（药剂学专业论文）洛伐他汀缓释片的研制.pdf

l 目录 f j | i i if ii i ! i i ii ii fi iriil y 19 015 8 5 中文摘要1 英文摘要4 研究论文洛伐他汀缓释片的研究 引言7 第一部分洛伐他汀缓释片的处方及工艺研究 前言8月i j 吾8 材料与方法9 结果2 1 附图2 2 附表2 8 训。 仑3 9 小结3 9 参考文献4 0 第二部分洛伐他汀缓释片的动物药代动力学研究 前言4 1月i j 舌4 1 材料与方法一4 1 结果4 5 附图4 6 附表4 9 词 仑5 7 小结5 7 参考文献5 8 结论5 9 综述洛伐他汀及缓释制剂的研究进展6 0 致谢6 8 个人简历6 9 1 中文摘要 洛伐他汀缓释片的研制 摘要 目的：制备洛伐他汀缓释缓释片剂。 洛伐他汀是第一个上市的h m g c o a 还原酶抑制剂的新型降血脂药 物，临床上主要用于调节血脂和预防冠心病，患者需长期服用，其普通片 剂的血药浓度波动大，维持时间短，而缓释制剂可以克服“峰谷”现象，提 供平稳持久的有效血药浓度，达到起效且维持时间长的目的，并缓解毒副 作用。 本课题以洛伐他汀为模型药物，h p m c 和乳糖为骨架材料，筛选洛 伐他汀缓释片的处方，制备可持续释药的洛伐他汀缓释片。研究洛伐他汀 缓释片在动物体内的相对生物利用度及药动学特征。 方法：建立了洛伐他汀含量测定的h p l c 方法并进行了方法学研究， 用于药物稳定性研究中药物的含量和相关物质的测定。建立了用于测定药 物含量、药物释放度的紫外分光光度法。 参考有关洛伐他汀缓释片的文献，通过预试验制定出基本处方，采用 湿法制粒压片法制备。在此基础上，分别对制备工艺、处方等因素进行单 因素考察，并通过正交实验设计，以释放度，稳定性为评价指标，确定洛 伐他汀缓释片的最佳处方和制备工艺。 进行了质量研究，建立了质量标准。制备了符合质量标准的洛伐他汀 缓释片，进行了稳定性考察，包括影响因素试验，加速试验和室温留样试 验。 建立了动物血浆中洛伐他汀的r p h p l c 测定方法，并进行了方法学 论证。以洛伐他汀普通片为对照，进行了动物药代动力学研究。体外释药 特性的研究以b e a g l e 犬为实验动物，采用随机分组的方法将其分为两组， 分别口服自制的洛伐他汀缓释片和对照的普通片。在预定的时间点经 b e a g l e 犬股静脉取血，并洗脱一周后进行交叉试验。对犬血浆进行预处理 后，采用简便、灵敏、快速的高效液相色谱法，测定血浆中洛伐他汀的浓 度。结果用药代动力学程序3 p 9 7 进行处理，模拟药一时曲线，并计算各 项药代动力学参数。以a u c 、t 协m r t 等为指标，综合评价洛伐他汀 中文摘要 缓释片和对照普通片的相对生物利用度。 结果：通过单因素考察和正交实验，筛选出洛伐他汀缓释片的最佳处 方和制备工艺，在各影响因素中，h p m c 的黏度、粘合剂乙醇溶液的浓 度等对骨架片各指标有影响，通过正交试验设计得到的处方为：a 2 8 3 ，主 药和h p m c 的比例为1 ：2 ，与乳糖的比例为1 ：8 。根据极差大小可知，对 药物释放度的影响程度为a b 。按优化处方和工艺制备洛伐他汀缓释片 3 批进行考察，结果表明该制备工艺稳定，重现性良好。 体外释药实验表明洛伐他汀缓释片l o h 累积释放率达8 8 8 土2 7 ，并 能够进一步释放药物，满足缓释的要求；释药机理研究表明：洛伐他汀缓 释片体外释放曲线符合h i g u c h i 模型和零级动力学方程，药物通过骨架孔 隙扩散释药。 稳定性结果表明，本品在除去外包装情况下，4 5 0 0 l x 光照十天各指 标没有明显变化；温度6 0 条件下放置十天，各指标亦无明显变化； r h 9 2 5 条件下放置十天，相关物质略有增加；即洛伐他汀缓释片对强光、 高温稳定，对高湿不太稳定。采用市售包装于4 0 ，相对湿度7 5 的条 件下放置6 个月，各指标均未见明显变化；室温下放置6 个月，各指标仍 没有明显变化，继续留样观察。以上结果表明，本品于密封、干燥处保存 可确保其质量稳定。 所建立的h p l c 方法的线性范围为5 - - - ，5 0 0 n g m l ，最低检测浓度为 5 n g m l ，以普通片为参比对照，计算各项药动学参数，洛伐他汀缓释片 和普通片的血药浓度达峰时间分别为( 5 3 3 士1 0 5 ) h 和( 3 8 2 4 - 0 4 7 ) h ；达峰浓 度分别为( 7 4 2 1 士1 9 8 5 ) n g m l j 和( 6 9 4 6 士8 3 1 ) n g m l 一；体内滞留时间分别为 ( 1 2 2 + 0 9 6 ) h 和( 8 0 3 + 0 4 3 ) h ；药时曲线下面积( a u c ) 分别为 ( 1 4 0 2 士2 4 4 ) n g h m l d 和( 8 18 + 6 4 ) n g h m l 一。对各项参数进行配对t 检验，结 果表明：洛伐他汀缓释片有明显的延长体内停留时间的作用，可以提高生 物利用度。 结论：以上各项体内外实验证明洛伐他汀缓释片延长了洛伐他汀在体 内的滞留时间，提高了生物利用度，符合h i g u c h i 和零级动力学方程，具 有明显的缓释制剂的特征。且该制剂制备简单、质量可控、工艺稳定，重 现性好，具有很高的实用价值。 中文摘要 关键词：洛伐他汀；骨架凝胶缓释片；稳定性试验；药物动力学 英文摘要 s t u d yo np r e p a r a t i o no fl o v a s t a t i ne x t e n d e d r e l e a s et a b l e t s a b s t r a c t o b j e c t i v e s ：t op r e p a r et h el o v a s t a t i ne x t e n d e d r e l e a s et a b l e t s l o v a s t a t i ni sah m g c o ar e d u c t a s ei n h i b i t o rw h i c hi st h ef i r s tl i s t e dn e w l i p i d l o w e r i n gd r u g s i te f f e c t i v e l ym a k e sp l a s m ac h o l e s t e r o la n dl o w - d e n s i t y l i p o p r o t e i nl o w e ra n dp r e v e n t sc o r o n a r yh e a r td i s e a s e ，p a t i e n t sn e e dl o n g t e r m u s e t h eb l o o dc o n c e n t r a t i o no fc o n v e n t i o n a lt a b l e t s u n s t a b l e ，s h o r t d u r a t i o n ，w h i l et h ee x t e n d e d r e l e a s et a b l e sc a no v e r c o m e t h e “v a l l e y p h e n o m e n o n ，p r o v i d eas t a b l ea n de x t e n d e de f f e c t i v eb l o o dc o n c e n t r a t i o n t o a c h i e v et h ep u r p o s eo fal o n g e ra n ds l o w e re f f e c t s ，a l l e v i a t et o x i c i t ya n ds i d e t h eq u e s t i o nf o rs t u d yu s e sl o v a s t a t i na sm o d e lm e d i c i n e ，h p m ca n d l a c t o b i o s ea ss t e l e t o nm a t e r i a l s w ep r e p a r e dl o v a s t a t i ne x t e n d e d - r e l e a s et a b l e t t h a tc a nf r e em e d i c i n ef o r l o n g e rt i m e s t u d yr e l a t i v eb i o a v a i l a b i l i t ya n d i n t e r n a lp h a r m a c o k i n e t i c sc h a r a c t e ro fe x t e n d e d r e l e a s et a b l e t m e t h o d s ：h p l cm e t h o d sw e r e d e v e l o p e d f o r a s s a y i n g r e l a t i v e s u b s t a n c e s ，s t a b i l i t i e sa n d s oo na n dt h em e t h o d l o g yw a s d e v e l o p e d u l t r a v i o l e ts p e c t r o p h o t o m e t r ym e t h o dw a sd e v e l o p e df o r a s s a ya n dd r u g r e l e a s e o nt h eb a s i so fs c i e n t i f i cl i t e r a t u r e sa n dt h e p r e p r e p a r a t i o n ， l o v a s t a t i ne x t e n d e d - r e l e a s et a b l e t sw e r e p r e p a r e du s i n gw e tg r a n u l a t i o n t a b l e t t i n g m e t h o d a f t e rc h o o s i n gt h es u i t a b l eh p m c ，w eu s eo r t h o g o n a l d e s i g nt os e l e c tt h eo p t i m u mf o r m u l a t i o n a c c o r d i n gt oa c c u m u l a t i v er e l e a s e p e r c e n t a g et os e l e c to p t i m a lf o r m u l aa n dp r e p a r a t i o n q u a l i t ys t u d yp r o c e e d e da n de s t a b l i s h e dt h eq u a l i t ys t a n d a r d t h e r e g u l a rl o v a s t a t i ne x t e n d e d - r e l e a s et a b l e t sw e r ep r e p a r e d w ec a r r i e dt h e s t a b i l i t ye x p e r i m e n t si n c l u d i n g i n f l u e n c ef a c t o r e x p e r i m e n t ，a c c e l e r a t e e x p e r i m e n ta n dl o n g p e r i o dt e s t h p l c m sm e t h o d sw e r ed e v e l o p e dt od e t e c tt h ec o n c e n t r a t i o no f l o v a s t a t i ni np l a s m aa n dm e t h o d o l o g yw a sp r o v e d l o v a s t a t i nc o n v e n t i o n a l t a b l e t sm a d eb yw a n s h e n g b i n g j i n gc h i n aa sar e f e r e n c ep r e p a r a t i o n ，t h e 4 英文摘要 b i o a v a i l a b i l i t ys t u d yw a sp e r f o r m e d p h a r m a c o k i n e t i c ss t u d yi nv i v o ：w es e l e c t e dt h eb e a g l e d o g s a s l a b o r a t o r ya n i m a l ，w h i c hw e r ed i v i d e di n t ot w og r o u p si nr a n d o m o n eg r o u p w a sg i v e ns e l f - m a d es u s t a i n e d r e l e a s et a b l e t s ，a n dt h eo t h e rw a sg i v e n c o n v e n t i o n a lt a b l e t s p l a s m as a m p l e sw e r eo b t a i n e da td i f f e r e n tt i m e s c r o s s o v e re x p e r i m e n tw a st a k e na i d e rt w ow e e k s t h ep l a s m ac o n c e n t r a t i o n l o v a s t a t i nw a sd e t e r m i n e db yh p l c w ed e a l e dd e t e r m i n e dd a t aw i t h3 p 9 7 p h a r m a c o k i n e t i c sp r o c e d u r ea n dc a l c u l a t e dp h a r m a c o k i n e t i c sp a r a m e t e r r e s u l t s ：t h eo p t i m a lf o r m u l a t i o na n dp r o c e s sw e r ed e f i n e dt h r o u g h o r t h o g o n a le x p e r i m e n t sa n dt h ec e n t r a lc o m p o s i t ed e s i g n i tw a sf o u n dt h a t r a t i oo fi - i p m ca n d1 0 v a s t a t i n ，c o n c e n t r a t i o no fc 2 h 5 0 hh a dm u c hm o r e i n f l u e n c eo ni n d e x e so ft a b l e t s 3b a t c ht a b l e t sm a d ef r o mt h eo p t i m a l f o r m u l aw e r ei n s p e c t e d ，t h ee v a l u a t i o ni n d e x e ss h o w e dt h a tt h eo p t i m a l f o r m u l aa n dp r o c e s sh a df i n er e p r o d u c i t ya n ds t a b i l i t y t h ec u m u l a t i v er e l e a s ef r o mt a b l e t si nv i t o rr e a c h e da b o u t8 9 6 4 - 2 9 i n 10h o u r s t h ec u m u l a t i v er e l e a s ep r o f i l ec o u l db ed i s t r i b u t e db yh i g u i c h i e q u a t i o n t h er e l e a s em e c h a n i s ms h o w e dt h a td r u gw a s r e l e a s e db ys m a l la n d c o m p l e xh o l e si n t a b l e t s 砀es t a b i l i t yr e s u l t ss h o w e dt h i sp r o d u c tw a ss t i l ls t a b l et os t r o n gl i g h t r e m o v i n gt h ep a c k a g e ，a n dt h ei n d e xs h o w e d n oo b v i o u sc h a n g ei n4 50 0l x l i g h t s p u t t i n go n6 0 。c f o rt e nd a y s ，i n d e xs i g na s w e l lh a dn oo b v i o u s c h a n g e s p u t t i n go nr h 9 2 5 f o rt e nd a y s ，i n d e xs i g na sw e l lh a dn oo b v i o u s c h a n g e s p l a c e di ns a l e dp a c k i n gi n4 0 c ，r h 7 5 f o r6m o n t h s ，t h ed r u g c o n c e n t r a t i o na n dt h er e l e a s ei nv i t r oh a dn oo b v i o u sc h a n g e s ；p l a c e di ns a l e d p a c k i n gi nr o o mt e m p e r a t u r ef o r6m o n t h s ，t h ed r u gc o n c e n t r a t i o na n dt h e r e l e a s ei nv i t r oh a dn oo b v i o u sc h a n g e s r e s u l t ss h o w e d ，t h i sp r o d u c ti n s u r e d t h eq u a l i t ys t a b i l i t yk e e p i n gi ns e a l e da n dd r y n e s sc o n d i t i o n s t h eh p l cm e t h o dw a sp r o v e dt ob el i n e a ro v e rt h er a n g eo f5 5 0 0 n g m l 1 o fl o v a s t a t i nw i t hl i m i to fq u a n t i t a t i o no f5 n g m l c o m p a r e d w i t hc o n v e n t i o n a l t a b l e t s ，c a l c u l a t e v a r i o u sk i n d so fp h a r m a c o k i n e t i c p a r a m e t e r s t h ep h a r m a c o k i n e t i c sp a r a m e t e r s o ft h el o v a s t a t i n 英文摘要 一一_ 一 e x t e n d e d r e l e a s e t a b l e t sa n d t h ec o n v e n t i o n a l t a b l e t s w e r e ： t m 双( ( 5 3 3 士1 0 5 ) h a n d ( 3 8 2 + 0 4 7 ) h ； c m 瓠( 7 4 2 1 士1 9 8 5 ) n g 。m l 。1 a n d ( 6 9 4 6 士8 31 ) n g m l 1 ；m r t ( 1 2 2 士0 9 6 ) h a n d ( 8 0 3 士0 4 3 ) h ； a u c ( 14 0 2 + 2 4 4 ) n g h m l 以a n d ( 8 18 + 6 4 ) n g 。h m l ，r e s p e c t i v e l y c o n c l u s i o n s ：t h er e s u l t ss h o w e dt h a tl o v a s t a t i ne x t e n d e d - r e l e a s et a b l e t s c o u l dp r o l o n gt h er e s i d e n c et i m eo fd r u gi nb o d y t h ee f f e c t - a c t i n gf a s ta n da l o n gt i m et om a i n t a i n ，a n dr e d u c et h ea d v e r s er e a c t i o n ，i m p r o v et h es a f e t y a n dt h ep r e p a r a t i o np r o c e s sw a ss i m p l e ，f e a s i b l ea n dr e p l i c a b l e c o m p a r e d w i mt 1 1 ec o n v e n t i o n a lt a b l e t s ，l o v a s t a t i ne x t e n d e d r e l e a s et a b l e t sp r o v i d e df o r e q u a lb i o a v a i l a b i l i t y k e yw o r d s ：l o v a s t a t i n ；e x t e n d e d r e l e a s e t a b l e t s ；s t a b i l i t y t e s t ； b i o a v a i l a b i l i t y 研究论文 洛伐他汀缓释片的研制 引言 心血管系统疾病正严重危害着人们的健康和生命，据世界卫生组织报 告，它是当今世界人口的第一大死因。过去医药界防治心血管系统疾病侧 重在降压上，但是随着医药科学的不断发展，人们认识到高血脂、高胆固 醇是发生高血压及冠心病等心血管疾病的主要危险因素。因此，把血脂调 节作为防治心血管疾病的重点，取得了令人瞩目的成果，也牵起了全球性 的调脂治疗的高潮。 在国际医药市场上热销的形形色色的降血脂药物中，他汀居于领先地 位，成为上世纪9 0 年代开发最成功的药物之一。据统计，2 0 0 9 年国际市 场上他汀类药物总销售额约为3 5 0 亿美元，同比增长2 4 。在人们可以 预见的将来，他汀类的降脂药仍将会是国际医药市场上的重要一大类品 种。 缓释制剂是指通过适当方法，延缓药物在体内的释放、吸收、分布、 代谢和排泄过程，从而达到延长药物作用目的的一类制剂。相比之下，常 规制剂用药次数频繁，病人服用不便，而且血药浓度波动较大，会造成“峰 一谷 现象，血药浓度高时，可能会引起某些副作用甚至毒性反应；血药 浓度低时，可能会在治疗有效浓度一下，以致不能呈现疗效。 洛伐他汀主要用于调节血脂、预防冠心病，患者需要长期服用，其普 通片剂的血药浓度较大，维持有效血药浓度的时间较短。它的主要毒副作 用有以下两方面：一、肝脏活动性病变或血清转氨酶持续升高。二、横纹 肌溶解症。此外，还有恶心、消化不良、腹痛、头痛、眩晕等不良反应。 这些副作用虽然作用轻微，但因为该药为长期服用药物，所以也不能轻视。 而缓释制剂可以克服“峰谷 现象，提供平稳而持久的有效血药浓度，达 到起效快并且维持时间长的目的，以缓解毒副作用，所以我们研究制备了 洛伐他汀缓释片。 研究论文 第一部分 洛伐他汀缓释片的制备 屿! l 刖声 洛伐他汀( l o v a s t a t i n ) 化学名为：( s ) 2 甲基丁酸 一( i s ，3 r 7 s ，8 s ，8 a r ) 一1 ，2 ，3 ，7 ，8 ，8 a - 六氢一3 ，7 一二甲基一8 2 - 【( 2 r 4 r ) 一4 - 羟基一6 氧 代一2 四氢吡喃基】乙基) - 1 萘酯。结构式为n 1 ： 图1 洛伐他汀的结构式 洛伐他汀为脂溶性药物，在水中不溶，其水中的溶解度仅为0 4 1 a g m l 。 它是首个上市的h m g c o a 还原酶抑制剂的新型降血脂药物，它可降低 原发性高胆固醇患者的总胆固醇( t c ) 和低密度脂蛋白胆固醇( l d l c ) ， 临床上主要用于杂合性家族性高胆固醇血症，严重原发性高胆固醇血症， 轻型原发性高胆固醇血症等。另外，它还能使己形成的冠心动脉内的粥样 硬化斑块发展减慢，甚至减退，从而改变了冠心病不可逆转的传统观点。 洛伐他汀由美国默克公司开发研制成功，于1 9 8 7 年上市，我国于1 9 9 0 年将其推荐为国家级化学医药新产品，并列入我国“八五 期间的攻关项 目。近几年，国产洛伐他汀原料药有了快速发展，我国是世界洛伐他汀原 料药的主要供应国，在2 0 0 3 年经历了跨越式迈进，至2 0 0 5 年底我国已有 3 2 家企业获得新药证书及生产批件【2 】，2 0 0 7 年洛伐他汀增长率达2 8 。 技术进步、价格下降、渠道通畅，使洛伐他汀成为常见用药。 关于洛伐他汀缓释制剂的研究，国外早有专利及文献报道。a n d r x 公 司研究开发的洛伐他汀缓释片 商品名为a l t o c o r ( l o v a s t a t i n e x t e n d e d r e l e a s et a b l e t s ) 】已通过f d a 批准，于2 0 0 2 年7 月在美国上市。 据该公司发布在f d a 网站上的资料1 3 j 介绍，由洛伐他汀普通片剂( 4 0 m g ) 研究论文 与a l t o c o r ( 4 0 m g ) 连续给药2 8 天后测定的人体药动学参数可知， a l t o c o r 的吸收相明显延长，达峰时间比普通制剂延长了1 1 小时，达 峰血药浓度由7 8 n g m l j 下降至5 5 n g m l ，而生物利用度增长至普通片的 17 0 左右( 以前体药物洛伐他汀计算) 。可见a l t o c o r 可于人体内缓慢 释放，2 4 小时持续发挥更加强效的降血脂作用。 洛伐他汀除了具有显著的降血脂效果外，还能明显地改善内皮细胞的 功能，促进一氧化氮合成酶( e n o s ) 的产生，从而增加n o 的合成和释放，这对 维持人的正常肺血管紧张度和逆转低氧诱导的肺血管收缩和血管重构具 有关键性的作用【4 1 。此外，洛伐他汀具有抗炎和抗增殖的作用，能抑制肾系 膜细胞的增殖和细胞外基质的分泌，从而达到减轻肾小球硬化的目的【5 】。 目前，国内外对他汀类药物的主要临床研究领域有：骨质疏松症治疗、 阿尔茨海默病治疗、心绞痛治疗、器官移植、中风治疗、糖尿病治疗等。 这些新应用领域的研究一旦取得突破，必会为他汀类药物的发展带来新的 契机。 l 仪器与试药 1 1 仪器 甩s h 2 6 a 湿法混合制粒机 7 9 3 型恒温磁力搅拌器 d p 3 0 单冲压片机 z r s 一8 g 型药物溶出仪 d u 6 4 0 紫外分光光度计 高效液相色谱仪 f a 2 0 0 4 型电子天平 1 0 1 a 2 型干燥箱 p 1 型蠕动泵 t o s c o n 空气压缩机 y b 一1 型澄明度检测仪 3 9 1 3 型恒温恒湿仪 材料与方法 中航工业北京航空制造工程研究所 上海司乐仪器厂 北京国药龙立科技有限公司 天津大学精密仪器厂大潭大字精省仪器j 美国b e c k m a n 公司 美国w a t e r s 公司 上海天平仪器厂 上海实验仪器总厂 瑞典p h a r m a c i ab i o t e c h 日本东芝 天津大学仪器厂 美国f o r m as c i e n t i f i c 公司 研究论文 滤器微孔滤膜0 4 5 t m 1 2 药品与试剂 洛伐他汀 羟丙基甲基纤维素 乳糖 b h t 硬脂酸镁 聚乙烯吡咯烷酮 无水乙醇 十二烷基硫酸钠 磷酸二氢钠 磷酸氢二钠 乙腈 冰醋酸 氢氧化钠 盐酸 2 处方前研究 上海医工院 l o v a s t a t i n ，华北制药新药公司 h p m c ，山东瑞泰公司 新西兰- 硼j b 糖- 从 - 司刁罗i 幽二形白h j 武汉银河化工有限公司 天津市永昌盛化工有限公司 p v p ，上海胜铺新材料有限公司 北京化学试剂厂 s d s ，s i g m a 天津市瑞金特化学品有限公司 天津市化学试剂一厂 s kc h e m i c a l s 天津市瑞金特化学品有限公司 天津市瑞金特化学品有限公司 分析纯，北京化工厂 2 1 洛伐他汀的性质 洛伐他汀：英文名称l o v a s t a t i n ；化学名称( s ) 2 甲基丁酸 ( is ，3 r ，7 s ，8 s ，8 a r ) - 1 ，2 ，3 ，7 ，8 ，8 a - 六氢一3 ，7 一二甲基一8 2 - 【( 2 r ，4 r ) 一4 一羟基一6 氧 代。2 四氢吡喃基】- 乙基) 1 萘酯；分子式：c 2 4 h 3 6 0 5 ；分子量：4 0 4 5 5 1 结 构式如下： 本品为白色或类白色结晶或结晶性粉末；无臭、无味，略有引湿性。 在三氯甲烷中易溶，在丙酮中溶解，在乙醇、乙酸乙酯或乙腈中略溶，在 水中不溶。 研究论文 2 2 洛伐他汀的药理作用 洛伐他汀可以抑制h m g c o a 还原酶一胆固醇合成的限速酶，从而阻 断内源性胆固醇的合成，使细胞内的胆固醇含量降低，从而使细胞表面的 l d l 受体数量反馈性地增加，使血液循环中的l d l 颗粒的摄取和降解加快， 使血浆中总胆固醇和极低密度脂蛋i 刍( v l d l ) 、l d l 和甘油三酯减少1 6 1 。 同时，洛伐他汀能增加肝细胞表面低密度脂蛋白( l d l ) 受体的数量和活 性，加快了胆固醇中v l d l ( 极低密度脂蛋白) 、l d l 清除；并且升高h d l ( 高密度脂蛋白) 的含量，从而产生抗动脉硬化的作用。此外，洛伐他汀 还可以抑制细胞增殖，抑制动脉粥样硬化生成，甚至达到消退动脉粥样硬 化斑快作用。 3 试验方法 3 1 高效液相色谱条件 色谱柱：o d s 4 6 x 2 5 0 m m 5 9 m 柱温：室温 流动相：乙腈磷酸盐缓冲液( 取磷酸二氢钠3 4 5 9 ，加水溶解使成 9 0 0 m l ，用磷酸调节p h 为4 0 ，加水稀释至1 0 0 0 m 1 ) 甲醇( 5 ：3 ：1 ) 流速：1 5 m l m i n 1 检测波长：2 3 0 n m 进样量：2 0 9 l 3 2 对照品及供试品溶液的配制 对照品溶液：精密称取洛伐他汀对照品适量，用乙腈一醋酸溶液( 取 冰醋酸3 m l ，加水9 0 0 m l ，用2 0 的氢氧化钠溶液调节p h 为4 0 ，加水稀 释至1 0 0 0 m 1 ) ( 8 0 ：2 0 ) 配成l m l 约含洛伐他汀6 0 1 x g 的溶液。 供试品溶液：取本品2 0 片，精密称定，研细，精密称定适量约1 8 0 m g ( 约相当于洛伐他汀2 0 m g ) ，置1 0 0 m l 容量瓶中，加上述乙腈醋酸溶液 约8 0 m l ，经超声处理2 0 分钟，放至室温，用同一溶液稀释至刻度，摇匀， 经0 4 5 t m 滤膜过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液1 0 m l ，置5 0 m l 容量 瓶中，用同一溶液稀释至刻度，摇匀。 3 3 方法的专属性考察 取空白片2 0 片精密称定，研细，精密称定适量( 约1 6 0 m g ，相当于一片 的辅料量) ，照含量测定项下供试品溶液的制备方法，同法操作，精密量 研究论文 取2 0 1 t l ，注入高效液相色谱仪，记录色谱图( 见f i g 1 ) ；上述供试品溶液 和对照品溶液各进样2 0 p , l ，记录色谱图( 见f i g 2 , f i g 3 ) ，结果表明辅料不干 扰洛伐他汀的含量测定。 3 4 系统适用性试验 1 ) 柱效：该条件下洛伐他汀的保留时间( t r ) 为1 5 0 m i n 左右，理论塔板 数按洛伐他汀计算为6 9 0 2 。 2 ) 拖尾因子：洛伐他汀峰，拖尾因子为1 0 4 。 3 5 回收率实验， 取空白片2 0 片，研细，称取9 份，每份约1 6 0 m g ，分别置于1 0 0 m l 容量 瓶中，加入准确称量的洛伐他汀，照3 2 项下供试品溶液的制备方法分别 配成浓度约为3 2 、4 0 、4 8 p g m l d 的溶液。取供试品溶液与对照品溶液各 2 0 1 a l ，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算回收率。 结果见t a b l e1 。 3 6 线性关系与范围 精密称取洛伐他汀对照品适量，用上述乙腈醋酸溶液分别配成浓度为 1 0 、2 0 、4 0 、6 0 、8 0 、1 0 0 1 t g m l 。溶液。每个浓度进样2 次，各取2 0 k t l 注 入液相色谱仪，色谱条件同上，记录色谱图，以峰面积对浓度拟合，拟合方程 为： y - - 4 3 2 1 1 6 5 x 1 3 3 1 8 6 2r = 0 9 9 9 9 结果：洛伐他汀在1 0 1 0 0 p g m l j 范围内，峰面积与浓度呈现良好的线 性关系，标准曲线见f i g 4 。 3 7 灵敏度的测定： 当信噪比为3 1 时，洛伐他汀的最低检测限为0 2 5 n g ，最低检测浓度为 5 n g m l 。1 ( 见f i g 5 ) 。 3 8 溶液稳定性 取洛伐他汀缓释片研细粉适量，用超纯水配制成浓度为o 4m g m l 以 溶液；滤过，滤液室温放置，每隔一定时间进样分析，考察溶液的稳定性， 结果见t a b l e2 。 结果表明：在室温情况下( 2 0 。c - 3 0 ) ，溶液放置8 小时稳定。 3 9 样品含量测定 取本品2 0 片，精密称定，研细，精密称取适量( 约相当于洛伐他汀 研究论文 2 0 m g ) ，置1 0 0 m l 容量瓶中，加上述乙腈一醋酸溶液约8 0 m l ，经超声处 理2 0 分钟，放至室温，用上述溶液稀释至刻度，摇匀，经0 4 5 9 m 滤膜 过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液1 0 m l ，置5 0 m l 容量瓶中，用同一溶 液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取供试品溶液与对照品溶液各 2 0 i _ t l ，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算含量。 4 释放度测定方法 4 1 释放度测定方法的确立 4 1 1 释放度测定装置和条件 照中国药典2 0 0 5 版二部附录x d ( 释放度测定法) 第一法( 缓释制 剂或控释制剂) ，采用溶出度测定法第一法( 篮法) 的装置进行测定，转 速为每分钟1o o 转。 4 1 2 释放介质的选择 参考专利u s 5 3 6 6 7 3 8 控释给药系统中洛伐他汀缓释片释放度测定 方法中的溶出介质，并根据国外对照品a l t o c o r 的体外溶出情况，确 定释放介质为含o 2 十二烷基硫酸钠的磷酸盐缓冲液( p h 7 o ) 。 4 1 3 测定波长的选择 精密称取洛伐他汀对照品适量，用磷酸盐缓冲液( 取磷酸二氢钠1 3 8 9 和十二烷基硫酸钠2 9 ，加水溶解使成9 0 0 m l ，用1 m 的氢氧化钠溶液调节 p h 为7 0 ，加水稀释至1 0 0 0 m 1 ) 配成l m l 约含1 0 l a g 的溶液，在2 0 0 4 0 0 n m 范围内扫描，最大吸收波长为2 3 7 n m ( 见f i g 6 ) 。 4 1 4 检测方法的选择 取空白片1 片，按释放度方法进行试验，于1 2 小时取样，取滤液在 2 0 0 4 0 0 n m 范围内扫描，2 3 7 n m 波长处的吸收值为0 0 0 5 ( 见f i g 7 ) ，故 辅料不干扰测定。因此，可以采用紫外法进行测定。 4 1 5 释放度测定方法 照中国药典2 0 0 5 版二部附录x d 第一法，采用溶出度测定法第一法 的装置，溶出介质为磷酸盐缓冲液( 取磷酸二氢钠1 3 8 9 和十二烷基硫酸 钠2 9 ，加水溶解使成9 0 0 m l ，用1 m 的氢氧化钠溶液调节p h 为7 0 ，加 水稀释至1 0 0 0 m 1 ) 9 0 0 m l ，转速为1 0 0 r a d m i n ，依法操作，在1 ，2 ，3 ， 4 ，5 ，6 ，7 ，8 ，9 与1 0 小时分别取溶液5 m l ，经0 4 5 9 m 滤膜过滤，弃 去初滤液，续滤液作为供试品溶液( 当吸收值超过o 8 时需适当稀释) ， 研究论文 并及时在操作容器中补充磷酸盐缓冲液5 m l ；另精密称取洛伐他汀对照品 适量，用少量乙醇溶解，加上述磷酸盐缓冲液制成每l m l 中约含1 0 9 9 的 溶液；取上述两种溶液，照分光光度法( 中国药典2 0 0 5 版二部附录i v a ) ， 在2 3 7 n m 波长处分别测定吸收度，按二者吸收度的比值计算出每片在不 同时间的释放量。求出平均值，以不同时间的释放率绘出释放曲线，以考 察该片剂的释放度。 释放率计算： 释放率( ) = 样品吸收度对照品浓度x 9 0 0 丽磊面丽i 面磊菊广川o 4 2 释放度测定方法的方法学研究 4 2 1 方法的可靠性考察 取空白片1 片，按释放度方法进行试验，于1 2 小时取样，取滤液在 2 0 0 4 0 0 n m 范围内扫描，2 3 7 n m 波长处的吸收值为o 0 0 5 ( 见f i g 7 ) ，故 辅料不干扰测定。 4 2 2 供试品溶液稳定性 精密称取洛伐他汀对照品适量，用上述磷酸盐缓冲液配成浓度为4 、 8 、1 2 t g m l 。1 的溶液，于3 7 。c 下放置4 、8 、1 2 和2 4 h ，测定吸收度值，与 o h 比较几乎无变化，见t a b l e3 。 4 2 3 线性关系与范围 精密称取洛伐他汀对照品适量，用上述磷酸盐缓冲液配成浓度为2 、 4 、6 、8 、1 0 、1 2 1 t g m l 。1 的溶液，在2 3 7 n m 波长处测定紫外吸收，以吸收 度对浓度进行拟合( 见f i g 8 ) ，拟合方程为： a = 0 0 618 c + o 0 0 8 5r = 0 9 9 9 9 结果：洛伐他汀在2 1 2 t g m l 。范围内，吸收度与浓度呈现良好的线性关系。 4 2 4 回收率实验 精密称取洛伐他汀对照品适量，按处方比例加入辅料，用上述磷酸盐 缓冲液配制成浓度为3 、6 、1 0 t g m l j 的溶液，在2 3 7 n m 波长处测定紫外 吸收，并计算回收率，结果见t a b l e4 。 4 2 5 精密度 取同一批样品，以及p h 7 0 磷酸钠缓冲液为溶剂，按释放度测定法测 定6 次，结果( 见t a b l e5 )