单叶蔓荆总黄酮的提取工艺研究.doc

单叶蔓荆总黄酮的提取工艺研究 代现平，班翠红 （滨州医学院药学院，山东烟台） 摘要：以提取温度、提取时间、固液比和乙醇体积分数为考察因素，以单叶蔓荆（）总黄酮得率为考核指标，应用正交试验对其提取工艺进行优化。结果表明，单叶蔓荆中总黄酮的最佳提取工艺为提取温度、时间、固液比（）、乙醇体积分数。该提取工艺简单、高效，适用于单叶蔓荆的总黄酮提取。 关键词：单叶蔓荆（）；总黄酮；正交试验；提取工艺 ：A：0439114（15）051163-03 DOI：10.14088/j.ki.issn0439-8114.xx.05.034 ： 基金项目：国家自然科学基金项目（） 作者简介：代现平（），男，河南鹤壁人，副教授，博士，主要从事天然活性成分研究，（电话）（电子信箱）。 牡荆属（）植物为马鞭草科灌木或乔木，主要分布在热带及温带地区。在我国有种，主要分布在长江以南地区，在东北、华北、西北等地也有少量分布。单叶蔓荆（）为牡荆属马鞭草科，辛苦微寒，具清利头目、疏散风热等功效，民间常用于头痛、眼痛、感冒等病症的治疗。研究表明，单叶蔓荆的化学成分主要包括黄酮类、倍半萜、二萜类、三萜类、苯丙素类、甾类等物质，其中黄酮类化合物为其主要活性成分，具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒、镇痛等多种药理作用。因此，研究单叶蔓荆中总黄酮的提取工艺具有重要意义。 本试验采用正交试验对单叶蔓荆提取工艺进行优化，对影响提取的各种因素及条件进行了探讨，旨在为单叶蔓荆的综合开发利用提供依据。 材料与方法 材料 单叶蔓荆由烟台益生堂药业有限公司提供，经滨州医学院药学院天然药物实验室鉴定为单叶蔓荆。 仪器 型紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；型电子天平、型真空干燥箱（上海精密仪器仪表有限公司）；型恒温水浴锅（上海乔跃电子有限公司）；型循环水式多用真空泵、型旋转蒸发仪（巩义市瑞德仪器设备有限公司）。 试剂 芦丁对照品（中国药品生物制品检定所），其他试剂均为分析纯。 方法 单叶蔓荆中总黄酮含量的测定 ）供试样品溶液的制备。准确称取单叶蔓荆粗粉，于烧瓶中，按要求加入不同体积分数乙醇溶液，加热回流提取一定时间，过滤，减压回收溶剂，干燥，称重，得到单叶蔓荆干膏。精确称取在不同提取条件下得到的单叶蔓荆干膏，于容量瓶中，用乙醇溶解，定容后备用。 ）标准溶液的制备。精确称取于干燥至恒重的芦丁对照品，于容量瓶中，加乙醇，水浴微热使其完全溶解，放冷，乙醇定容至，制成芦丁对照品溶液。 ）标准曲线的绘制。分别精确吸取芦丁对照溶液、，分别加入容量瓶中，各加亚硝酸钠溶液（），摇匀，静置；再加入硝酸铝溶液（），摇匀，静置；再加氢氧化钠溶液（），乙醇定容，摇匀，静置。于波长处测吸光度，以吸光度为纵坐标，芦丁浓度为横坐标，绘制标准曲线。 ）精密度试验。精确吸取芦丁对照溶液于容量瓶中，按标准曲线绘制方法，平行操作次，测定该方法的精密度。 ）稳定性试验。取适量供试溶液，按标准曲线绘制方法，于、分别测定其吸光度，测定该方法的稳定性。 ）重复性试验。取同一批药材，按照以上方法制备供试样品溶液，并按标准曲线绘制所述方法测定吸光度，平行操作次，测定该方法的重复性。 ）回收率试验。精确吸取份已知含量供试样品溶液各，加入芦丁标准品溶液，按标准曲线绘制方法测定其吸光度，计算单叶蔓荆总黄酮的含量。 供试样品总黄酮含量测定：精确吸取供试样品溶液于容量瓶中，按标准曲线绘制项方法测定其吸光度，并代入回归方程，计算单叶蔓荆总黄酮的含量。 正交试验为寻找最佳的提取条件组合，在单因素试验结果单因素最佳条件为提取次数次、提取温度、提取时间、固液比（，下同）和乙醇体积分数的基础上，应用正交试验设计，选择了主要影响提取效果的提取温度（）、提取时间（）、固液比（）和乙醇体积分数（）作为考察因素，每个因素选择个水平，以总黄酮含量作为考核指标，按照（）正交设计方案进行试验，正交试验因素及水平见表。 验证试验采用筛选后得到的最佳工艺，进行验证试验，次重复，按标准曲线绘制方法测定其吸光度，计算单叶蔓荆总黄酮含量。 结果与分析 标准曲线绘制 以吸光度为纵坐标，芦丁浓度为横坐标绘制标准曲线，并进行线性回归分析，得到的回归方程为（）。结果表明，芦丁在浓度范围与其吸光度呈良好的线性关系。 精密度试验结果表明，该测定方法，表明其精密度良好。稳定性试验结果表明，该测定方法，表明在内测定供试样品，其总黄酮含量基本稳定。重复性试验结果表明，该测定方法，表明该方法具有良好的重复性。回收率试验结果表明，单叶蔓荆总黄酮平均回收率为，表明该方法可行。 单叶蔓荆总黄酮提取工艺优化 正交试验结果正交试验试验结果见表，方差分析结果见表。结果表明，影响单叶蔓荆总黄酮提取的主次因素依次为、，即提取温度、乙醇体积分数、固液比、提取时间。方差分析结果表明，因素和对试验结果有极显著影响，因素对试验结果有显著影响。按照方差分析结果，只对有显著影响因素选择最佳水平，而试验结果影响不大的因素则按照实际需要选择合适的水平。因此，单叶蔓荆总黄酮提取最佳工艺确定为提取温度、提取时间、固液比、乙醇体积分数，即。 验证试验验证试验结果表明，单叶蔓荆总黄酮的含量分别为、，平均含量为，（），表明该工艺条件稳定、可靠。 小结与讨论 在前期单因素试验中，对单叶蔓荆总黄酮提取过程中粒度、提取温度、提取时间、固液比和乙醇体积分数单因素进行筛选，结果单叶蔓荆粒度对提取效率的影响很小，因此选择对提取效率有较大影响的提取温度、提取时间、固液比和乙醇体积分数为考察因素，进行正交试验，优选其最佳提取条件。经正交试验结果分析，发现影响单叶蔓荆总黄酮提取主次因素依次为提取温度、乙醇体积分数、固液比、提取时间。经综合分析各种因素，选定为单叶蔓荆总黄酮最佳的提取工艺，即提取温度、提取时间、固液比、乙醇体积分数，按此条件提取，总黄酮含量达到，并通过验证试验表明该提取工艺稳