（分析化学专业论文）荧光、流动注射荧光法用于药物分析的研究与应用.pdf

独创声明 5 9 8 8 1 c 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包 含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得 ( 注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空) 或其他教育机构的学位或证书 使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作 了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：疆金鸯导师签字： 名剀心 签字日期：2 0 0 4 年4 月2 6 日签字日期：2 0 0 4 年年月2 日 山东师旭人学坝l 论殳：荧光、i j f c 动沌身j 荧光法用于药物分析的研究i m 用 摘要 荧光分析法以其灵敏度高、选择性好、取样量少、重现性好、仪器设备简单不昂贵等 特点，近年来被广泛应用于各种药物制剂和生物体液中的药物分析中。 荧光分析法用于药物分析主要包括直接测定法和间接测定法。直接测定法主要适用于 药物本身具有很强的荧光，直接通过测定药物的荧光建立荧光分析法。间接测定法是出于 大部分药物本身无荧光或者在水溶液中的荧光量子产率低，无法直接测定药物荧光，必须 通过加入其它试剂提高药物的荧光量子产率而建立的荧光分析法。间接测定法主要分为化 学反应衍生法，加入表面活性剂增敏法，与环糊精形成包合物增敏法等。 流动注射分析是7 0 年代中期诞生并迅速发展起来的溶液自动在线处理及测定的现代 分析技术。它具有微量、密闭、重现性好和快速的优点，且具有广泛的适应性，可与多种 检测手段连用，受到越来越多研究者的重视。 将流动注射技术与荧光检测相结合，建立一种在线、快速、简单、灵敏度高、选择性 好的流动注射荧光法测定药物将具有很重要的意义。 综上，本文丌展了三方面的研究： ( 一) 详细探讨了各种表面活性剂对甲氧氯普胺荧光光谱性质的影响，并进行了较为 系统的机理研究。利用阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠( s d s ) 对甲氧氯普胺荧光发射 的增敏作用，建立了水溶液中直接测定甲氧氯普胺的荧光光度法，成功用于片剂、针剂及 血清中甲氧氯普胺含量的测定。 ( 二) 利用荧光光谱法研究了生物降脂药吉非罗齐与b 一环糊精间的超分子作用机 制。制备了b 一环糊精一吉非罗齐包合物，对包和物进行了1 h m r ，i r 结构表征。结果表 明b 一环糊精、吉非罗齐可形成1 ：1 的超分子包合物，对超分子包结反应进行了热力学研 究，探讨了各热力学参数的变化趋势：利用水相中b 一环糊精与吉非罗齐形成包合物的荧 光增敏作用，建立了水溶液中高灵敏度测定吉非罗齐的荧光光度法，并成功用于药物制剂 及血清中吉非罗齐的测定。 ( 三) 将流动注射分析与荧光法相结合，利用流动注射荧光光谱法研究了b 环糊精 与吉非罗齐及地喹氯铵间的超分子相互作用。利用水相中8 一环糊精与吉非罗齐及地喹氯 铵形成包合物的荧光增敏作用，建立了水溶液中高灵敏度测定吉非罗齐及地喹氯铵的流动 注射荧光光度法，并成功用于药物制剂及血清中吉非罗齐及地喹氯铵的测定。 关键词：b 一环糊精，表面活性剂，药物，荧光分析流动注射技术 些堡! ! ! ! ! 些叁兰丝! ：堡兰：鉴垄：坐苎! ! ! ! 塑篓垄! ! ：型! ：塑! ! 坌堕堕坐! ；：! ! ：坐 a b s t r a c t t h es p e c t r o f l u o r i m e t r i cm e t h o dh a sb e e nw i d e l y u s e di nt h ed e t e r m i n a t i o no f p h a r m a c e u t i c a la n a l y s i ss i n c ei t i sh i g h l ys e n s i t i v e ，s e l e c t i v e ，b e t t e rr e p r o d u c t y ，e a s i l yo p e r a t e d a n de c o n o m i c a tp r e s e n tt h es p e c t r o n u o r i m e t r i cm e t h o df o r t h ed e t e r m i n a t i o no fp h a r m a c e u t i c a l i n c l u d e d ：d i r e c t l ys p e c t r o f l u o r i m e t r i c d e t e r m i n a t i o na n di n d i r e c t l y s p e c t r o n u o r i m e t r i c d e t e r m i n a t i o n d i r e c t l ys p e c t r o n u o r i m e t r i cd e t e r m i n a t i o ni su s u a l l yu s e dw h e nt h ed r u gh a s f l u o r e s c e n c e b u tm o s to f t h ed r u g sh a sl o wf l u o r e s c e n c eq u a n t u my i e l d s os o m er e a g e n t sm u s t b ea d d e dt op r o d u c ef l u o r e s c e n c e a n dt h ei n d i r e c t l ys p e c t r o m i o r i m e t “cd e t e r m i n a t i o nm a i n l y i n c l u d e ：d e r i v a t i o nf r o mt h er e a c t i o nb e t w e e nt h ed r u ga n dt h er e a g e n t s ，m i c l l e - e n h a n c e d s p e c t r o f l u o r i m e t r ya n d 3 - c d e n h a n c e ds p e c t r o f l u o r i m e t r y f l o wi n j e c t i o n ( f i ) m e t h o d ，w h i c hc a ng e to n l i n ea n da u t o m a t i ca n a l y s i s ，h a sm a n ym e r i t s s u c ha sh i g hr e p r o d u c i b i l i t ya n dr a p i d i t y , a n dh a sb e e nw i d e l yu s e di nm a n yf i e l d s s ot od e v e l o pas i m p l e ，r a p i d ，s e n s i t i v ea n ds e l e c t i v ef l o wi n j e c t i o ns p e c t r o f l u o r e m e t “c m e t h o dt od e t e r m i n ed r u g si sh i g h l yd e s i r a b l e b a s e do nt h ec o n c e i v ea b o v e ，w eh a v ec a r r i e do u tt h r e ea s p e c t so fi n v e s t i g a t i o n ： f i r s t l y ，t h ei n f l u e n c eo fm i c e l l em e d i u mo nt h ef l u o r e s c e n te x c i t a t i o na n d e m i s s i o ns p e c t r a c h a r a c t e ro fm e t o c l o p r a m i d e ( m c p m ) w a ss t n d i e d t h ep o s s i b l ee n h a n c e m e n tm e c h a n i s mw a s d i s c u s s e d b a s e do i lt h ee n h a n c e m e n to ft h ef l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yo fm p c m ，as i m p l e ，r a p i d ， s e n s i t i v ea n ds e l e c t i v es p e c t r o f l u o r i m e t r i cm e t h o dh a sb e e nd e v e l o p e df o rt h ed e t e r m i n a t i o no f m c p m t h ep r o p o s e dm e t h o dw a ss u c c e s s f u l l ya p p l i e dt ot h ed e t e r m i n a t i o no fm c p mi n t a b l e t s ，i n j e c t i o n sa n d s e r u m ， s e c o n d l y ，t h es u p r a m o l e c u l h ri n t e r a c t i o no fg e m f i b r o z i la n d3 - c y c i o d e x t r i n ( p c d ) h a s b e e ns t u d i e db ys p e c t r o f l u o r i m e t r y t h em e c h a n i s mo ft h ei n c l u s i o nw a sd i s c u s s e db y s p e c t r o f l u o r e m e t r y ，i n f r a r e ds p e c t r o g r a m sa n d1 h n m rs p e c t r o s c o p y t h er e s u l t ss h o w e dt h a ta 1 ：1 ( 1 3 - c d ：g e m f i b r o z i l ) c o m p l e xw a sf o r m e d b a s e do nt h ee n h a n c e m e n to ft h ef l u o r e s c e n t i n t e n s i t yo fg e m f i b r o z i l ，as e p c t r o t l l i o r i m e t “cm e t h o df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fg e m f i b r o z i li n b u l ka q u e o u ss o l u t i o ni nt h ep r e s e n c eo f1 3 - c dw a sd e v e l o p e d t h ep r o p o s e dm e t h o dw a s s u c c e s s f u l l ya p p l i e dt ot h ed e t e r m i n a t i o no fg e m f i b r o z i li nc a p s u l e sa n ds e r u m t h i r d l y ，b a s e d0 nt h e 3 - c de n h a n c e m e n to ft h ef l u o r e s c e n c ei n t e n s i t y ，f l o wi n j e c t i o n 山东帅范人学蛳j 论文：荧光、流动滓射荧光泣用十药物分析的 i j | = 究，心用 s e p c t r o f l u o r e m e t r i cm e t h o d sf o rt h ed e t e r m i n a t i o no fg e m f i b r o z i la n dd e q u a l i n i u mc h l o r i d ew a s d e v e l o p e dr e s p e c t i v e l y k e y w o r d s ：b c d ，s u r f a c t a n t s ，d r u g s ，s p e c t r o f l u o r i m e t r y ，f i a - a n a l y s i s 山尔帅范人掌f | j ；! i 。论文：荧光、流曲f p 刺荧光法用j 一药物分析的川允，、i 用 第一章绪论 在药物学中，紫外分光光度分析和气相、液相色谱法是药物分析的基本检测技术，但 自2 0 世纪7 0 年代以来特别是近年来荧光分析法以其灵敏度高、选择性好、取样量少、重 现性好、仪器设备简单不昂贵等特点，被广泛应用于各种药物制剂和生物体液中的药物分 析中。 荧光分析法用于药物分析主要包括直接荧光测定法和叫接荧光测定法。直接测定法主 要适用于药物本身具有很强的荧光，直接通过测定药物的荧光建立荧光分析法。间接测定 法是由于大部分药物本身无荧光或者在水溶液中的荧光量子产率低，无法直接测定药物荧 光，必须通过加入其它试剂提高药物的荧光量子产率而建立的荧光分析法。间接测定法主 要分为化学反应衍生法，加入表面活性剂增敏法，与环糊精形成包合物增敏法等。 1 ，直接荧光法用于药物分析 普通荧光法即直接荧光测定法，主要适用于药物本身具有很强的荧光强度，直接通过 测定药物内源荧光建立的荧光分析法。但是由于大部分药物本身无荧光或者在水溶液中的 荧光量子产率很低，故普通荧光法直接用于药物分析应用不是很j “泛 。3 1 。 2 化学衍生荧光法用于药物分析 大部分药物本身无荧光或者在水溶液中的荧光量子产率很低，不能直接进行荧光测定。 利用化学衍生法可以使一些本身无荧光的药物转变成具有强荧光的物质，利用荧光法进行 测定。 利血平是一种具有平压和镇静作用的药物，本身不发荧光，但当受到某些氧化剂作用 时，会形成具有荧光的氧化产物，然后采用荧光检测，据此可以建立商灵敏度的测定方法。 卡马西平是一种常用的抗惊厥药物，本身不发荧光，通常采用氧化或其它方法将分子中的 碳碳双键破坏后进行荧光测定【4 。潘祖亭等将电化学方法与荧光光度法相结合，通过电解 产生的m n o t - - 离子氧化卡马西平，而建立了一种新的测量卡马西平的分析方法吼周采菊f 6 1 报道了用a r 离子测定环丙沙星的荧光分析法。刘建群1 7 i 提出了测定人体尿液中芦氟沙星 的e u ”离子敏化荧光法，研究了芦氟沙星在 i a c 介质中被i f l 0 ：氧化的反应机理时，在近中 性i - i a c - - n a a c 缓冲溶液中芦氟沙星氧化产物与e u ”、e d t a 形成三元络合物，产生e u 。+ 离子 的特征荧光，其荧光强度与芦氟沙星的浓度呈线性关系。 3 表面活性剂增敏荧光法用于药物分析 表面活性剂是能够显著降低水的表面张力的一类物质，表面活性荆不仅可以强烈的吸 附在水而上，也会吸附在其它各种界面上，而且这种吸附1 2 1 - t ：是订一定取向的州j ：足山j ： 4 i 尔帅范人掌f ! j ! i ? 论史：荧光、流动沣射荧光法用十药物分析的f j f 冗应用 分子的这种定向吸附，使得表面活性剂具有改变表面涧湿性能、乳化、破乳、起泡、消泡 分散、絮凝等多方面的作月 | 。另一方面，表面活性剂超过了某一特定浓度就会在溶液内部 缔合形成分子集团，即所谓的胶团，因此又叫缔合胶体。正是由于这种缔合胶体的存在， 使得表面活性剂具有独特的增溶其它不溶于水的有机物的作用。 表面活性剂对化学体系具有增溶、增敏、增稳的特性，在水中营造的环境与环糊精相 似，利用表面活性剂荧光增敏法进行药物测定逐步受到更多的研究者的重视。唐波【8 1 等利 用曲拉通一1 0 0 ( t r i t o nx 一1 0 0 ) 做增敏剂测定了药物制剂中扎来普隆含量的测定。e g o n z o l e z p e n a s f o ) 等利用表面活性剂b i i - - 3 5 增敏法测定了药物制剂中的吉非罗齐的含量。 4 环糊精用于荧光法测定药物分析 4 1 环糊精单体用于荧光法测定药物分析 环糊精( c y c l o d e x t r i n ，b c d ) 具有独特的“内疏水，外亲水”的分子结构，这种 特殊的结构赋予环糊精与多种形状、大小适合的疏水性客体形成包合物的能力，并能改善 客体的物理、化学、生物学等性质：利用其独特的包结、识别功能，环糊精己成为构筑人 工酶的首选模型。 溶液中环糊精和药物分子形成包和物后，被包结的药物分子处于一个相对的低介电常 数的微环境中，此时药物分子的性质将发生一系列的变化，如其光学性质：吸收光谱，旋 光性，荧光等都会产生一定的变化。利用其独特的包结作用，环糊精在药物分析方面的研 究很是引人注目。 药物分子被环糊精包结后，体系的荧光强度明显增大，这种增敏作用是由于药物分子 在疏水相互作用、范德华力及氢键力等非共价相互作用的驱动下，进入环糊精空腔形成超 分子包和物后，环糊精空腔提供的非极性微环境近似于有机介质，在空腔内药物分子的运 动自由度以及水分子的松弛效应大大降低，阻止了碰撞失活，减少了非辐射跃迂的几率， 同时药物分子的荧光单重态在环糊精空腔中受到保护与屏蔽，减少了与腔体主体溶液中水 分子、氧等猝灭剂的接触。 四环素类抗菌素、青霉素类抗菌素均是临床上应用极为广泛的药物，这些药物在水相 介质中的荧光强度均较弱，且发射波长范围宽，不曲：直接采用荧光法测定。研究发现青霉 素类抗菌素的水溶液及四环素类抗菌素的酸性降解产物在定条件下加入b 一环糊糟后 荧光强度显著增强，且峰形尖锐，易于测定。 一些脂溶性的维生素如维生素a i o l 、维生索l ( = l i 等均难溶于水且室温下溶液无荧光发 射，但与b 一环糊精或y 环糊精形成包和物后，即便在空气饱和的水溶液巾也可进行荧 山东| j l | 池人学坝i | 殳：使光、流动 i - 蚶荧光浊川十药物分材r 的i j j | 。冗。m 川 光检测。 潘祖亭利用b 一环糊梢一1 ，2 一二溴乙烷混合体系作增敏剂，首次提出了用荧光光 度法测定阿苯达唑含量的测定方法，并利用本法测定了肠虫清片剂中的有效成分阿苯达哗 的含量。另外，唐波陋m 】等在研究b 一环糊精与药物相互作用及其分析应用方面做了大量 的工作，研究比较详细，全面。 4 2 桥联环糊精用于荧光法药物分析 桥连环糊精对模型底物的键和能力及分子选择性的研究是超分子体系中的分子识别 领域的一个重要方面【17 - 2 7 1 。环糊精单元通过特定的链连接之后，两个棚邻的环糊精空腔有 可能协同参与对形状和尺寸适合的客体分子的包结配位作用，从而扩展分子键和能力，提 高超分子话a 合物的结合常数。因此，开发新型桥联环糊精，用于拓宽药物荧光分析的范围， 提高选择性和灵敏度将具有很重要的意义。 5 流动注射分析技术用于药物荧光分析 流动注射分析是7 0 年代中期诞生并迅速发展起来的溶液自动在线处理及测定的现代 分析技术。它具有微量、密闭、重现性好和快速的优点，且具有广泛的适应性，可与多种 检测手段连用，受到越来越多研究者的重视。 流动注射荧光法，既结合了荧光分析法诸如灵敏度高，选择性、重现性好，取样量少， 方法简洁等优点，又吸纳了流动注射分析法( f i a ) 具有的微量、密闭、重现性好和快速的优 点其中流动注射作为试液和荧光检测器之问的界面，既可以完成简单的进样操作，又可实 现诸如稀释、分离和预浓集等溶液操作的自动化：f i a 本身的封闭性可防止氧的猝灭，可给 出更明显的识别信号，并且显著改善荧光分析的条件，而停流技术的采用使运用化学动力 学进行的定量荧光分析更为方便。 将流动注射技术与荧光检测相结合，建立一利r 在线、快速、简单、灵敏度高、选择性 好的流动注射荧光法测定药物将具有很重要的意义。 6 结论与研究展望 综上所述，荧光分析法以其灵敏度高、专属性强的优点目前已被广泛用于药物的测定 工作，这在很大程度上改变了药物分析的现状，特别是各种新型荧光分析仪器的问世和新 型荧光分析方法的提出，使荧光分析法不断朝着高效、痕量、微观和自动化的方向发展。 可以预计今后囤内外相关研究将会侧重于以下几个方面： ( 1 ) j - l ：发更多专属性的识别药物子的化学试剂，建立商灵敏度、l 岛选择性测定药物 的荧光分析法。 山东帅似人学坝i 论义：荧光、流曲沣9 j 荧光法用十药物分析的究，oj * 用 ( 2 ) 丌发新型桥联环糊精，拓宽药物荧光分析的范围，提高选择性与灵敏度。 ( 3 ) 将流动注射技术的稀释、分离和预浓集等溶液操作的自动化与荧光检测相结合， 建立在线、快速、简单、灵敏度高、选择性好的测定药物流动注射荧光法。 总之，荧光分析法应用于药物分析应用于药物分析不仅大大降低了分析成本，简化了 分析手续，而且改善了分析条件，拓宽了荧光分析的应用领域。可以认为，随着荧光分析 方法的不断完善和发展，荧光分析必将对药物分析产生更深远的影响。 参考文献 1 马丽花等，光谱学与光谱分析，1 9 9 9 ，1 9 ：2 3 0 2 杨梅等，分析试验室，2 0 0 0 ，1 9 ：6 6 3 m i y a z a k ik e ta 1 ，c h e m p h a r m b u l l ，1 9 7 9 ，2 7 ：2 2 7 4 d e l ap e n al e ta 1 ，a n a l c h e m ，1 9 9 0 ，3 3 8 ：8 2 1 5 潘祖亭等，分析化学，1 9 9 8 ，2 6 ：9 9 7 6 周采菊等，药物分析杂志，1 9 9 8 ，8 ：2 0 0 7 刘建群等，分析测试学报，2 0 0 1 ，2 0 ：7 7 8 b t a n g ，x w a n g ，b x j i a ，j yn i u ，yw c i ，z z c h e n ，yw a n g ，a n a l y t i c a ll e t t e r s ， 2 0 0 3 ，3 6 ：2 9 8 5 9 e g o n z o l e z p e n a s ，s a g a r r a b e r e s ，a l o p e z o c a n z ，e g a r c i a - q u e t g l a s ，m a c a m p a n e r o j + j c a r b a l l a la n dj h o n o r a t o ，j p h a r m b i o m e d a n a l ，2 0 0 1 ，2 6 ：7 10 】d a l e m e r ，b d c a s t i l l o ，s m u n o z b o t e l l a ，a n a l c h i m a c t a ，2 2 7 ( 19 8 9 ) 2 9 7 1 1 j j b e r z a s n e v a d o ，j a m u r i l l op u l g a r i n ，m a g o m e z l a g u n a ，t a l a n t a ，2 0 0 1 ：9 5 1 1 2 潘祖亭等，分析试验室，1 9 9 9 ，1 8 ：8 3 1 3 b t a n g ，l m a ，h yw a n g ，g yz h a n g ，j a g r f o o d c h e m ，5 0 ( 2 0 0 2 ) 1 3 5 5 1 4 b t a n g ，l m a ，c m a ，t a l a n t a ，5 8 ( 2 0 0 2 ) 8 4 1 i5 b t a n g ，lm a ，c c h u ，a c t ac h i m i c as i n i c a ，6 0 ( 2 0 0 2 ) 18 3 4 l6 l m a ，b t a n g c c h u ，a n a l y t i c ac h i m i c aa c t a ，4 6 9 ( 2 0 0 2 ) 2 7 3 1 7 t a b u s h ii ，k u r o d ay ，s h i m o k a w ak j a m c h e m s o c ，1 9 7 9 ，1 0 1 ：1 6 1 4 1 8 l i uy ，l ib ，w a d at s u p e r m 0 1 c h e m ，1 9 9 9 。1 0 ：2 7 9 1 9 l i uy ，y o uc c ，c h e ny j o r g c h e m ，1 9 9 9 ，6 4 ：7 7 8 1 2 0 b r e s l o wi t ，g r e e n s p o o nn ，g u ot i a m s o c ，1 9 8 9 ，1l l ：8 2 9 6 2 1 l i uy ，c h e ny ，l ib c h e m g u r j ，2 0 0 1 7 l 尔帅犯人学坝i 。论殳：荧光、涮l 勒注射荧光法用十药物分析的f i l l 究o 心川 c 2 2 2 3 2 4 9 5 2 5 2 6 2 7 il n n g 、j l a n g l i uy l i uy 卜e i i l lc - i d ux z 1 ，s u k u m a r a ni ) k ，s n n is d l j a m c h e m ，1 9 9 4 ，5 9 ：5 【4 9 t ，l a w r e n c ed s j a m c h e m s o c ，1 9 9 5 ，1 1 7 ：1 8 5 7 w uc t x u eg p j i n c l u s i o np h e n o m m a c r o c y cc h e m ，y o uc ，c ，w a d at t e t r a h e d r o nl e t t ，2 0 0 0 ，4 1 ：6 8 6 9 r a ，c l i n el o v el j j c o l l o i da n di n t e r f a c es c i ，1 9 8 5 ，1 0 8 ：2 7 1 ，z h a n gy b ，h u a n gx z ，c h e ng z s p e c t r o c h i m a c t a ，1 9 9 7 5 3 ：6 7 1 山东| j i | j 范人学 ! j ! l ：i s 史：荧光、流动f t 别荧光泣f j 卜药物分析的l i j 究1 jj , ；z 用 第二章胶束介质中甲氧氯普胺荧光增敏机理研究及其分析应用 摘要研究了胶束介质中甲氧氯普股荧光光谱，探讨了表面活性剂对甲氧氯普胺荧光增敏 的机理，发现十二烷基硫酸钠( s d s ) 对甲氧氯普胺荧光有较强的增敏作用，荧光量子产 率可提高3 倍。建立了简单、快速、灵敏度与选择性好的测定甲氧氯普脏的荧光分析法， 方法线性范围6 7 1 1 0 4 4 0 0 1 t g m l ，检出限2 0 l 1 0 p g m l ，相对标准偏差o 5 0 ，常 见药物赋形剂及血清中主要成分不产生干扰：方法用- p n 定片剂、针剂及血清样品中甲氧 氯普胺的含量，结果令人满意。 关键词甲氧氯普胺， 胶束增敏，荧光测定 1 引言 甲氧氯普胺( m e t o c l o p r a m i d e i c p m ) ，其化学名称为胪 ( 2 一二乙氨基) 乙基卜4 一氨基 一2 一甲氧基一5 一氯一苯甲酰胺( 图式1 ) ，为消化机能异常治疗药和镇吐药，主要用于恶心、 呕吐、暖气、胃部胀满、胃酸过多等症状，在临床上有重要作用。目前其主要的测定方法 有分光光度法“，高效液相色谱法2 “，流动注射化学发光法”。荧光分析法因灵敏度 高，选择性好，方法简捷，重现性好，取样量少，仪器设备简单等优点，己广泛应用于药 物的分析及测定。目前应用荧光法测定药物主要有三个方面：直接测定法，加入环糊精形 成包合物法“删，以及加入各种表面活性剂荧光增敏法“1 1 。本文通过各种表面活性剂对甲 氧氯普胺的荧光增敏作用研究，发现表面活性剂十二烷基硫酸钠( s o s ) 对其荧光有较强 的增敏作用，荧光量子产率可提高3 倍，由此建立了测定甲氧氧普胺的荧光分光光度法。 该方法直接用于片剂、针剂及血清中甲氧氯普胺的测定，结果令人满意。 0 厂c h 3 l c 心 图式1 甲氧氯普胺的化学结构式 2 实验部分 2 1 仪器与试剂 c a r ye c l i p s e 型荧光分光光度计( v a r i a n ) ，仪器工作的激发发射通带均为5 n m ：p h s 9 山尔l j | 】越凡# 坝i 沦殳：越j 匕、洫r 以汴q j 佚光法丌1 十拍物仆 j m o m l 冗川 - - 3 c 型峻度计( 上海雷磁仪器厂) 。j y w 一2 0 0 c 张力仪( 承悠试验有机责任公司) 。 甲氧氯普胺( 北京双桥药业，含量9 9 9 8 ) 标准溶液( 0 2 0 0 m g m l ) ：精确称取 0 0 2 0 0 0 9 ，1 0 m l2 o o m o l l h 2 s 0 4 溶解，二次水定容至1 0 0 m l 用时加以稀释；p h = 7 8 0 的t r i s h c l 缓冲溶液( 0 1 0 m o l l ) ：t r i t o n x 1 0 0 ( t x 1 0 0 ) ，澳化十六烷基吡啶( c p b ) ， 十六烷基三甲基溴化铵( c t a b ) ，十二烷基硫酸钠( s d s ) 均为国产，以二次水配制，浓 度均为o 4 0 。实验所用试剂除指明外均为分析纯，所用水均为二次石英蒸馏水。 2 2 实验方法 1 0 m l 比色管中依次加入适量的甲氧氯普胺，p h = 7 8 0 的t r i s h c i 缓冲溶液2 5 6 m l ， o 4 0 的s d s 水溶液2 5 0 m l ，二次水定容，于k e x 仉。= 3 15 3 5 3 n m 处测其相对荧光强度， 同时作对应试剂空白。 3 结果与讨论 3 1 荧光激发与发射光谱 实验了各种表面活性剂对m c p m 荧光激发光谱和发射光谱的影n 向( 图1 ) 。实验表明， 阴离子表面活性剂s d s 对m c p m 具有较强的增敏作用，荧光强度较水溶液提高3 倍以上。 按文献f 1 5 1 方法对不同胶束介质溶液的荧光量产率进行了测定( 表1 ) 可见荧光增敏顺序 为：s d s t w e e n 8 0 t x 1 0 0 c t a b c p b ，故选择s d s 为增敏剂。 荧光增敏的主要原因：表面活性剂的加入，荧光物质分子被分散和粘接到胶束系集 ( m i c e l l a ra s s e m b l i e s ) ，起了遮蔽作用，因而减少了碰撞的能量损失。一方面，由于 荧光物质分子与胶束的粘接位置附近的微环境粘度增大，减少了氧的猝灭作用；另一方面， 荧光物质分子出于处于更有序的微环境罩，因此减小了其他非辐射去活化过程和猝灭过程 的速率。这些影响的净结果，是胶束对处于激发单重态的荧光物质分子起了保护作用，有 利于辐射去活化过程( 荧光) 与非辐射去活化过程及各种猝灭过程的竞争，从而提高了荧 光的量子产率。 山东师范人学坝i 。论义：荧光、流曲沣日十装光浊用十药物分析的究j j 屺r h l * m _ w 4 幽l 荧光激发光谱( a ) 与发射光谱( b ) l ，w a t e r 2 c t a b ，3 c p b 。4 t x 1 0 0 ，5 s d s c ( s u r f a c t a n t ) = o 1 0 ，c ( m c p m ) = i 0 0 9 9 m l ，p h = 7 8 0 表1 胶束对m c p m 荧光激发、发射光谱特征的影响 w a t e r c p b c 1 、a b t x 1 0 0 s d s 3 1 1 3 1 4 3 l l 3 0 8 3 1 5 3 5 2 3 5 6 3 5 9 3 5 0 3 5 3 o 1 2 0 1 3 0 1 4 0 2 3 0 4 1 c ( s u r f a c t a n t ) = o 1 0 tc ( m c p m ) = 1 0 0 嵋m l ，p h = 7 8 0 3 2 表面活性剂浓度的影响 表面活性剂s d s 的浓度对m c p m 荧光强度有很大的影口向( 如图2 所示) ， 0 0 4 的s d s 取用量在2 0 0 3 0 0 m l 之问时，荧光强度f 基本恒定，故选择s d s 用量为2 5 0 m l ，即s d s 浓度为3 7 2 x 1 0 一m o l l 。 0目iji ili 山东帅池人学坝l 。沦艾：荧光、流动7 则芘光法j jj 二药物分析的 l j | _ 允，腑j 言 罂 里j 量 8 8 翌 呈 图2 表面活性荆圳苗的影响 c ( s u r f a c t a n t ) = 0 0 4 ，c ( m c p m ) = 1 0 0 9 9 m l ，p h = 7 8 0 为进一步证明增敏作用是由于表面活性剂胶束的形成，我们实验了溶液表面 张力随浓度变化的曲线，测定了临界胶束浓度( c m c ) ( 图3 所示) 。由图3 可 以得出，有无m c p m 的临界胶束浓度( c m c ) 几乎不变，均为2 9 8 x 1 0 一m o l l 。 由此更进一步证明了表面活性剂胶束的形成。 乓 z 呈 ， 幽3 表面张力随浓度变化曲线 c m c p m = 1 0 01 t g m lp h = 7 8 0 s d s + 缓冲溶液，2 ：s d s + m c p m + 缓冲溶液 3 3p h 的影响 p h 值对m c p m 溶液的荧光有较为显著的影响，不同p h 值对m c p m 荧光 强度的影响见图4 。由图示可见，p h 值在7 5 0 8 0 0 范围内，荧光强度最大且 比较稳定，因此选择p h 值为7 8 0 。 幽4 缓冲溶液的影响 c ( s u r f a c t a n t ) 2 0 - 0 8 ，c ( m c p m ) 2 10 0 州m l 3 4 缓冲溶液用量的影响 缓冲溶液用量影响溶液的离子强度，结果会对胶柬形成和溶液荧光强度有一 定的影响。不同缓冲溶液用量对m c p m 荧光强度的影响见图5 ，当p h = 7 8 0 o 1 0 m o l lt r i s h c i 缓冲溶液用量为2 o o 3 0 0 时，体系荧光强度最大且稳定， 故选定用量为2 5 0 m l 。 山东师他人学唧 i 。论史：荧光、流动件9 f 荧光法f jf 药物分析的究i ，j hj 1 图5 缓冲溶液州鼙的影响 c ( s u r f a c t a n t ) = 0i o - c ( m c p m ) = 1 0 0 1 t g i n l p h = 7 8 0 3 5 标准曲线，精密度及检测限 配制一系列不同浓度的m c p m 标准溶液，在选定的最佳条件下，按实验方 法测定荧光强度，结果发现m c p m 浓度在6 7 1 1 0 4 4 0 0 1 - t g m l 范围内与荧光 强度存在良好的线性关系，回归方程为：f = 4 7 5 7 + 2 2 8 6 0 c ( g g m l ) ，相关系数 r = 0 9 9 9 8 对1 0 0 9 9 m l 的m c p m 溶液进行1 1 次平行测定的相对标准偏差r s d 为o 5 0 ；根据i u p a c 规定l l ”，c l = k s o s ，其中c l 为检测下限，k 为与置信水 平相关的常数，s o 为1 1 次空白溶液测定值的标准偏差( s o = o 0 4 6 ) ，s 为标准曲 线的斜率。当置信水平为9 0 时，计算求得本法的检测下限为2 0 1 x l o 4 9 9 m l 。 与已报道的分光光度法叭2 1 ，高效液相色谱法( h p l c ) 1 3 , 4 1 ，流动注射化学发光 法( f i c l ) 1 5 6 】相比较，本方法具有高灵敏度以及宽的线性范围( 表2 ) 。 表2 方法的分析参数比较 山东帅范人学坝l j 论文：荧光、流曲沣射荧光法j 1 1 十药物分析的究0 应用 3 6 干扰实验 依实验方法，1 0 0 9 9 m l m c p m 存在下，相对误差不超过士5 0 时，实验了 常用药物赋形剂组成及血清主要组分对测定m c p m 的干扰，见表3 。可见大多 数实验物质对m c p m 的测定不产生干扰，说明本法具有很好的选择性。 表3 常见物质对1 0 0 t g m l 的m c p m 测定的影响 4 样品分析 4 1 片剂及针剂中m c p m 的测定 片剂中m c p m 的测定：称取m c p m 片剂5 粒研碎，准确称取o 1 0 0 0 9 ， 加适量h 2 s 0 4 溶解，过滤，将滤液转移至l o o m l 容量瓶中，定容。取适量体积 的m c p m 片剂滤液稀释，按实验方法进行测定，测定结果与标示值一致( 表4 ) 。 表4 片剂中m c p m 含量的测定结果( n = 5 。p = 9 5 ) 针剂中m c p m 的测定：取5 支m c p m 注射液，稀释至l o o m l 。取适量稀 释后按实验方法进行测定，测定结果与标示值一致( 表5 ) 。 l u 东! | 1 | j 范人学倾i 沦殳：谈光、 j ；c 动f t 射姨光 上1 】l 。药物讣忻俐f 究- 啦h 4 2 血清中m c p m 的测定 取两份2 0 0 m l 的血清样，分别加入含有o 2 0 m g m c p m 的标准溶液，一份直 接移入1 0 0 m l 容量瓶中，另一份加入4 0 0 m l 乙晴混合，在2 5 0 0 r m i n 的条件下 离心5 m i n ，取上层清液2 0 0 m l ，用二次水定容至1 0 0 m l ，待用。 向6 只1 0 m l 比色管中分别加入不同量的脱脂血清与未脱脂血清样品，按照 实验方法，用标准曲线法测定其中的m c p m 含量，结果见表6 。 表6 血清中m c p m 含量的测定( n = 5 口= 9 5 ) 样品 存在值( t a g m l ) 测得值( m l ) 平均同收率( ) r s d ( ) 1 0 0 2 o o 30 0 0 9 9 6 二i ：0 0l4 1 9 8 士0 ，0 1 2 3 0 0 士0 0 5 9 1 0 0 9 9 1 0 0 9 8 1 0 i 1 0 2 1 1 05 0 i 6 i 2 3 ，2 o 8 0 样品1 川乙腈脱脂血消样，样r 铺2 术州乙腑脱脂痂清样 5 结论 本文通过研究各种表面活性剂对甲氧氯普股的荧光增敏作用，发现表面活性 剂十二烷基硫酸钠对其荧光有较强的增敏作用，荧光量子产率可提高3 倍以上， 由此建立了测定甲氧氯普胺的荧光分光光度法。该方法直接用于片齐u 、针剂及血 清中甲氧氯普胺的测定，结果令人满意。 m 9 o m 盯 叮 征 如 如 盯 叭 舛 o 2 3 l 2 3 2 山东m f 范人学坝f j 泛殳：使光、流动注舯髓光沾盯j 一曲物分折n c j 研究，j 、v 刷 参考文献 1 】f m a b d e lg a w a d ，n ，m 。e l - g u i n d i ，a n a l l e t t ，l9 9 5 ，2 8 ：l4 3 7 【2 樊静，陈亚红，叶存玲，冯素玲，分析化学，2 0 0 1 ，2 9 ：2 1 6 【3 h l a m p a r c z y k ，a c h m i e l e w s k a ，l k o n i e c z n a ，a ，p l e n i s ，p k z a r z y c k i ，b i o m e d c h r o m a t e g r ，2 0 0 1 ，1 5 ：5 1 3 【4 m a r a d w a n ，a n a l l e t t ，l9 9 8 ，31 ：2 3 9 7 5 】s l f a n ，z h w u ，l z h a n g c l v a n a l y t i c a ll e t t e r s ，2 0 0 2 ，3 5 ：1 4 7 9 【6 a a n a w a l t a l a n t a ，2 0 0 4 ，6 2 ：2 5 5 7 】l m a ，b t a n g ，c ，c h u ，a n a l y t i c ac h