（分析化学专业论文）高效液相色谱及样品前处理技术在药物和环境分析中的应用研究.pdf

摘要 高效液相色谱及样品前处理技术在药物和 环境分析中的应用 分析化学专业硕士研究生孙静涵 指导教师罗红群教授 摘要 高效液相色谱法( h i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ，h p l c ) 是2 0 世纪7 0 年代迅速 发展起来的一项高效、快速的分离分析技术，是现代分离测试的重要手段。鉴于其简便、快 速、灵敏、准确的特点，目前，在医药、卫生、食品、环保等各个领域已得到广泛应用。 本论文包括综述和研究报告两个部分。第一部分是综述，这部分简述了液相色谱和样品 前处理技术的的研究进展，第二部分是研究报告，主要包括四个体系，分别是( 1 ) r p h p l c 同时测定口服液中的咖啡酸和阿魏酸；( 2 ) 浊点萃取高效液相色谱法测定环境水样中的西维 因和仲丁威：( 3 ) 离子液体的温度控制分散液相微萃取测定环境水样中的邻苯二甲酸酯；( 4 ) 基于碳纳米管的分散吲相萃取高效液相色谱联用测定蔬菜中的西维因。 1 1 强h p l c 同时测定口服液中的咖啡酸和阿魏酸 采用高效液相色谱法同时测定了口服液中的咖啡酸和阿魏酸含量，用s h i m - p a c kv p - o d s 柱( 1 5 0x4 6m i l l ，3u m ) ，流动相：乙腈3 的冰醋酸水溶液( v ：v = 1 1 ：8 9 ) ，流速：1 0m l m i n ， 检测波k ：3 2 1n n l 。咖啡酸和阿魏酸的浓度与峰面积呈良好的线性关系，其线性范同分别为 o 1 2 6 6 3 0 “g m l ( r = 0 9 9 9 7 ) 莉1 0 1 2 0 2 4 0 “g r n l ( r = 0 9 9 9 9 ) ，检出限分别为9 2n g m l 和4 3n g m l 。平均回收率( n = 3 ) 分别为1 0 0 7 和9 9 9 ，r s d 分别为2 1 i 3 0 2 1 2 ，样品中 咖啡酸和阿魏酸的平均含鼍分别为3 2 6 t g m l 和2 3 6p g m l 。 2 浊点萃取高效液相色谱法测定环境水样中的西维因和仲丁威 建立了应用浊点萃取法对嘉陵江饮用水源中残留的农药西维因和仲丁威进行萃取富集后 用高效液相色谱紫外检测器进行分离检测的方法。所用的表面活性剂为非离子表面活性剂聚 乙二醇辛基苯基醚( t r i t o nx 1 0 0 ) ，该表面活性剂能够对分析物进行提取与富集。实验确定 了浊点萃取方法优化条件：t r i t o nx 一1 0 0 的浓度为1 0 ( w v ) ，硫酸钠的浓度为1 0 ( w v ) ， 平衡温度为5 0 4 c 以及平衡时间为4 5r a i n ；色谱条件为流动相：甲醇水( v ：v = 5 5 ：4 5 ) ， s h i m - p a c kv p o d s 柱( 1 5 0 4 6t o n i ，3l a m ) ，流速：1 0m l m i n ，分析时间为2 5m i n ，前1 0 m i n 检测波长为2 2 0n n l ，后1 5 m i n 检测波长为2 0 0n l n 。在上述实验条件下，两维冈和仲丁威的线 性范围为2 1 0 0 0 嵋l 和6 0 1 0 0 0 0 嵋l ，相关系数为0 9 9 9 5 和0 9 9 9 0 ：检出限分别为1 1 4 p g l 和5 5 6 肛g l 。在饮用水中西维囚和仲丁威平均加标回收率分别为9 4 4 一9 6 1 和9 2 2 两南火学硕十学位论文 1 0 1 7 。 3 离子液体的温度控制分散液相微萃取测定环境水样中的邻苯二甲酸酯 建立了一个快速、简单、有效的样品前处理方法即温度控制的离子液体分散液相微苹取 和高效液相色谱紫外可见检测器联用来萃取、富集和测定环境水样中的邻苯二甲酸酯。优化 了影响萃取效率的一系列重要的参数，如离子液体的种类和葶取体积、萃取时间、萃取温度、 离，p 时间和盐效应。在最优化的条件下( 萃取剂：1 辛基一3 甲基咪唑六氟化磷( 【c 8 m i m p f 6 】) ； 萃取体积：4 0g l ：萃取时间：2 0m i n ；萃取温度：6 0 ；离心时间：1 0m i r a 不加盐) ，该 方法测定目标物邻苯二甲酸；二乙酯，( d e p ) ，邻苯二二甲酸_ 二丁酯( d b p ) 和邻苯= 甲酸二辛酯 ( d o p ) 的线性范围分别为o 0 0 5 1 0 0m g l ，0 0 0 5 5 0 0m g l 和o 0 0 5 5 0 0m g l ，相关 系数分别为0 9 9 8 8 ，0 9 9 9 4 和0 9 9 9 1 ，检出限( s n = 3 ) 分别为0 0 0 2 7m g l ，o 。0 0 2 2m g l 和o 0 0 0 7m g l 。连续萃取浓度为5 0m g l 的d e p ，d b p 和d o p 六次测得的相对标准偏差分 别为2 5 ，5 3 和4 0 。该方法用于测定实验室自来水和环境江水的同收率为8 7 2 1 0 3 8 。该方法成功地用于测定环境水样中的邻苯二甲酸酯类物质。 4 基丁碳纳米管的分散同相葶取高效液相色谱联用测定蔬菜中的两维因 以碳纳米管为吸附剂分散同相萃取净化、液相色谱柱分离、紫外检测测定两维囚，研究建 立了测定蔬菜的两维网的分析方法。在仪器最佳测定条件下，两维冈的检出限为2 2l a g k g ，测 得西维因含量在o 1 1 0 “鲋n l 范罔内与峰面积成线性关系，相关系数为0 9 9 8 0 ，碳纳米管分 散同相萃取法，操作简单，基体干扰少，结果准确可靠，重复性好。实际样晶中两维因的平均 同收率在8 1 3 1 0 5 1 之问，测得鼙的相对标准偏差在1 7 6 9 之间，测定结果令人满 意。 关键词：高效液相色谱药物分析环境分析浊点萃取分散液相微萃取 分散固相萃取 a b s t r a c t s t u d yo nt h eh i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y a n dp r e t r e a t m e n tt e c h n o l o g ya p p l i e dt op h a r m a c e u t i c a l a n de n v i r o n m e n t a la n a b a nn v l r o n m e n t a la n a l y s i s s p e c i a l i t y ：a n a l y t i c a lc h e m i s t r yp o s t g r a d u a t e ：j i n g h a ns u n s u p e r v i s o r ：h o n g q u nl u o a b s t r a c t h i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ( h p l c ) a sa ni m p o r t a n tm o d e mm e a s u r e m e n ta n d s e p a r a t i o nm e a n sn o wi so n eo fh i g he f f i c i e n ta n dr a p i da n a l y s i sa n ds e p a r a t i o nt e c h n o l o g ye m e r g i n g i nt h e1 9 7 0 s d u et oi t sc h a r a c t e r i s t i c so fc o n v e n i e n c e ，h i 曲r a p i d n e s s ，s e n s i t i v i t ya n df a i r l y a c c u r a c y ，i th a sb e e nw i d e l yu s e di nt h ea r e a so fp r o d u c t i o no fm e d i c i n e ，f o o d s t u f f , a n de n v i r o n m e n t e t e t h i sp a p e ri n c l u d e st w os e c t i o n s - r e v i e wa n dr e s e a r c hr e p o r t i nt h er e v i e ws e c t i o n ，t h eh p l c a n dp r e t r e a t m e n tt e c h n o l o g i e sa n dt h e i rp r e s e n ta p p l i c a t i o ni nt h ed r u ga n de n v i r o n m e n t a ls a m p l e s a r es u m m a r i z e d i nt h en e x tr e s e a r c hr e p o r ts e c t i o n ，w h i c hi sc o m p o s e do fc o m p o n e n t sa sf o l l o w s ： 1 ) d e t e r m i n a t i o no fc a f f e i ca c i da n df e r u l i ca c i di no r a ll i q u i db yr p h p l c ；2 ) c l o u dp o i n t e x t r a c t i o nf o rt h ed e t e r m i n a t i o no fc a r b a r y la n df e n o b u c a r bi nw a t e rs a m p l e sb yh i g hp e r f o r m a n c e l i q u i dc h r o m a t o g r a p h i cd e t e c t i o n ；3 ) d e t e r m i n a t i o no fp h t h a l a t ee s t e r si ne n v i r o n m e n t a lw a t e r s a m p l e sb yt e m p e r a t u r e c o n t r o l l e d i o n i c l i q u i dd i s p e r s i v el i q u i d p h a s em i c r o e x t r a c t i o n ；4 ) d e t e r m i n a t i o no fc a r b a r y li nv e g e t a b l e sw i t hc a r b o nn a n o t u b e sd i s p e r s i v es o l i dp h a s ee x t r a c t i o na n d h p i ，cd e t e c t i o n 1 d e t e r m i n a t i o no fc a f f e i ca c i da n df e r u l i ca c i di no r a ll i q u i db yr p h p l c ah p l cm e t h o dw a se s t a b l i s h e df o rt h ed e t e r m i n a t i o no ff e r u l i ca c i da n dc a f f e i ca c i di no r a l l i q u i d s h i m - p a c kv - p o d sc o l u m n ( 15 0 4 6r n n l ，3o m ) w a su s e dw i t ham o b i l ep h a s eo f a c e t o n i t r i l e 一3 a c e t i ca c i d ( 1 1 ：8 9b yv o l u m e ) t h ef l o wr a t ew a s1 0m l m i na n dt h ec o n t e n t so f f e r u l i ca c i da n dc a f f e i ca c i dw e r ed e t e c t e da tw a v e l e n g t ho f3 21n l n 1 h ec a l i b r a t i o nc u r v ew a sl i n e a r i nt h er a n g eo f o 1 2 6 6 3 0i _ t g m l ( r = o 9 9 9 7 ) f o rc a f f e i ca c i da n d0 1 2 0 2 4 0i t g n m ( r = 0 9 9 9 9 ) f o rf e r u l i ca c i d 刀，ed e t e c t i o nl i m i tw a s4 2n g m lf o rc a f f e i ca c i da n d4 3n g m lf o rf e r u l i ca c i d 强# a v e r a g er e c o v e r yw a s10 0 7 w i t hr s d2 11 f o rc a f f e i ca c i da n dw a s9 9 9 w i t hr s d2 12 f o r f e r u l i ca c i d n ea v e r a g ec o n t e n to ft h es a m p l ew a s3 2 6l a g m lf o rc a f f e i ca c i da n d2 3 6 “g m lf o r f e r u l i ca c i d 两南火学硕十学何论文 量篁曼寰曼曼曼舅曼曼曼舅黑皇曼曼曼邕曼鱼皇皇曼皇皇i i i i i , 曼曼曼曼量吕曼黑 2 c l o u dp o i n te x t r a c t i o nf o rt h ed e t e r m i n a t i o no fc a r b a r y la n df e n o b u c a r bi nw a t e rs a m p l e sb y h i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h i cd e t e c t i o n t h ef e a s i b i l i t yo fe m p l o y i n gc l o u dp o i n te x t r a c t i o n ( c p e ) a st h ee x t r a c t i o na n dp r e c o n c e n t r a t i o n m e t h o df o rt h er e c o v e r yo fc a r b a r y la n df e n o b u c a r bf r o mw a t e rs a m p l e sf o l l o w e db yh p l c u v a n a l y s i sw a sd e m o n s t r a t e d t h es u r f a c t a n tt r i t o nx 一10 0w a su s e dt oe x t r a c ta n dp r e c o n c e n t r a t et h e a n a l y t e s t h eo p t i m u mc o n d i t i o n so fc p ew e r ea sf o l l o w s ：10 ( w v ) t r i t o n x - 1 0 0 ，10 ( w v ) s o d i u ms u l f a t e ，e q u i l i t r a t i o n ，t e m p e r a t u r e5 0 ，e q u i l i t r a t i o nt i m e 4 5 m i n ；c h r o m a t o g r a p h i c c o n d i t i o n s ：m o b i l ep h a s eo fm e t h a n o l - w a t e rw i t h5 5 ：4 5 ( v v ) ，s h i m - p a c kv p o d sc o l u m n ( 15 0 4 6i t i l t i ，3 “m ) ，f l o wr a t eo f1 0m l m i n ，t h er u nt i m eo f 2 5m i n ；t h ed e t e c t i o nw a v e l e n g t hw a s 2 2 0n n li nt h ef r i s t10m i na n d2 0 0n n li nt h el a s t15m i n t h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h el i n e a rr a n g e s o fd e t e c t i o nw e r e2 10 0 0p g lf o rc a r b a r y lw i t ht h ec o r r e l a t i o nc o e f f i c i e n to f0 9 9 9 5a n d6 0 10 0 0 0p g lf o rf e n o b u c a r bw i t ht h ec o r r e l a t i o nc o e f f i c i e n t o f0 9 9 9 0 1 1 1 ea v e r a g er e c o v e r i e sf o rt h e w a t e rs a m p l e sw e r e9 4 4 一9 6 1 f o rc a r b a r y la n d9 2 2 101 7 f o rf e n o b u c a r b 3 d e t e r m i n a t i o no fp h t h a l a t ee s t e r si ne n v i r o n m e n t a lw a t e rs a m p l e sb yt e m p e r a t u r e c o n t r o l l e d i o n i cl i q u i dd i s p e r s i v el i q u i d p h a s em i c r o e x t r a c t i o n as i m p l e ，f a s ta n de f f i c i e n ts a m p l ep r e p a r a t i o na p p r o a c h ，t e m p e r a t u r e c o n t r o l l e di o n i cl i q u i d ( i l ) d i s p e r s i v el i q u i d p h a s em i c r o e x t r a c t i o n ，c o u p l e dw i t hh i g h - p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y a n du vd e t e c t i o nh a sb e e nd e v e l o p e df o rt h ee x t r a c t i o n ，p r e c o n c e n t r a t i o na n dd e t e r m i n a t i o no f p h t h a l a t ee s t e r si nw a t e rs a m p l e s t h ei n f l u e n c e so fs o m ei m p o r t a n tp a r a m e t e r ss u c ha st h ek i n da n d v o l u m eo fe x t r a c t i o ni l ，e x t r a c t i o nt i m e ，e x t r a c t i o nt e m p e r a t u r e ，c e n t r i f u g a t i o nt i m e ，a n ds a l te f f e c t o nt h ee x t r a c t i o ne f f i c i e n c yw e r ei n v e s t i g a t e d u n d e rt h eo p t i m u me x t r a c t i o nc o n d i t i o n si n c l u d i n g 4 0p lo f1 - o c t y l 一3 - m e t h y l i m l d a z o l i u mh e x a f l u o r o p h o s p h a t e ( c g m i m p f 6 】) a st h ee x t r a c t i o ni l ， e x t r a c t i o nt i m eo f2 0m i n ，e x t r a c t i o nt e m p e r a t u r eo f6 0 。c ，c e n t r i f u g a t i o nt i m eo f10m i na n dw i t h o u t s a l ta d d i t i o n ，t h em o d e la n a l y t e sd i e t h y lp h t h a l a t e ( d e p ) ，d i b u t y lp h t h a l a t e ( d b p ) ，a n dd i o c t y l p h t h a l a t e ( d o p ) e x h i b i t e dg o o dl i n e a rr e l a t i o n s h i pi nt h ec o n c e n t r a t i o nr a n g eo fo 0 0 5 l o 0m e - f o rd e pa n d0 0 0 5 5 0 0m g 凡f o rd b pa n dd o pw i t ht h ec o r r e l a t i o nc o e f f i c i e n to fo 9 9 8 8f o r d e p ，o 9 9 9 4f o rd b pa n d0 9 9 91f o rd o p ，r e s p e c t i v e l y t h ed e t e c t i o nl i m i t s ( s i n = 3 ) w e r e0 0 0 2 7 m g lf o rd e p 0 0 0 2 2m g lf o rd b pa n do 0 0 0 7m g lf o rd o p t h er e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n sf o r t h ee x t r a c t i o no f5 0m g ld e p ，d b pa n dd o pw e r e2 5 ，5 3 ，a n d4 o ( n = 6 ) ，r e s p e c t i v e l y t h er e c o v e r i e so fp h t h a l a t ee s t e r sf r o mt a pa n dr i v e rw a t e rs a m p l e sw e r ei nt h er a n g eo f8 7 2 一 1 0 3 8 t h i sm e t h o dc a l lb es u c c e s s f u l l ya p p l i e df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fp h t h a l a t ee s t e r si n e n v i r o n m e n t a lw a t e rs a m p l e s 4 d e t e r m i n a t i o no fc a r b a r y li nv e g e t a b l es a m p l e sw i t hc a r b o nn a n o t u b e sd i s p e r s i v es o l i d i v a b s 仃a c t p h a s ee x t r a c t i o na n dh p l cd e t e c t i o n an e wm e t h o df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fc a r b a r y li nv e g e t a b l es a m p l e sw a se s t a b l i s h e dw i t h c a r b o nn a n o t u b e sd i s p e r s i v es o l i d p h a s ee x t r a c t i o na n dh p l c - u vd e t e c t i o n u n d e rt h eo p t i m i z e d i n s t r u m e n t a lc o n d i t i o n s ，t h ed e t c c t i o nl i m i to f c a r b a r y lw a s2 2 呜k g ag o o dl i n e a rr e l a t i o n s h i pw a s o b t a i n e db e t w e e nt h ec o n c e n t r a t i o no 1 1 0 “e g m la n dp e a ka r e aw i t ht h ec o r r e l a t i o nc o e f f i c i e n to f 0 9 9 8 0 t h ea v e r a g er e c o v e r i e so fc a r b a r y ls p i k e di nv e g e t a b l es a m p l e sr a n g e df r o m81 3 t o 10 5 1 w i t ht h er e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n sr a n g i n gf r o m1 7 t o6 9 t h ec a r b o nn a n o t u b e s d i s p e r s i v es o l i d - p h a s ee x t r a c t i o nm e t h o dh a st h ea d v a n t a g e so fs i m p l i c i t y ，l e s sm a t r i xi n t e r f e r e n c e s ， g o o da c c u r a c ya n dr e p r o d u c i b i l i t y k e yw o r d s ：h i g h p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y p h a r m a c e u t i c a la n a l y s i s e n v i r o n m e n t a la n a l y s i sc l o u dp o i n te x t r a c t i o n d i s p e r s i v el i q u i d - p h a s em i c r o e x t r a c t i o n d i s p e r s i v es o l i dp h a s ee x t r a c t i o n v 独创性声明 学位论文题目： 直兹速担色谱及挂显煎处理擅盛查药堑狸巫埴佥盘 生数座周盟究 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作 及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方 外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为 获得西南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一 同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明 并表示谢意。 学位论文作者：乡j 苟涵 签字日期： 刃护? 年堂月加日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规 定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允 许沦义被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院可以将学位论义的 令部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存、汇编学位论文。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：口不保密，口 保密期限至年月止) 。 学位论文作者签名：铂、街。函i导师签名：、罗磊翟 签字日期：沙7 年月2 , o 日签字日期：细夕年岁月矽日 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 通讯地址： 邮编： 第一部分综述 第一部分综述 1 高效液相色谱概述 俄国植物学家t s w e t t 于1 9 0 6 年提出色谱法，他的实验是属于液相色谱。在3 0 年代中期以前，液相色谱是色谱法仅有的一种色谱技术。早期，液相色谱分离柱 是用碳酸钙或氧化铝等吸附剂填充于玻璃柱管内，吸附剂的粒径大于1 0 0 “m ，柱 的装填既不紧密也不均匀，分离效率不高，每根柱只能使用一次；流动相由柱管 上端依靠重力向下流过柱子，分离速度慢；检测是依靠肉眼分辨颜色，或是将吸 附剂从柱管内移出分段后进行分析，灵敏度不高，费时费事。 高效液相色谱法( h i 曲p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ，h p l c ) 是于6 0 年 代后期引入了气相色谱塔板理论和先进技术而迅速发展起来的。它是现代分离和 测定的一种重要手段。与经典的液相色谱法相比，高效液相色谱法具有下列主要 优点：1 采用高压输液泵输送流动相，流速快；2 应用了颗粒极细规则均匀的固定 相，柱效高，分离效率高；3 广泛使用了高灵敏度检测器，大大提高了灵敏度；4 不受试样挥发度和热稳定性的限制，非常适用于分离生物大分子、离子型化合物、 不稳定的天然产物以及各种高分子化合物等。7 0 年代，计算机技术应用于液相色 谱仪，实现了仪器的自动化。概括地说，早期的液相色谱演变成今日的高效液相 色谱，除了因为液相色谱理论的建立和不断完善，还由于以下四个方面对改进： ( 1 ) 使用颗粒均匀的细粒固定相，提高了分离效率，柱效可达每米几万个理论塔 板；( 2 ) 应用无脉动的高压泵，缩短了分析时间；( 3 ) 各种高灵敏度检测器的 应用，可连续检测微量组分；( 4 ) 利用计算机来控制色谱操作条件和处理色谱数 据，实现高度自动化，免去了许多操作上的麻烦。目前，高效液相色谱已成为化 学、生化、医药、工业、农业、环保、商检和法检等学科领域中重要的分离分析 技术，是分析化学家和生物学家手中用于解决他们面临的各种实际分析和分离课 题必不可缺的工具之一。 由于高效液相色谱具有分析速度快、分离效率高、检测灵敏度高、检测自动 化、适用范围广、组分易回收、样品处理较简单等优点，更使它在药物分析和环 境分析领域发挥了极其重要的作用。据美国药典2 2 版载l l j ，h p l c 在含量测定方法 中位居第一。在发达国家更是将h p l c 方法作为常用的环境监测方法，使得h p l c 已在环境监测中得到广泛应用，特别适用于分子量大、挥发性低、热稳定性差的 有机污染物的分离和分析。如多环芳烃、酚类、多环联苯、邻苯二甲酸酯类、联 苯胺类、阴离子表面活性剂、有机农药、除草剂等，其中多数属于美国环保局( e p a ) 清洁水法案中颁布的1 1 4 项优先有机污染物范围。本文从以下几个方面综述了高效 液相色谱及样品前处理技术在药物和环境分析中的研究进展。 两南人学硕十学付论文 2 高效液相色谱技术在药物分析中的应用 2 1 高效液相色谱在天然药物分析中的应用 在人类回归自然，倡导天然疗法的今天，崇尚天然药物已经成为世界潮流。 这也给我国的中药产业带来了前所未有的契机，同时也面临了巨大的挑战。由于 我国地大物博，产地不同就使得同种中药有质量优劣之分，同时中药成分也非常 复杂。高效液相色谱技术由于其专业性、，灵敏度高、简单准确被广泛运用于中药 的质量控制领域。 2 1 1 高效液相色谱技术用于中药有效成分的含量分析 高效液相色谱技术可以对中药中有效成分进行分离，并测定其含量，从而对 中药进行质量控制，建立一定的质量标准。国内外对中药有效成分的研究热点主 要集中在以下几类物质： ( 1 ) 生物碱t 2 埘。x i ey i n g 等【2 】建立了用高效液相色谱一二极管阵列检测器 ( h p l c d a d ) 同时测定了加工的乌头根和未加工的乌头根中6 种乌头碱的含量， 并用于测定1 2 种中药制剂中乌头碱的测定，平均回收率在9 0 1 0 3 ，可用于乌头碱 的质量控制；l i a n gm i n j i n 等【3 】用h p l c u v 联用同时测定了经7 0 的甲醇回流提取 的两面针罩的九种生物碱，并用h p l c d a d e s i m s 确认了这九种生物碱，所建立 的方法能快速有效地用于两面针这种传统中药的质量控制；王玉霞 4 1 等同时测定了 荷叶药材及其生物碱部位中4 种生物碱类成分2 羟基1 甲氧基阿朴啡、原荷叶碱、 荷叶碱、莲碱，流动相为乙腈0 1 三乙胺水溶液的梯度淋洗，检测波长为2 7 01 1 1 1 1 ， 所建立的方法用于测定荷叶药品中的这四种生物碱，结果令人满意。 ( 2 ) 黄酮类物质5 7 1 。y em i n t 5 】等用反相高效液相色谱和紫外检测器联用在1 5 m i n 内测定了菟丝子中的五种黄酮类物质，流动相为0 0 2 5m 的j 下磷酸和甲醇溶液 进行梯度淋洗，所建立的方法用于测定4 0 种日本和中国各地的菟丝子样品，发现 产地不同五种黄酮类物质的含量差异也很大；m o n i k ao l s z e w s k a t 6 】用反相高效液相 色谱分离并测定了三种花楸的花、叶子、果实的提取液中四种黄酮类物质的含量， 结果令人满意；谢大年【_ - 】等用盐酸水解银杏叶提取物后，再用高效液相色谱测定了 银杏叶中三种主要黄酮甙元，流动相为甲醇水( 5 5 ：4 5 ) ，三种成分在1 5m i n 之内 完全分离，结果令人满意。 ( 3 ) 皂苷类物质【8 。m 】。这类物质没有紫外吸收或者仅为末端吸收，所以测定 这类物质的检测器很多时候都是采用蒸发光散射检测器。这种检测器能不经过衍 生检测没有紫外吸收或仅有木端吸收的物质，并且方法灵敏度高( 一般检测限低 于3p g m l ) 、线性关系良好。这方面的报道很多，如用h p l c e l s d 一次性分离分 析天然人参、心脉通胶囊、育精胶囊中多种人参皂苷f 8 1 ，还有三七中三七皂苷的 2 第一部分综述 含量分析【1 2 j ，黄芪和其制剂中黄芪甲苷黄芪皂苷、黄芪甲甙的分离和测定【1 3 - 1 4 1 。 ( 4 ) 萜类和挥发油物质【l5 。1 6 】。萜类化合物是一类比较多的天然化合物，是中 药中一类十分重要的活性物质，这类物质的分析检测也常常使用蒸发光散射检测 器。l i w e n k u l t l 5 等用h p l c e l s d 钡j 定了银杏叶中的萜类内酯( 银杏内酯a 、银杏 内酯b 、银杏内酯c 和白果内酯) ，利用梯度洗脱，在优化的色谱条件下，四种化合 物的检测限为2 0 3 5n g ：a v e r yb a 等【1 6 】采用h p l c e l s d 法分析了青蒿素及其6 种衍生物，此法适用于分析青蒿素( 青蒿素属于倍半萜内酯) 及其一大类衍生物， 色谱条件：固定相为i b o s i l c l 8 柱，流动相为甲醇水( 8 ：2 ) ，1 0m l m i n ，e l s d 设置为3 2 ，2 2b a r 。用蒸发光散射检测器，灵敏度和选择性都优于紫外检测器。 ( 5 ) 酚酸类化合物 1 7 - 1 9 】。这类化合物具有抗氧化的药理功能，一直是科学家们 关注的热点。l i ua ih u a 1 7 】用高效液相和二极管阵列和电离子质谱仪联用测定了丹 参中1 1 种酚类化学物，结果令人满意；k a z i m i e r zg l o w n i a k 1 8 】采用固相萃取装置提 取了六种不同的紫锥花属植物中的八种酚酸类物质，并用高效液相色谱进行分离 和测定，色谱条件为：o d sh y p e r s i l 柱( 2 0 0 x 4 6 m mi d ，5 1 x m ) ，流动相为甲醇 含0 ，1 的甲酸水溶液( 2 5 ：7 5 ) ；刘江云等【19 j 采用反相高效液相色谱法梯度洗脱， 对1 2 种天然酚酸进行定性定量分析研究，通过色谱条件的优化，确定了最佳的分 离条件，同时探讨了流动相的酸度对分离结果的影响，以及酚酸结构与保留行为 之间的关系，适用于有机酚酸类化合物的定性和定量检测分析，并可以作为实际 样品分析时进行实验条件优化的参考。 2 1 2 高效液相色谱技术用于中药指纹图谱 色谱指纹图谱是在固定实验条件、固定实验方法下，得到同一样品不同批次 药材的色谱图谱。经对比分析，得到能够确定该药材的共有峰的图谱，作为同种 药材之共性以鉴别药材的品质；从物种特性出发以区别物种的方法，类似于法医 概念上的“指纹”意义，因此称之为色谱指纹图谱。指纹图谱一般包含两层含义：( 1 ) 必须反映出该药材( 或成药) 有别于其他任何物质；( 2 ) 对于中药材，指纹图谱 还能反应出产地和采收期不同而造成的差异；对于中成药，则能反映出同一产品 不同批次间的质量差异，差异越小说明药材( 或成药) 的稳定性越好。在构建h p l c 指纹图谱中利用最多的检测器有紫外检测器( u v d ) 、二极管阵列检测器( d a d ) 、 蒸发光散射检测( e l s d ) 、电化学检测器( e c d ) 、荧光检测( f p ) 、液质联用( l c m s ) 等。单独使用h p l c 和h p l c 联用技术在中药指纹图谱研究应用中发挥了重要的作 用。 ( 1 ) 单独使用h p l c 在中药指纹图谱中的应用 h p l c 由于其分离效果好、精密度高、准确性好、分析速度快、仪器简单等 优点，广泛用于中药材及其制剂的定性定量分析，被认为是目前检测中药指纹图 两南大学硕十学何论文 谱的首选方法。y a n gl iw e i 2 0 】等建立了田基黄h p l c 指纹图谱的测定条件并用于 测定5 0 科叼同产地不同时期的田基黄，实验结果表面指纹图谱和相似度评价能有 效地鉴别阳基黄的产地和质量，为田基黄的鉴别和质控提供了实验依据。另有文 献【2 1 粕1 应用高效液相色谱一紫外检测器、高效液相色谱一蒸发光散射检测器、高效液 相色谱二级管阵列检测器对中国传统中药白芍、红芪、淫羊藿、白芷、北五味子、 板兰根进行了测定，建立了这些传统中药的指纹图谱，为科学评价和有效控制中 药质量提供了可靠的方法，也促进了传统中药的发展 ( 2 ) h p l c 联用技术在中药指纹图谱中的应用。 将色谱法良好的分离能力与波谱法特有的结构鉴别能力相结合，已成为非常 有效的分离、鉴定手段。对于中药复方来说，单用h p l c 指纹图谱来表征困难很大。 采用色谱联用技术建立多维多息特征谱，可较好地解决如何体现中药复方制剂的 整体性和复杂性的难题。目前最常用的是高效液相色谱二级管阵列检测器质谱 质谱联用方式( h p l c 或c e d a d m s m s ) 所得的多维指纹图谱。国内外已经有 大量这方面的文献报道。s d i n g ”铡n l c e s i m s m s 联用技术对银杏营养冲剂 进行了指纹图谱的确定，方法可以同时测定多种萜类和黄酮类化合物，质谱的应 用能更容易地确定黄酮类物质的结构，所建立的方法可用于银杏营养冲剂的质量 控制。z h a oy u 2 8 】等利用h p l c d a d e s i m s 联用技术测定了丹参和水飞蓟复方制 剂中的多种松香烷类二萜、黄酮类和酚酸类生物活性物质，1 4 种有效物质通过 e s i m s 确认，从而建立了月参和水飞蓟复方制剂的指纹图谱，可用于对这些复方 s j j 齐o 的质量控制，同时实验还证明了h p l c d a d e s im s 是一种更加快速、简单、 灵敏度低的方法。韩凤梅 2 9 】等人研究山麦冬甲醇提取物中的物质组成情况，建立 山麦冬h p l c e s i m s 特征指纹图谱，山麦冬用甲醇超声提取，提取液经c 1 8s p e 固 相萃取柱