显著，而b b 2 0 2 与两株金龟子绿僵菌间的差异不显著，两株粉棒束孢的孢子萌发率 与其他四株相比差异极显著。相对湿度为8 5 时，六株菌株的孢子萌发率均有所下 降，而b b 2 0 2 与b b 8 9 7 和两株金龟子绿僵菌间的萌发率差异不显著，而与粉棒束孢 相比，差异极显著。在湿度降低为8 5 时，二株白僵菌的孢子萌发率和2 4 h 相比均 有所上升，可是萌发率水平依旧在2 1 - - 2 3 之间，略高于2 4 h 时的水平，而金龟子 绿僵菌与粉棒束孢的孢子萌发率水平与2 4 h 相比也略有上升。而在7 5 的湿度下， 各株孢子的萌发率均比2 4 h 有上升，除了b b 8 9 7 与两株粉棒束孢间差异均不显著， 而两株金龟子绿僵菌与其他的菌株差异均显著，种间孢子萌发率差异不显著。 表1 1六株虫生真菌孢子在2 5 下不同湿度下4 腩萌发率 t a b l e1 1 t h eg e r m i n a t i o nr a t e so fs i xs t r a i n so fe n t o m o g e n o u sf u n g iu n d e rd i f f e r e n th u m i d i t yi n4 8 h 表1 1 的数据说明在4 8 h 后，各株孢子的萌发率与2 4 h 相比没有明显的变化，9 9 湿度下除了两株粉棒束孢，其他四株虫生真菌的孢子萌发率差异不显著，而六株虫 生真菌种间差异不显著，其萌发率水平为b b ( 9 9 l o o ) ，m a ( 9 9 1 0 0 ) ，i f ( 8 5 8 7 ) 。而当湿度在9 5 时候，其萌发率与9 9 时候无太大变化，可以看出， 在9 9 的湿度降低到9 5 时，孢子的萌发时间相对推迟，而次此区间湿度变化对其 孢子活力无太大影响。而当湿度下降为8 5 时，粉棒束孢的孢子萌发率增长速度略 大于其他4 株菌株，使六株虫生真菌的最终萌发率均落在2 3 和2 5 这个区间上， 互有高低。而当湿度下降成为7 5 时，孢子的萌发率比8 5 的湿度时略有下降，其 数值也略高于3 6 h 时所测的值。六株菌株的孢子萌发率维持在1 8 2 1 这一水平， 种间萌发率差异显著，种内萌发率差异不显著。 4 1 2 2 六株不同虫生真菌在2 0 c 时在不同湿度梯度下孢子萌发率比较 在2 0 c 下，六株虫生真菌的萌发率同时受到温度和湿度的影响，在2 0 c 时测得 得孢子萌发率如下表1 2 ： 表1 2 六株虫生真西孢子在约下不同湿度下2 4 1 1 萌发军 t a b l e l 2t h eg e r m i n a t i o nr a t e so fs i x 利旨a i n so fe n t o m o g e n o u sf u n g iu n d e rd i f f e r e n th u m i d i t yi n2 4 h 菌株 9 9 95857 5 b b 2 0 2 9 0 4 | h = 0 2 6cc8 8 4 7 ：t ：0 3 2aa1 5 6 7 士- 2 9 3aa1 2 3 3 ： - 0 2 5ff b b 8 9 78 9 5 3 圭o 3 5dd8 7 a 7 士0 2 5bb1 7 0 3 士2 2 9aa1 4 3 7 i - 0 1 5 ce m a 8 39 1 3 3 ：l - 0 0 6bb8 8 3 0 - z 0 。1 0 aa1 8 2 0 士- 2 0 0aa1 5 5 3 i - 0 3 2dd m a 4 59 2 2 3 士o 2 1aa8 7 4 3 o 1 5bb1 7 5 7 士i 3 6aa1 6 2 3 ：l - 0 2 1cc i f l 0 28 1 3 3 士o 1 5ee7 9 3 3 ：t o 1 5cc1 8 8 3 i - 0 9 1 aa 1 7 5 田3 0bb i f l 0 4 8 0 3 3 ：t - 0 2 5 ff7 8 5 组零，3 6dd1 9 1 7 x - 0 4 0aa1 8 5 趾o 3 6aa 根据表1 2 ，新复极差法测定结果表明，在2 0 的培养条件下，湿度对虫生真菌 的孢子萌发有较大影响。在湿度为9 9 时，各株菌株间差异都极显著，其中以m a 4 5 的孢子萌发率为最高，达到了9 2 ，同时以i f l 0 4 为最低。只有8 0 3 3 。在湿度为 9 5 的条件时候，各株虫生真菌的孢子萌发率均有所变化，除了b b 2 0 2 和m a 8 3 这一 组以及b b 8 9 7 和m a 4 5 这一组差异不显著外，其他几组差异均显著，球孢白僵菌和金 龟子绿僵菌的孢子萌发率维持在8 7 8 9 这一水平上，而粉棒束孢的孢子萌发率只 在8 0 这一水平上。当湿度突然从9 5 降低到8 5 时，孢子萌发率降低的很剧烈， 均在2 0 以下，菌株间孢子萌发率差异不显著，而粉棒束孢的孢子萌发率降低的幅 度明显小于两株球孢白僵菌和两株金龟子绿僵菌。在此温度下，湿度对球孢白僵菌和 金龟子绿僵菌的影响要高于其对粉棒束孢的影响。在湿度进一步下降到7 5 时，球 孢自僵菌和金龟子绿僵菌的孢子萌发率进一步下降，菌株问差异显著，可见此温度下， 湿度的降低对不同菌株的影响很大，而两株粉棒束孢的孢子萌发率降低的幅度显著低 于金龟子绿僵菌，而金龟子绿僵菌的孢子萌发率的下降幅度又明显小于球孢白僵菌。 表1 3 六株虫生真菌孢子2 0 下在不同湿度下3 6 h 萌发率 ：! 垒垒! 竺! ! ! 生竺壁! 竺! ! 竺! i 竺竺：筌竺竺! ! 坚! ! 翌垩! 坐竺竺! 竺竺竖竺翌竺竺! ! ! 竺兰! 竺型竺：璺! 空! 堡竺! 坠竺竺! ! ! 堡磐三生垒 菌株 9 9 95857 5 而从表1 3 可以看出，在3 6 h 时，在9 9 和9 5 的湿度下，六株虫生真菌的孢子 均可以正常萌发，其萌发率均略高于2 4 h 时的萌发率，最低的萌发率也在8 2 以上。 而在9 9 时，除了b b 2 0 2 和m a 8 3 问差异不显著，其他几株间的差异都极显著，在 湿度为9 5 时，除了m a 8 3 和m a 4 5 差异不显著，其他菌株间差异均显著。在湿度为 8 5 的水平时球孢白僵菌的萌发率虽然和2 4 h 测得的值相比又所上升，可是其萌发率 在此观察时刻下降的幅度依旧大于两株金龟子绿僵菌和两株粉棒束孢。且在湿度7 5 ，各个菌株间除了两株粉棒束孢间差异不显著以外，其他菌株间差异均显著，可以 看出，这两株球孢白僵菌对湿度的变化敏感性一致，同样，两株金龟子绿僵菌也是如 此，但是他们在此温度下对于湿度变化的敏感性均高于粉棒束孢。 表1 42 0 时六株虫生真菌孢子在不同湿度下4 8 h 萌发率 t a b l e1 4t h eg e r m i n a t i o no fs i xs t r a i n so fe n t o m o g e n o u sf u n g iu n d e rd i f f e r e n th u m i d i t yi n4 8 h 从表1 4 可以看出4 8 h 时候，在9 9 和9 5 湿度下，球孢白僵菌和金龟子绿僵菌 的孢子萌发率均可以到达9 0 以上，而除了粉棒束孢，其他几株菌株的差异不显著， 粉棒束孢在湿度为9 9 和9 5 的梯度下的最终萌发率达到了接近9 0 ，除了两株金 龟子绿僵菌种内在9 5 湿度下差异显著以外，其他菌株均种内差异不显著而种间差 异显著，且粉棒束孢在这两个湿度下的萌发情况基本相似，当湿度降低到8 5 时， 各株虫生真菌的孢子萌发率均有明显的下降，范围在1 8 - - 2 2 之间。此湿度下，粉棒 束孢由起始萌发率最低变成了相对萌发率最高的菌株。而到了7 5 湿度下，这种趋 势愈发明显，两株粉棒束孢的孢子萌发率下降的幅度均很小，而两株球孢白僵菌的孢 子萌发率下降的幅度最大，其次是两株金龟子绿僵菌，除了两株粉棒束孢，其他菌株 间孢子萌发率均有极显著差异。 412 32 0 c 和2 5 cf 各株虫生真菌在4 8 h 抱子萌发率的比较 1 i 同温度对不同的虫生真菌的萌发起不同的作用，以下是将2 5 c 、2 0 c 时不同 的虫生真菌在不同湿度梯度下4 8 h 后最终萌发率的对比结果如图 固8 不同苗株在2 0 靴2 5 c 下翻得不同温度的艳于萌发宰 f 8 t h eg e r m i n a t i o n “s i xb a n d so f e u o m o g e n o u s f u n g iu n d e r d i f f e r e n th u m i d i t y i n4 8 ho n2 0 a n d2 5 从图8 可以看出这六个菌株的萌发率都是随着湿度的降低而降低，在9 5 和8 5 这两个梯度转换时萌发率下降均十分剧烈。可以看出球孢白僵菌的孢子萌发率无 论在哪个湿度梯度下，均足2 5 时的萌发率略高于2 0 时孢子萌发事。金龟子绿僵 苗的孢子萌发率也是2 5 c 高于2 0 c 。只有粉棒柬孢不一样，州株粉棒束孢的孢子萌 发率均为2 5 c 时略低于2 0 。c 。可以说叫，2 0 。c 更适合于粉棒柬孢的培养，而金龟子 绿僵菌和球孢白僵菌的最适合萌发温度应该是在2 5 。在湿度为9 9 时可以发现， 粉棒束孢的塌终的萌发率与其他四株相比差异比较明显，而到了湿度为7 5 时，粉 棒束孢的孢予萌发率接近甚至高_ 】二球孢向僵菌和金龟子绿僵菌的萌发率，可以看出， 虽然部由于湿度的变化而下降，可是这两株粉棒束孢的抗旱能力比这两株球孢白僵茼 和两株金龟子绿僵菌要强。 41 3 不同紫外光时长对六株虫生真菌萌发率的影响 4131 不同菌株孢子萌发率对紫外时照的回归分析 根据不同紫外光照时长和波长计算出各株菌株的回归方程，并计算各虫生真菌的 致死中时s t s o ，根据各个时段孢子的失活率，用最小二乘法计算，计算结果如表1 5 ： 表1 5 不同菌株对紫外时照的回归分析 t a b l e1 5t h er e g r e s s i o na n a l y s i so fd i f f e r e n ts t r a i n so fe n t o m o g e n o u sf u n g iu n d e r d i f f e r e n tt i m ea n dw a v e l e n g t h s b b 2 0 2 b b 8 9 7 b b l 3 b b l 8 7 b b 2 0 l m a 8 3 m a 4 5 m a l 8 2 9 5 n m 3 0 5 r i m 3 1 5 r i m 2 9 5 n m 3 0 5 r i m 3 1 5 r i m 2 9 5 n m 3 0 5 r i m 3 1 5 r i m 2 9 5 n m 3 0 5 n i n 3 1 5 r i m 2 9 5 n m 3 0 5 n m 3 1 5 n m 2 9 5 n m 3 0 5 r i m 3 1 5 r i m 2 9 5 n m 3 0 5 r i m 3 1 5 r i m 2 9 5 n m y 音1 2 1 9 + 1 7 9 x 0 9 81 0 9 6 8 1 9 2 6 y _ - l o 6 3 + 1 7 3 x y _ - 8 1 9 + 1 5 8 x y 毛1 3 4 0 + 1 7 6 x y 三1 0 6 9 十1 7 4 x y 三8 5 7 + 1 6 0 x y - _ 1 3 8 5 + 1 7 4 x y 未1 0 3 8 + 1 7 7 x y _ - 6 9 1 + 1 6 5 x y 三1 3 0 2 + 1 7 3 x y = l l - 3 9 + 1 7 4 x y = 6 2 针1 2 3 x y _ 1 3 9 9 + 1 7 l x y = 1 2 1 6 + 1 7 1 x y _ 9 6 9 + 1 6 0 x y 釜3 0 8 5 + 1 8 8 x y 2 9 2 5 + 1 9 0 x y = 2 7 5 2 + 1 9 l x y = 3 2 6 0 + 1 8 4 x y = 2 9 8 l + l ，8 8 x y = 2 8 7 3 + 1 8 8 x y 弓1 2 舛i 8 7 x 0 9 9 o 9 9 o 9 8 o 9 9 o 9 9 o 9 r 7 o 9 9 0 9 9 0 9 9 0 9 9 0 9 9 o 9 9 0 9 9 o 9 9 0 7 4 o 7 7 o 8 0 0 7 4 o 7 8 0 8 0 o 7 3 2 1 7 7 5 3 2 3 5 8 8 4 9 2 2 9 5 6 6 2 4 5 5 4 7 6 8 0 3 6 0 3 7 2 0 9 8 4 1 5 3 1 4 3 7 0 6 0 1 5 6 0 3 1 5 1 8 9 3 5 8 9 8 2 5 1 4 6 5 7 5 6 8 4 8 o o 5 6 0 7 6 0 7 8 2 5 5 0 2 1 5 0 2 6 7 8 1 8 9 5 2 1 7 7 2 6 。0 0 1 8 8 2 2 1 8 4 2 6 5 2 2 0 4 0 2 1 8 7 2 7 7 l 2 0 4 3 2 2 2 3 2 5 7 4 8 8 0 9 6 6 1 0 4 0 9 0 3 9 9 3 1 0 2 4 8 4 7 3 0 5 r i m弘2 9 a 3 + 1 8 9 x 0 7 87 2 8一 l o 1 5 抖 。 # 树 宰 抖 ： 料 ： 抖 m a 2 2 m a 2 3 礤1 0 4 球1 0 2 i f 3 3 9 i f 3 4 0 i f 3 3 1 3 1 5 a m 2 9 5 a m 3 0 5 r i m 3 1 5 r i m 2 9 5 n m 3 0 5 n m 3 1 5 r i m 2 9 5 n m 3 0 5 m 3 1 5 r i m 2 9 5 n m 3 0 5 r i m 3 1 5 r i m 2 9 5 n m 3 0 5 r i m 3 1 5 a m 2 9 5 n m 3 0 5 n m 3 1 5 r i m 2 9 5 n m 3 0 5 n m 3 1 5 n m y _ - 2 8 i 钳- 1 8 9 xo 7 97 5 5 y = 3 l j o + 1 7 9 x y 三2 9 4 9 + 1 1 8 9 x y 音2 8 0 8 + 1 9 l x y 釜3 2 0 2 + 1 8 4 x y 刍3 0 2 0 + 1 8 2 x y 釜2 8 5 7 + 1 9 0 x y 三3 2 5 3 + 1 3 5 x y _ 3 0 2 3 + 1 3l x y = 2 9 4 8 + 1 2 l x y = 3 2 9 2 + 1 3 8 x y 3 1 3 2 + 1 2 8 x y 三2 8 7 5 + 1 2 4 x y = 3 2 2 3 + 1 3 5 x y = 2 8 4 5 + 1 3 8 x y _ 2 8 3 8 + 1 2 5 x y 三2 9 6 5 + 1 4 5 x y 妄2 8 7 4 + 1 3 4 x y 三2 5 6 3 + l3 5 x y 三2 9 8 3 + 1 4 4 x y = 2 8 5 2 + 1 3 3 x o 7 5 0 7 9 o 8 l o 7 5 o 7 8 o 8 0 9 9 0 9 9 0 9 9 o 9 9 o 9 9 o 9 9 o 9 8 o 9 9 o 9 9 0 9 9 o 9 9 0 9 9 0 9 9 o 9 9 5 8 7 7 3 3 8 4 5 5 8 8 7 2 8 7 9 3 3 2 7 5 1 2 1 2 8 9 7 1 7 8 8 3 9 1 5 8 1 8 2 2 9 2 5 l 4 5 4 9 8 8 8 0 3 1 5 4 1 1 5 3 7 4 4 2 8 4 1 1 4 8 9 2 0 6 舶 4 6 3 6 0 1 3 1 7 3 3 8 4 2 8 3 4 i o 舶 8 4 8 1 0 1 8 1 0 6 4 8 4 9 l o 1 7 1 0 6 3 2 1 0 6 2 4 7 2 2 7 0 7 l9 9 2 2 4 7 l 2 6 4 4 1 9 3 4 2 3 7 8 2 矗6 1 1 9 3 6 2 2 3 9 2 5 0 6 2 0 0 6 2 3 6 4 y - - 2 7 3 7 + 13 0 x0 9 95 3 7 0 3 幸 2 5 0 6 从表1 5 可以得知，各个菌株的萌发率都随着紫外时照的增加而减少，其死亡率 是在随照射时间的增加而不断增加。对各个方程的相关指数进行分析，发现五株球孢 白僵菌和五株粉棒束孢的相关性极显著，都达到了o 9 8 以上，而只有金龟子绿僵菌 的相关性相对一般，可是也达到了0 7 4 以上。从表中还可以看出在三种不同波长的 紫外照射下，其s t 5 0 的值也发生了变化，可以发现，其整体趋势是随着波长的增加， 其孢子的萌发率降低速度逐渐变慢。可见，对于三种不同波长的紫外光来说，其对虫 一 # 蚪 抖 。 ” 料 生真菌杀伤的作用是2 9 5 n m 3 0 5 n m 3 1 5 r i m 。出现此现象的原因可能是由于在较短 的紫外波长作用下，真菌细胞中的d n a 的嘧啶二聚体具有特定的能量吸收，从而导 致其功能结构被破坏，最终导致真菌的死亡。可以得知，在u 的波长范围内，波 长越长，其对真菌孢子杀伤的作用就越弱；波长越短，其对真菌孢子杀伤的作用就越 强。在本试验中，可能是由于照射条件限制或者真菌孢子本身条件所限，并没有出现 与此有关的光复活现象。 4 1 3 2 不同菌株s t 5 0 的聚类分析 根据三个不同波长下的各个菌株的s k 值进行系统聚类分析( 采用欧式距离的 类平均法对各菌株的类间距进行计算) 可得图9 ， i ，0 0 j i j0：jj，。0，o、一00。-， ? 。| _ j j 。j ? ：， j，jj 一 ，：。 ? 7 ，j “7 j 孑一 l ， 。 叫：，。， ，| ，_ ， i ，：+ ；，j ? j j l ，一“，二一一，- 一f ， r 。i ，i ，。：， 一，。，f “，。：0 1 - 图9 不同紫外波长下十五种虫生真菌聚类分析图 f l g u e9t h ec l u s t e r i n ga n a l y s e sp i c t u r eo ff i f t e e nb a n d so fe n t o m o g e n o u sf u n g i u n d e rd i f f e r e n tw a v e l e n g t h e s 表1 6 各株虫生真菌菌株之间的类间距 ：! 塾垒! ! ! ! 竺! 竺! 竺! 壁! 壁呈竺! 竺空! 塑! ! 竺空塑! ! ! 1 2 1 竺! 竺竺竖竺竺2 竺! 垒竺g ! t 值i 值j 值类间距 备注 3 2 土 根据聚类图，当以类间距大于4 3 6 进行划分时，所有的菌株可以分为两类，其 中m a 8 3 、m a 4 5 、m a l 8 、m a 2 2 、m a 2 3 分为一类，这一类对u v b 非常敏感，在长时 间照射下容易失活，而其他l o 株虽然分布在两个不同的种之间，可是从聚类图可以 看出他们之间互有交叉，在类间距为4 3 6 以下分为一类，这一类对紫外的敏感性互 有高低，对u v b 照射属于一般敏感型。这也与金龟予绿僵菌抗紫外能力弱，野外放 菌易失活的现象相一致。在野外释放金龟子绿僵菌时，要充分考虑其自然生活力和抗 逆性，保证其防治效果正常发挥。 4 1 4 六株虫生真菌与壤中微生物作用拮抗作用的研究 4 1 4 1 不同处理土壤对六株虫生真菌萌发率的影响 进过测定，土壤中的p h 为6 8 ，含水率3 5 。 由于土壤对虫生真菌的孢子萌发率的影响多方面的，本实验利用不同的土壤浓度 和灭菌以及不灭菌的处理测得孢子萌发率如图1 0 - 1 5 ： 圈2 4 2 5 57 5 2 557 5 图1 0b i ) 2 0 2 在不同处理土壤中的葫发率 1 0 0 9 0 褥8 0 粼7 0 船6 0 5 0 4 0 3 0 2 0 1 0 0 土壤浓度 3 3 2 557 52 557 5 图11b b 8 9 7 在不同处理土壤中的萌发率 蚰孢黝加加o度 爵越猕 赫 1 9 0 8 0 7 0 印 褥 熬5 0 格 4 0 3 0 2 0 1 0 0 1 0 0 9 0 8 0 7 0 6 0 褥 粼5 0 榴 4 0 3 0 2 0 l o 0 囵2 4 2 557 52 557 5 图1 2m a 8 3 在不同土壤处理中孢子萌发率 圈2 4 2 557 52 557 5 图1 4i f l 0 2 在不同处理土壤中孢子萌发率 l 8 0 7 0 6 0 静 5 0 档 4 0 3 0 2 0 1 0 0 1 0 0 9 0 8 0 7 0 印 瓣 粼5 0 糨 4 0 3 0 2 0 1 0 o 囵2 4 2 557 52 557 5 图1 3m a 4 5 在不同土壤处理中孢子葫发率 2 557 52 557 5 图1 5i f l 0 4 不同处理土壤中孢子萌发率 从图1 0 - - 1 5 可以看出，在灭菌的处理中，各个菌株的孢子萌发率均随着土壤浓度 的增加而增加，而相对来说，在未灭菌的土壤中，各个菌株的孢子萌发率均随着土壤 浓度的增加而减少，这可能是由于在灭菌的高浓度的土壤溶液中，土壤中有大量的可 促进孢子萌发的营养物质，促使孢子大量快速萌发，而在未灭菌的高浓度的土壤中， 大量的杂菌菌群的存在不仅仅占有了虫生真菌萌发所需的营养，而且可能产生大量的 抗菌素等拮抗物质来抑制真菌萌发，所以孢子未灭菌的土壤中的萌发率显著低于灭菌 的土壤中的孢子萌发率。 4 1 4 2 六株虫生真菌与土壤中的微生物拮抗能力比较 由于不同的虫生真菌在土壤中有着不同的拮抗能力，以下是对4 8 h 后的各个处理 的萌发率进行了方差分析以及抑制率的计算，计算的结果见表1 7 ， 表”不同处理下六株虫生真菌的孢子荫发率抑制率和方差分析 t a b l e1 7t h ea n o v aa n a l y s i so f t h eg e r m a r a t i o nr a t e sa n di n h i b i t e dr a t e so f e n t o m o g e n o u sf h n 毋 土壤浓度 孢子萌发率 抑制率 菌株处理9 5 9 9 (glooml)(48h)() b b 2 0 25 7 5 b b 8 9 75 7 5 m a 8 35 7 5 m a 4 55 球1 0 2 7 5 灭菌 未灭菌 灭菌 未灭菌 灭菌 未灭菌 灭菌 未灭菌 灭菌 未灭菌 灭菌 未灭菌 灭菌 未灭菌 灭菌 未灭菌 灭菌 未灭菌 灭菌 未灭菌 灭菌 未灭菌 灭菌 未灭菌 灭菌 未灭菌 9 8 1 3 1 - 0 。2 1 8 9 2 0 o 1 0 9 9 9 7 士o 0 6 7 2 2 3 如3l 9 9 9 7 士0 0 6 4 5 5 7 士o 4 2 9 8 5 7 士0 4 2 9 9 9 7 ：l - 0 0 6 5 3 6 0 士o 3 0 9 9 9 7 士o 0 6 2 3 4 3 ：l - 0 4 2 9 6 6 3 ：l - 0 4 5 7 9 1 0 士0 2 0 9 9 5 3 士0 2 l 3 9 6 3 ：- 0 5 0 l o o o i 晌= 0 0 0 3 6 2 7 士0 6 0 9 6 9 7 士0 4 2 6 6 1 0 士o 8 0 9 8 8 任印2 6 3 7 3 0 1 - 0 7 0 9 9 9 7 ：0 0 6 3 0 4 7 士0 7 5 8 4 3 0 - 士i 0 8 4 1 8 任7 0 9 o o 2 8 0 0 5 4 0 0 2 8 o o 4 6 o o 7 7 0 0 1 8 o o 6 0 o o 6 4 0 0 3 2 o o 6 2 o o 7 0 0 0 5 0 0 0 5 灭菌 9 5 5 7 ：l - 0 5 0bb 7 8 0 0 b c a d a g b e a f a h c d 蛆 f a g c e b g a h d e b c a d a g b e a f 8 h c d 曲 f a g c e b g a ； d e 方差分析结果表明，同一菌株中经过不同的处理，其孢子萌发率之间的差异极显 著，尤其是在起始的两个浓度，差异显著，可以说，土壤中的物质和生物对虫生真菌 的孢子萌发作用是明显存在的。在0 0 5 9 m i 与0 0 7 5 9 m l 中，在灭菌的这一组处理中， 有几株菌株的孢子萌发率之间没有显著差异，原因可能是因为在0 0 5 9 m l 中，其营养 物质和条件使得几株虫生真菌的孢子可以达到很高的水平，可是，相对来说0 0 7 s g h d 下孢子萌发率虽然很高，可是其萌发率比0 0 5 9 m l 可增加的空间很小，因此，才出现 了这样一个情况。在浓度为0 0 2 5 9 m l 的这个水平上，虫生真菌对土壤中微生物的拮 抗能力大小为i f l 0 4 i f l 0 2 - m a 4 5 b b 8 9 7 m a 8 3 b b 2 0 2 ；而在浓度为0 0 5 9 m l 的这个浓度水平上，虫生真菌对土壤中微生物的拮抗能力大小为i f l 0 4 i f l 0 2 m a 4 5 m a 8 3 b b 8 9 7 b b 2 0 2 ；而在土壤浓度为0 0 7 5 9 m l 的这个浓度水平上，虫生 真菌对土壤中微生物拮抗能力大小为i f l 0 2 i f l 0 4 m a 4 5 b b 8 9 7 m a 8 3 b b 2 0 2 。 可见，粉棒束孢在三种虫生真菌种对土壤的拮抗能力是最弱的，可能是由于在相对适 合的温度下，相对于球孢白僵菌，其孢子萌发速度相对较慢，对土壤溶液种的拮抗物 质抵抗力变弱而造成活力下降。b b 2 0 2 是六个菌株种对土壤拮抗能力最强的菌株，这 也证明了为什么在野外放菌试验中，b b 2 0 2 能较快的适应环境，在土壤中大量宿存的 原因。而相对于b b 2 0 2 和粉棒束孢来说，金龟子绿僵菌的拮抗能力在这三种虫生真 菌中相对是居中的，其中以m a 8 3 的拮抗能力强于m a 4 5 的拮抗能力。从总的来说对 土壤的拮抗能力的大小是i f m a b b 。 4 2 室外比较生态学的研究 4 2 1 六株虫生真菌固体发酵孢子质量检测 对固体发酵收集的孢子做以下的质量检测，如表1 9 嘲 表1 8 六株虫生真菌孢子糟质量检测 t a b l e i st h eq u a n l i h t e s to f t h ee b o 驴i f u n 西s p o r 船 虫生真菌的孢子质量检测结果表明，其含孢量均达到了1 0 “个数量级，符合固体 发酵产孢量的要求，而其2 4 h 活孢率也高于9 0 ，符合野外放苗的需要。其古水率 在低于1 1 ，基本符合标准化生产的要求，d u n c a n s 新复极差结果表明不同菌株发酵 的制剂含孢量差月较人，种间和种内差异都极显著，而它们的孢子萌发率差异不显著， 均在9 5 以上。 422 六株虫生真菌无纺布条的质量检测 对生产出的六株虫生真菌无纺布的孢子进行检测，结果如表2 0 衷1 9 无纺布葫条的产孢量厦活孢牢 t a b l e l 9s p o m l a t l o n _ n dg e t m l n a f f o ao de t o “o g h 四b a n d s 检测结果表明，这六株虫牛真菌中，以两株球孢白僵菌产饨能力为最强，而两株 金龟子绿僵菌和阿铼粉棒束孢的产孢量差异不显著。这六株虫生真菌的孢子活力均在 9 5 以l ，达到了无纺布制