（微生物学专业论文）两株海洋真菌活性物质的初步研究.pdf

中文摘要 本文对采集自浙江舟山海域底泥的7 2 株海洋真菌、福建省九龙江口及云霄 县红树林的1 1 6 株红树林共附生真菌，进行了杀小杆线虫、杀卤虫和乙酰胆碱酯 酶( a c h e ) 抑制活性的初步研究。对筛选出具有较强a c h e 抑制活性的# 2 2 9 真 菌和抗菌活性的c 3 5 9 真菌的代谢产物进行了初步的研究。 我t f j x + 1 8 8 株真菌粗提物的杀小杆线虫活性进行测试，结果表明，对小杆线 虫有一定的毒杀作用。在0 5 m g m l 的浓度下，毒力级别达到a 级的菌株数占 1 6 0 ；而致5 0 以上死亡率菌株数占4 3 1 。经复筛，# 1 6 4 真菌粗提物具有较 强的杀小杆线虫活性，0 5 m g m l 浓度下处理2 4 h ，小杆线虫死亡率为9 6 6 7 。 对1 8 8 株真菌粗提物的杀卤虫活性进行研究，其中# 1 2 2 真菌粗提物的活性 较强，在0 5 m l g m l 浓度下，处理2 h 后卤虫死亡率就达到了1 0 0 。另外，# 1 3 、 # 4 5 、# 8 3 、# 1 2 3 、# 3 0 5 等6 株真菌粗提物对卤虫具有较强的毒杀作用。在o 5 m g m l 浓度下，被测试卤虫2 4 h 死亡率均在8 5 以上。 进一步考察上述6 株真菌粗提物浓度梯度与杀卤虫活性关系。结果表明， # 3 0 5 真菌粗提物杀卤虫活性最强，在1 0 0 p g m l 的浓度下，处理2 4 h ，卤虫死亡 率高达9 0 ，其l c s o 仅为7 5 p g m l 。 从1 8 8 个粗提物中筛选到# 2 2 9 真菌和# 1 7 0 真菌粗提物具有较强的a c h e 抑 制活性，i c s o 分别是3 0 1 t g m l 和2 5 肛g m l 。进一步实验结果表明，# 2 2 9 真菌和 撑1 7 0 真菌很可能是同一个菌种，因为它们代谢产物的t l c 结果完全相同。 对具有a c h e 抑制活性的# 2 2 9 真菌的代谢产物进行活性跟踪分离，从中分 离出具有高效a c l l e 抑制活性的化合物t e r r i t r e mb ，即土震素b 。另外，从该真 菌的代谢产物分离到了具有抗真菌活性的聚酮类化合物p a l i t a n t i n ，该化合物对白 色假丝酵母( c a n d i d aa l b i c a n s ) 的m i c 值为6 2 5 i t g m l 。 对初筛具有抗菌和杀卤虫活性的c 3 5 9 真菌的代谢产物进行分离。从中分 离到了具有较强肿瘤细胞毒活性的化合物g l i o t o x i n 和a c e t y l g l i o t o x i n 。 a c e t y l g l i o t o x i n 对m g 6 3 细胞株的i c 5 0 小于0 7 5 t a g m l ，对b 淋巴瘤r a j i 细胞的i c 5 0 介于i p g m l 和2 i _ t g m l 之间，2 1 a g m l 时，对肝癌细胞h e p g 的抑 制率达9 5 ，表现出较强体外细胞毒活性。此外，对白色假丝酵母的m i c 小于 1 9 t a g m l ，对黑雎霉的m 1 c 小于3 9 p g m l 。该化合物对枯草丰t 菌、大肠杆菌和 i l 金黄色葡萄球菌也具有较好的抑制活性。 g l i o t o x i n 对m g - 6 3 细胞株的i c s o 小于3 1 2 5 l a g m l ，对b 淋巴瘤r a j i 细胞 的i c 5 0 小于1 0 垤, m l ，2 l j t g m l 时，对肝癌细胞h e p g 的抑制率达9 5 。该化合 物对枯草杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌也具有一定的抑制活性。 从该真菌的代谢产物分离到环二肽苯丙氨酸一2 一羟甲基一丙氨酸，经 b e i l s t a n 数据库检索，确定该化合物是新化合物。该化合物对肿瘤细胞株 h e p g 和k b 均不表现细胞毒活性。 此外，还从该真菌代谢产物分离到已知化合物甘露醇、氧氮杂环化合物、过 氧化麦角甾醇、亚油酸甲酯以及一个结构复杂的鞘胺醇类化合物，共计1 0 个单 体化合物。 关键词：海洋真菌；a c h e 抑制剂：肿瘤细胞毒 1 1 1 a b s t r a c t t h i st h e s i sc o v e r sp r e l i m i n a r ys t u d yo nt h ea n t i r h a b d i t i ss p ，a n t i b r i n es l u i m p s a n da c h ei n h i b i t o r ya c t i v i t yo f18 8m a r i n e d e r i v e df u n g i f u r t h e r m o r e ，w es t u d i e d t h em e t a b o l i t e so f t w om a r i n e d e r i v e df u n g i ，# 2 2 9a n dc 一3 5 - 9 w et e s t e d t h ea n t i r h a b d i t i ss p f o rc r u d ee x t r a c t so f18 8f u n g i t h er e s u l ti s m e t a b o l i t e so fm a r i n e d e r i v e d f u n g i a r et o x i c a g a i n s t r h a b d i t i s s p a t t h e c o n c e n t r a t i o no fo 5 m g m l ，t h ev i r u l e n c eo fg r a d eaa c c o u n t sf o r1 6 0 o ft h et o t a l s t r a i n s t h es t r a i n sw h i c hl e a dt ou p5 0 m o r t a l i t ya c c o u n tf o r4 3 1 b ys e c o n d s c r e e n i n g ，t h ec r u d ee x t r a c to f # 1 6 4i sm o s ta c t i v ea g a i n s tr h a b d i t 函s p ，a tt h e c o n c e n t r a t i o no f o 5 m g , m l ，t h em o r t a l i t yi su pt o9 6 6 7 a f t e rt r e a t i n gf o r2 4 h w et e s t e dt h ea n t i b r i n es h r i m p sf o rc r u d ee x t r a c t so f18 8f u n g i t h ec r u d e e x t r a c to f # 1 2 2i sm o s ta c t i v e a tt h ec o n c e n t r a t i o no fo 5 m g m l t h em o r t a l i t yi s 1 0 0 a f t e r t r e a t i n g f o r2 h f u r t h e r m o r e ，t h ec r u d ee x t r a c t so f # 1 3 、# 4 5 、# 8 3 、# 1 2 3 、 # 3 0 5a r et o x i c a g a i n s t b r i n es h r i m p s a tt h ec o n c e n t r a t i o no fo 5 m g m l t h e m o r t a l i t i e sa r ea l la b o v e8 5 a f t e rt r e a t i n gf o r2 4 h w es t u d i e dt h e r e l a t i o n s h i pb e t w e e nc o n c e n t r a t i o n so fc r u d ee x t r a c t sa n d a n t i b r i n es h r i m p sf o rt h ea b o v e6f u n g i t h ec r u d ee x t r a c to f # 3 0 5i sm o s ta c t i v e a g a i n s tb r i n es h r i m p s a tt h ec o n c e n t r a t i o no f0 i m g m l t h em o r t a l i t yi s9 0 a f t e r t r e a t i n gf o r2 4 h i t sl c s oi so n l y7 5 1 a g m l a m o n gt h e1 8 8c r u d ee x t r a c t s ，t h ec r u d ee x t r a c t so f # 2 2 9a n d # 1 7 0a r em o s t a c t i v ea g a i n s ta c h e t h e i ri c s o sa r er e s p e c t i v e l y3 0 1 t g m la n d2 5 9 9 m l b u tf n r t h e r s t u d ys h o w e dt h et w of u n g ia r ep o s s i b l yt h es a n l es t r a i n t h et l cr e s u l to f t h ec r u d e e x t r a c t sf r o mt h et w of u n g ii st h es a m e w es t u d i e dt h em e t a b o l i t e so f # 2 2 9f u n g u su n d e rt h eg u i d a n c eo fb i o a c t i v e d i r e c t i o n w ei s o l a t e da na c t i v ea c h ei n h i b i t o r , t e r r i t r e mb f u r t h e r m o r e ，w ea l s o i s o l a t e da l l a n t i f u n g a lc o m p o u n d ，p a l i t a n t i nw i t h i t sm i cv a l u ea g a i n s tc a n d i d a a l b i c a n s6 2 5 9 9 m l t h ec r u d ee x t r a c to fc 一3 5 9 f u n g u se x h i b i t e da n t i f u n g a l ，a n t i b a c t e r i a l a n d a n t i b r i n es h r i m pa c t i v i t i e s w ei s o l a t e dt w oc y t o t o x i t i cc o m p o u n d s ，g l i o t o x i na n d a c e t y l g l i o t o x i nf r o m t h em e t a b o l i t e s a c e t y l g l i o t o x i nd i s p l a y e ds i g n i f i c a n tc y l o t o x i c i t ya g a i n s tm g 一6 3c e l ll i n ew i t h a ni c 5 0o fl e s st h a no 7 5 a g m l ，a tt h ec o n c e n t r a t i o no f2 t x g m l ，i t si n h i b i t o r yr a t e a g a i n s tr a j ic e l l si s6 0 2 i t si n h i b i t o r yr a t ea g a i n s th e p gc e i l si s9 5 a tt h e c o n c e n t r a t i o no f2 9 9 m l f u r t h e r m o r e ，i t sm i c sa r el e s st h a n19 9 9 m la n d3 9 1 a g m l a g a i n s tc a n d i d aa l b i c a n sa n da s p e r g i l l u sn i g e r ，r e s p e c t i v e l y t h i sc o m p o u n da l s o s h o w e da n t i b a c t e r i a la c t i v i t y g l i o t o x i ne x h i b i t e ds i g n i f i c a n tc y t o t o x i c i t ya g a i n s tm g 一6 3w i t ha ni c 5 0o fl e s s t h a n3 1 2 5 9 9 m l t h ei c s 0o f g l i o t o x i na g a i n s tr a j ic e l ll i n ei sl e s st h a n1 0 9 9 m l i t s i n h i b i t o r yr a t ea g a i n s th e p gc e i l s i s9 5 a tt h ec o n c e n t r a t i o no f2 9 9 m l t h i s c o m p o u n da l s os h o w e da n t i b a c t e r i a la c t i v i t y w ea l s oi s o l a t e dan o v e lc y c l o d i p e p t i d ep h e 2 - h y d r o x y m e t h y l - a l af r o mt h e m e t a b o l i t e so fc 一3 - 5 9 b u ti td i dn o ts h o wa n yc y t o t o x i c i t ya g a i n s th e p ga n dk b c e l l l i n e s f u r t h e r m o r e ，w ei s o l a t e ds e v e r a lk n o w nc o m p o u n d sf r o mt h em e t a b o l i t e s t h e y i n c l u d em a n n i t o l ，o x i d en i t r o g e nw i k e p e d i a ，e r g o s t e r o lp e r o x i d e ，m e t h y ll i n o l e a t ea n d c e r e b r o s i d e s k e yw o r d s ：m a r i n e d e r i v e df u n g i ，a c h ei n h i b i t o r , c y t o t o x i c i t y v 致谢 致谢 本论文是在导师宋思扬教授悉心指导下完成的。宋老师对论文倾注了大量的 精力和期望，是他精心地栽培才使得我一步一步迈向科学的殿堂。宋老师严谨的 治学态度和渊博的专业知识都让我受益非浅；宋老师所给予我的谆谆教诲和无私 帮助，给我留下了非常深刻的印象，并将使我终生受益。在此，我向他致以深深 的谢意! 在本论文的完成过程中，还得到了沈月毛教授、黄耀坚教授和郑忠辉教授 的指导和帮助，在此向他们也表示衷心的感谢。沈老师在化合物分离纯化和结构 解析方面给予指导，使我学到很多天然产物化学方面的专业知识，同时，沈老师 还在学习生活上给予关怀。黄老师在真菌菌株提供及鉴定方面给予了热心的帮助 和指导。郑老师在实验的策略和细节方面给予热情指导，指点迷津。还要感谢本 实验室的徐庆妍、张连茹、胡志钰、鲁春华老师。同时还要感谢本实验室张决、 陈融、胡萍、杜希萍、彭琛、肖平、熊枫、王若宇、杨丽姗、王瑶琼、李健、霍 伟熙、林翔、吴兆贤、林挺、黄翠莲、刘锦生、黄丹红、吴莹莹以及化学化工学 院化学系刘万云等同学给予我的无私帮助。 此外，非常感谢集美大学生物工程学院蔡慧农院长、杨秋明老师在发酵方 面提供仪器设备并给予了热心的指导和帮助。 感谢国家海洋8 6 3 课题( 2 0 0 1 h h 6 2 0 4 0 1 ) 、福建省科技计划( 2 0 0 4 n 0 0 3 ) 基金提 供资助。 最后，衷心感谢我的父母、弟妹、肖开展、肖世智和肖世祥叔叔、福龙生物 制品有限公司的董事长杨兰钦和总经理郑月英、林榕清叔叔和小唐、以及亲人和 朋友们，他们的支持与鼓励是我不断前进的动力。 厦门大学学位论文原创性声明 兹呈交的学位论文，是本人在导师指导下独立完成的研究成 果。本人在论文写作中参考的其他个人或集体的研究成果，均在 文中以明确方式标明。本人依法享有和承担由此论文产生的权利 和责任。 声明m 签名x 吣孓影 矿6 年7 月y 日 厦门大学学位论文著作权使用声明 本人完全了解厦门大学有关保留、使用学位论文的规定。厦 门大学有权保留并向国家主管部门或其指定机构送交论文的纸 质版和电子版，有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允 许论文进入学校图书馆被查阅，有权将学位论文的内容编入有关 数据库进行检索，有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密 的学位论文在解密后适用本规定。 本学位论文属于 1 、保密() ，在年解密后适用本授权书。 2 、不保密( “ ( 请在以上相应括号内打“”) 作者签名：咱影魄谢年 月弘日 导师签名：钚哟吼6 年7 月刃日 前言 刖蟊 1 a c h e 抑制剂的研究概况 1 1 阿尔茨海默氏症的概况 阿尔茨海默氏症( a l z h c i m c r sd i s e a s e ，a d ) 是慢性的大脑紊乱疾病，逐渐地 破坏患者的记忆力、学习能力、推理能力、判断能力、交际能力和日常活动的能 力。随着疾病的恶化，患者的个性和行为也随之改变，这些行为包括焦虑、多疑、 幻觉和不安等。目前，医学界还没有彻底治疗该疾病的方法。但是，随着对该疾 病生物学深入的研究。可以对其进行有效的治疗，改善患者的生活质量，减缓该 疾病的进程l “。 随着世界人口老年化的进程，世界人口中老年人所占的比例越来越大，患阿 尔茨海默氏症人群的比例也越来越高。图1 表明了，阿尔茨海默氏症患者的比例 随着年龄的增长而急剧增加。 图1 ：a d 患者的比例随着年龄的增长而增加【2 】 f i g 1 ：t h ep r e v a l e n c eo f a di n c r e a s e sw i t ha d v a n c i n ga g e 目前，针对阿尔茨海默氏症的治疗主要方法有：提高大脑皮层中乙酰胆碱的 浓度，通过对a c h e 抑制来实现；阻断a b 淀粉样蛋白的形成过程，将催化淀粉样 蛋白前体( a m y l o i dp r e c u r s o rp r o t e i n ，a p p ) 转化为a b 淀粉样蛋白的a p p 分泌酶抑 制，从而阻断a b 淀粉样蛋白的形成【3 1 ；临床上，对于女性的阿尔茨海默氏症患 者，利用医用雌激素代替女性体内天然的雌激素( 4 】o 然而，a c h e 抑制剂是目前 研究最为广泛的、治疗阿尔茨海默氏症最多的开发途径，他克林( t a c f i n e ) 、多 剐再 奈派齐( d o n e p e z i l ) 、加兰它敏( g a l a n t a m i n e ) 、酒石酸卡巴拉丁_ ( r i v a s t i g m i n e ) 等是f d a 批准临床上使用的a c h e 抑制剂【5 】。 1 2 阿尔茨海默氏症与a c h e 的关系 在乙酰胆碱受体处，a c h e 催化乙酰胆碱分解成胆碱和乙酸( 图2 ) 。乙酰 胆碱是神经信号的传导介质，在记忆过程中起介质的作用。阿尔茨海默氏症 的患者，由于大脑皮层中的a c h e 活性过高，导致乙酰胆碱的浓度过低，因 此丧失了记忆等大脑功能。a c h e 抑制剂用于阿尔茨海默氏症患者的治疗， 也是基于抑制a c h e 活性的原理，从而起到提商大脑皮层中乙酰胆碱浓度的 作用。 图2 ：a c h e 抑制剂的作用位点【6 1 f i g 2 ：a c t i o ns i t eo f a c h ei n h i b i t o r s 近年来的研究表明，a c h e 除了具有催化活性外，还参与一些非催化作用f 7 】。 如，参与a p 样蛋白富集前一些复杂的过程。一些证据表明，该酶通过加快a p 样蛋白的沉积，在阿尔茨海默氏症斑的形成过程发挥重要作用哺j 。同时，a c h e 与a b 样蛋白的相互作用，通过该酶外部的阴离子结合位点( p e r i p h e r a la n i o n i c b i n d i n gs i t e ，p a s ) 附近的氨基酸，促使淀粉样纤维蛋白的形成1 7 j 。研究表明，a c h e 前言 抑制剂分子能够与该酶的p a s 专一性地作用，或者同时与a c h e 催化活性位点 和a c h e 外围的结合位点相互作用( 双重抑制) ，以上的两种作用都能够阻止 a c h e 在a b 样蛋白富集之前的作用【训。因此，能够与a c h e 外围和a c h e 活性 中心双重结合的抑制剂，很可能意味着一种新的治疗途径，至少在原理上，双重 抑制剂能够提高阿尔茨海默氏症患者的认知能力和避免a b 样蛋白的富集。针对 a c h e 外围和活性中心的双重作用抑制剂已有报道。但是，它们对a 1 3 样蛋白富 集前的作用并没有确定的实验证据。 1 3 天然产物来源的a c h e 抑制剂 1 3 1 生物碱作为a c h e 抑制剂 2 0 0 0 年，k i n g k a n i n a n 等人采用h p l c 和u v m s 一生化偶联在线检测的方 法，从水仙花品种“温斯顿丘吉尔先生”分离得到活性化合物u n g i m o r i n e ( 1 ) ， 该化合物具有中等的a c h e 抑制活性，i c 5 0 是8 6 a ：7 m o l l 9 1 。 o m e o = h r 3 ：o a c m 彳m e 2 0 0 2 年，s u r y ak k a l a u n i 等人从植物柳叶清香桂( s a r c o c o c c ac o r i a c e a ) 的叶子提取物中分离到2 个甾族类生物碱，f u n t u m a f r i n ec ( 6 ) 和n 甲基f u n t u m i n e ( 7 ) 。这两个化合物对a c h e 抑制的i c s o 分别是4 5 8 v m o l l 和9 7 6 l _ t m o l l ，并且是以 剂量依赖的方式而作用的。 刚i 0 石蒜科植物产生包括加兰它敏在内的很多具有药理活性的生物碱。2 0 0 2 年， s u s a n a l o p e z 等人报道了，从植物水仙花中分离得到了多个生物碱，其中有a c h e 抑制活性的生物碱化合物包括：s a n g u i n i n e ( 8 ) ( i c 5 0 = 0 1 i _ t m o l l ) 、加兰它敏( 9 ) ( i c 5 0 = 1 0 7 l | t m o l l ) 、l l 一羟基加兰它敏( 1 0 ) ( i c 5 0 = 1 6 1 l a m o l l ) 、e p i n o r g a l a n t h a m i n e ( 1 1 ) ( i c 5 0 = 1 6 1l a m o i l ) 、o x o a s s o a n i n e ( 1 2 ) ( i c s o = 4 7 2 i _ t m o l l ) 、a s s o a n i n e ( 1 3 ) r i c 5 0 = 3 8 7 i | t m o l l ) 。 r 4 0 r 1 一r 2 i r 5 曼i i 8 日篷! j 蹩i m ：融：h 。r r 5 。= ：h 。h ，t 。2rr，1：+rr2，：=hor mr 4m e r5=hohm er 4 = m 9r 1 = 0 hr 2 = h3 = e = 。 1 0r1=r2=hr 3 2er 5 = 0 h o 、i 卟o - 几 1 1r 1 ：hr 2 = o hr 3 = h r 4 = m er 5 = h 石松科植物产生结构多种多样的生物碱，而且，很多生物碱具有不寻常的骨 架，比如具有强的a c h e 抑制活性的石杉碱甲也是从该科植物中分离得到的。2 0 0 3 年，y u s u k eh i r a s a w a 等人从石松科植物千层塔( l y c o p o d i u ms i e b o l d i i ) 中分离到 一个新化合物s i e b o l d i n ea ( 1 4 ) ，该化合物为四环的生物碱，对a c h e 具有强的抑 制活性 1 4 1 。 前言 m e ” 1 4 h o h 2 0 0 3 年，z a h e e r - u l h a q 等人从植物柳时野扇花( s a r c o c o c c as a l i g n a ) 分离到 了1 5 个甾族类生物碱( 1 5 2 9 ) ，这些生物碱性对a c h e 和b u c h e 都有一定的抑 制活性。其中化合物1 8 、1 9 、2 6 、2 7 、2 8 、2 9 对a c h e 抑制的i c 5 0 小于1 00 m o l l 。 以上对a c l l e 抑制活性较强的化合物对b u c h e 也有很强的抑制活性。同时，研 究了这些生物碱与a c l l e 的相互作用，该研究的结果表明，生物碱与a c h e 的相 互作用是通过峡区的疏水作用，而使得生物碱与酶的稳定结合。同时，该研究指 出生物碱的配基不同，与酶结合的灵活性也不同，但并不改变酶的结构”】。 o 竺 异戊烯酰： r 4 升肌一”印卜 惕各酰= 肉桂酰= m e 一 m e 严h ， o h 一 m e 严m 奄 o 瀚 r i = o hr z = h n - - 惕各酰 r 3 = o a c r n ( c h 3 ) 2 r 1 = a o hr z = h n - - 俘各酰r 3 = hr 4 = n i c h 3 2 r t = o hr z = h n - - 苯甲酰 r 3 - hr 4 = n ( c h 3 h r 1 = hr z = n c h 3 c o c h = c c h 3 c h ( c h 3 kr 3 = hr , = n ( c h 3 h r i = hr t = n c h 3 c o c h c c h 3 c h ( c h 3 ) 2r 3 芦hr 4 篁n i c h 3 ) z r i = o hr 产h n - - 苯甲酰r 3 = o a cr - n i c h 3 1 2 r i = o hr z = h n - - 惕各酰r 3 = o a c r 4 = n ( c h 3 1 2 r i = hr z = n h a cr 3 暑hr = n c h 3 1 2 r i = hr 2 = n h c h 3r 3 = hr = n h c h 水 r i = hr z = c h 3 n 内桂酰r 3 = hr 4 = n ( c h 3 ) z r i = hr z = n c h 3 c o c h = c c h 3 c h ( c h 3 ) 2r 3 = h r 4 = n ( c h z ) z r 1 = h r 2 = h n 异戊烯酰r 3 = o a cr 4 = n ( c h 3 2 r ，= hr 2 = h n - 异戊烯酰r 3 - - 一c = or 4 = n ( c h i k r t = hr 2 = h n 惕各酰r 3 = - c = o r 4 = n ( c h 3 ) 2 r ，；hr z = h n - 惕各酰r 3 ；- c = or 4 = n ( c h z ) 2 2 0 0 3 年，m i q b a lc h o u d h a r y 等从从黄杨科植物( b u x u sh y r c a n a ) 的叶子中 分离得到三个新的三萜生物碱3 0 3 2 。这三个新化合物对a c h e 有一定的抑制作 =2伯仃伸俜舶勉：3孔筋；昌盯勰约 前言 用，但是活性很弱，对a c h e 的i c 5 0 大于4 4 3 6a ：1 5 1 l a m o l l 1 16 1 。 o r 八n h h 3 0r = 3 1 琶汉h 。 3 2 r = ( c h 3 ) c h 2 0 0 3 年，i o r h a n 和b s e n e r 从石蒜科植物分离得到包括加兰它敏在内的8 个 生物碱，这些生物碱包括：石蒜碱( 3 3 ) 、水仙花碱( 3 4 ) 、c r i n i n e ( 3 5 ) 、加兰它敏( 3 6 ) 、 3 - e p i h y d r o x y b u l b i s p e r m i n e ( 3 7 ) 、2 - d e m e t h o x y m o n t a n i n e ( 3 $ ) 、n - n o r g a l a n t h a m i n e ( 3 9 ) 、h a e m a n t h a m i n e ( 4 0 ) 。这些生物碱的a c h e 抑制活性与加兰它敏相当。在 1 0j a g m l 的浓度下，对a c h e 都有2 0 , - 4 8 不等的抑制率。 o o o h 之。 o o m e t 入。 上n ， 测 3 4 h o 1 i 八 、0 h ，丫、- m e m 前言 o o o h 3 7 o h o h 之 o 乏。 o o h o m e h 3 9 4 0 2 0 0 4 年，c a r m e ml u c i ac a r d o s o 等人从巴西雨林植物c h i m a r r h i st u r b i n a t e 中分 离到两个具有a c h e 抑制活性的吲哚骨架糖苷生物碱，即化合物t u r b i n a t i n e ( 4 1 ) 和 d e s o x y c o r d i f o l i n e ( 4 2 1 。化合物4 l 和4 2 对a c h e 抑制的i c s 0 分别是0 ik t m o l l 和 1 o v m o l l ，表现出较强的抑制活性。小鼠体内的实验表明，化合物4 l 对a c h e 抑 制的i c 5 0 是1 8 6 r t r n o l l ，而加兰它敏在小鼠体内对a c h e 抑制的i c 5 0 是o 9 2 肛m o l l 1 8 】。 4 1 oo h u o 4 2 u 在尼日利亚南部，文竹兰属植物c r i n u m j a g u s 和c r i n u m g l a u c u m 被传统医药 用于治疗因年老引起记忆力的减退和其它精神性的疾病。2 0 0 4 年，p e t e r j h o u g h t o n 等人从该属植物的茎提取物中分离到具有a c h e 抑制活性的生物碱类化 前言 合物h a m a y n e ( 4 3 ) 和石蒜碱( 4 4 ) 。但是这两个化合物对a c h e 的抑制活性很弱，i c 5 0 分别是2 5 0 f t r n o l l 干 1 4 5 0 1 a m o i f l l l9 1 。 o o o h ： 、o h o o o h 4 3 4 4 2 0 0 4 年，i nk y u n gr h e e 等人通过使用与制备h p l c 偶联的荧光检测器在线 检测技术，从石蒜科娜丽花属n e r i n eb o w d e n i i 甲醇提取物中分离到a c l l e 抑制活 性比加兰它敏更强的生物碱u n g e r e m i n e ( 4 5 ) 。4 5 对a c h e 抑制的i c 5 0 是o 3 5 1 a m o t l 而加兰它敏对a c l l e 抑制的i c 5 0 是2 2 1 a m o l l 2 0 1 。 o 。 o hh王t士厄 e 厂l ( 移 符了一。 箭 芰护州蠢 前言 m 8 q8 1 i 3 3 其它类型化合物作为a c h e 抑制剂 2 0 0 3 年，i j a za h m a d 等人报道，从植物驴臭草属o n o s m a 柚渺f 咖分离到一个 黄烷酮类新化合物8 2 ，在体外的a c h e 活性测试中，该化合物表现出较好的抑制 活性，i c s o 是1 1 6 9 m o l l ，而平行实验的阳性对照药物加兰它敏的i c 5 0 是 3 2 2 p m o i l 。a c h e 抑制活性比加兰它敏强3 倍1 2 9 1 。 m e o h oo m e o m e o ho 8 2 2 0 0 4 年，j u d i t hm r o l l i n g e r 等人报道，基于药效团三维结构模型，利用硅片 高通量筛选技术，从1 1 0 0 0 0 个天然产物数据库中筛选到2 个具有重要应用前景的 a c h e 抑制活性的化合物：7 一羟基一6 一甲氧基香豆素( 8 3 ) 和糖苷7 一羟基一6 一甲氧基香 豆素( 8 4 ) 。虚拟筛选确认有a c h e 抑制活性之后，从草药s c o p o l i ac a r n i o l i c a 分离 。莎 。酽 。$ 前言 到8 3 和8 4 。体内的实验表明，这2 个化合物21 - t m o 注射到小鼠体内，小鼠脑内的 a c h e 水平分别比本底水平低1 7 0 和3 0 0 。前者的药效与阳性对照加兰它敏在 相同浓度下相卦3 0 j 。 o r 、oo 8 3r = h 8 4 r - - 1 3 d - g l u 南非醉茄化合物是在甾醇的骨架上加上一个含有9 个c 组成的内酯配基，已 经报道的有在茄科植物、薯科植物、豆科植物以及些海洋生物中分离得到该类 化合物。2 0 0 4 年，m u h a m m a di q b a lc h o u d h a r y 等人报道，从植物w i t h a n i a s o m r t i f e r a 分离出了6 个南非醉茄化合物。其中化合物8 5 对a c h e 具有中等的抑制活 性。i c 5 0 是5 0 1 a m o l l t 3 ”。 e 8 5 对于a c l l e 抑制剂的研究结果表明，抑制剂的结构类型主要集中在生物碱和 萜类两大类型。从传统的治疗记忆障碍的草药中，很可能寻找到对a c h e 既有抑 制活性的，对毒性较小的化合物。比如，从石蒜科植物中分离的加兰它敏和从石 松科植物中分离到的石杉碱甲等。从真菌的代谢产物中，寻找a c l l e 抑制剂也是 近年来研究的热点，很多化合物的活性比当今临床上使用的药物的活性更强。比 如，t e r r i t r i ma c 对a c h e 的抑制活性为纳摩尔级水平。 2 来源于海洋真菌的新化合物 2 0 0 0 年，k a z u s e ik o m a t s u 等报道，从o k i n a w a n 海洋贝壳中分离的真菌 p e n i c i l l i u ms p ，从该菌株的代谢产物两个具有酚酮骨架的新化合物s c u l e z o n o n e s a ( 8 6 ) 矛f l b ( 8 7 ) 1 3 孙。 o m e o 8 6r = f i 8 7r - - o h 2 0 0 0 年，c a m e r o nj s m i t h 等人报道，从印度尼西亚的海绵的组织中分离到 的海洋真菌。从该株真菌的代谢产物中分离到4 个新的聚酮类化合物： s o c l a d o s p o l i d eb ( 8 8 ) ：s e c o p a t u l o l i d ec ( 8 9 ) ：p a n d a n g o l i d e1 ( 9 0 ) 和p a n d a n g o l i d e 2 ( 9 1 ) 3 3 l 。 h o o o ho h 8 8 o h oo h 9 0 o h o 0 h o o s o h 9 1 前言 2 0 01 年，g e r n o tb r a u e r s 从采集自法国南部海岸的海绵却y s i n aa e r o p h o b a 共 附生的真菌h o r t a e aw e r n e c k i i 的代谢产物中分离得到一个天然产物中少见环系统 的新化合物h o r t e i n ( 9 2 ) ，经测试，该化合物并没有抗大肠杆菌、枯草杆菌、金黄 色葡萄球菌、白色假丝酵母的活性【3 4 】。 9 z 2 0 0 1 年，w i l l i a mf e n i c a l 等报道，从褐藻r o s e n v i n g e as p 表面分离到的新属的 真菌p e s t a t o t i a 。该真菌菌株只有和海洋细菌( c n j 3 2 8 ) 共培养时，才能产生新 化合物p e s t a l o n e ( 9 3 ) 。该化合物具有较好的生物活性，对n c i6 0 肿瘤细胞株的g 1 5 0 为6 0 i _ t m o l l ，对耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌的m i c 仅3 7 n g m l ，对耐万古霉 素的肠球菌的m i c 为7 8 n g m l 。这也暗示了，共培养可作为寻找新抗生素的一种 可行性手段i 弘i 。 9 3 2 0 0 2 年，w i l l i a mf e n i c a l 研究小组从曲霉属a s p e r g i t t u s 海洋真菌( 菌株编号 c n m - 7 1 3 ) 分离到一个新的二倍半萜化合物a s p e r g i l l o x i d e ( 9 4 ) ，该化合物为二倍半 萜化合物( c 2 5 ) 新的骨架。该化合物对人的结肠癌细胞h c t 11 6 仅有弱的细胞 毒活性【3 6 1 。 前言 h 6 ho h 9 4 2 0 0 2 年，r ua n g e l i ee d r a d a 等报道，从印度尼西亚北里海的海绵i x e s t o s p o n g i a e x i g u a 共附生的真菌p e n i c i l l i u mc f m o n t a n e n s e 代谢产物中分离到3 个新的十元 大环内酯化合物9 5 - 9 7 ，其中化合物9 6 对白色假丝酵母具有抑制活性。该文献也 报道了，在海绵体内也同样分离到了这些新化合物吲。 0 hor h o 9 5r = h 9 6r = o h ：9 - 11 - c i s 9 7r = o h ；9 - 1l - t r a n s m e 2 0 0 3 年，w i l l i a mf e n i c a l 等人报道，从采集自巴哈马群岛海洋真菌s c y t a l i d i u m s p 的发酵液中分离得到两个新环六肽化合物s c y t a l i d a m i d e sa ( 9 8 ) 茅i b ( 9 9 ) 。这两 个化合物对h c t - 1 1 6 肿瘤细胞株显示了中等的细胞毒活性i c 5 0 值分别是 2 7 p m o l r n l 和l1 0 p m o f m l l 3 引。 刖鬲 9 8r = h 9 9r - - c h 3 2 0 0 3 年，w i l l i a mf e n i c a l 研究小组报道，从海洋真菌t r i c h o d e r m av i r e n s 的培 养液中分离得到两个新环二肽，t r i c h o d e r m a m i d e sa ( 1 0 0 ) 和b ( 1 0 1 ) 。其中化合物 l o l 对人结肠癌h c t 1 1 6 细胞株显示了较强的细胞毒活性，i c 5 0 是o 3 2 i t g m l 3 9 1 。 2 0 0 4 年，w e n x uj i a o 等人报道，从采集自新西兰坎特伯雷p e g a s u s 海湾盐碱沙 滩的真菌c h a e t o m i u mg l o b o s u m ( 菌株号c a n un 6 0 ) 的培养液中，分离到3 个吲 哚生物碱类新化合物c h a e t o g l o b o s i n s