毕业论文答辩-复方白芍保肝颗粒标志性成分检测方法研究.ppt

复方白芍保肝颗粒标志性成分检测方法研究,专业：食品科学与工程学号：姓名：指导教师：,目录,一、研究目的及意义,二、主要研究内容,原药材的定性、定量分析,成品中功效成分的提取,成品中功效成分定性、定量分析,方法学考察,1.原药材的定性分析,0.5g粉末,乙醇10mL,振摇5min,滤过，滤液蒸干，1mL乙醇回溶,另取芍药苷对照品，用乙醇配制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。,薄层试验,喷5%香草醛,三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40:5:10:0.2）,图1白芍薄层,白芍薄层分析，结果见图1。,葛根,0.8g粉末,甲醇10mL，放置2h,滤过，滤液蒸干，0.5mL甲醇回溶,另取取葛根素对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。,薄层试验,三氯甲烷-甲醇-水（7：2.5：0.25）,紫外光灯（365nm）下检视,葛根薄层分析，结果见图2。,图2葛根薄层,五味子,1g粉末,三氯甲烷20mL,加热回流30min,滤过，滤液蒸干，1mL三氯甲烷回溶,另取五味子醇甲对照品，加三氯甲烷制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。,薄层试验,紫外光灯（254nm）下检视,石油醚-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）,五味子薄层分析，结果见图3。,图3五味子薄层,丹参丹参酮A,1g粉末,乙醚5mL，振摇,放置1h,滤过，滤液蒸干，1mL乙酸乙酯回溶,另取丹参酮A对照品，加乙酸乙酯制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液。,薄层试验,石油醚-乙酸乙酯（4:1）,相同位置显色,丹参酮A薄层分析，结果见图4。,图4丹参酮A薄层,丹参丹酚酸B,0.2g粉末,加热回流1h,75%甲醇25mL,滤过，滤液浓缩至1mL,另取丹酚酸B对照品，加75%甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液。,薄层试验,紫外光灯（254nm）下检视,甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（2：3：4：0.5：2）,丹酚酸B薄层分析，结果见图5。,图5丹酚酸B薄层,甘草,1g粉末,乙醚40mL,滤过，弃去醚液,加热回流1h,甲醇30mL,加热回流1h,滤过，滤液蒸干,残渣加水40mL,正丁醇提取3次,合并正丁醇液,每次20mL,水洗涤3次,正丁醇蒸干，加5mL甲醇回溶,弃去水液,另取甘草苷对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液。,薄层试验,喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰,乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15：1：1：2）,甘草薄层试验，结果见图6。,图6甘草薄层,2.原药材的定量分析,1).芍药苷的提取,圆底烧瓶中加5g粉末,85%乙醇100mL,过滤，减压浓缩,加热回流2h,用25mL石油醚去脂,水饱和正丁醇萃取，浓缩,留下水相,用85%乙醇做空白，将配制好的对照品溶液于紫外分光光度计于230nm的紫外光处测定吸收值，并以浓度为横坐标、吸收值为纵坐标绘制标准曲线，见图7。样品的吸光度为0.2494。,如图7，得到芍药苷的标准曲线的回归方程为Y=0.0598X+0.0015（R2=0.9998），根据样品的吸光度得到芍药苷的含量为3.16%1.6%，符合中华人民共和国药典含量的规定。,图7苯甲酸对照品的标准曲线,用30%乙醇做空白，将配制好的对照品溶液于紫外分光光度计于250nm的紫外光处测定吸收值，并以浓度为横坐标、吸收值为纵坐标绘制标准曲线，见图8。样品的吸光度为1.5918。,2）.葛根素提取,如图8，得到葛根素的标准曲线的回归方程为Y=0.2138X+0.034（R2=0.9992），根据样品的吸光度得到葛根素的含量为3.97%2.4%，符合中华人民共和国药典含量的规定。,图8葛根素对照品的标准曲线,提取3次/1.5h，浓缩，定容25mL容量瓶,用甲醇做空白，将配制好的对照品溶液于紫外分光光度计于254nm的紫外光处测定吸收值，并以浓度为横坐标、吸收值为纵坐标绘制标准曲线，图9。样品的吸光度为1.5317。,2g粉末置于250mL索氏提取器中,氯仿-甲醇(1:3)60mL,3）.五味子醇甲提取,图9五味子醇甲对照品的标准曲线,如图9，得到五味子醇甲的标准曲线的回归方程为Y=35.339X+0.0069（R2=0.9994）根据样品的吸光度得到五味子醇甲的含量为1.79%0.4%，符合中华人民共和国药典含量的规定。,3.成品中功效成分的提取,超声波提取,芍药苷料液比1:20(g/mL),20min,60,75W,乙醇浓度为60%。,葛根素料液比1:20(g/mL),60min,50,100W,乙醇浓度为50%。,丹参酮A料液比1:10(g/mL),40min,60,100W,乙醇浓度为85%。,丹酚酸B料液比1:8(g/mL),15min,50,50W,以蒸馏水为溶剂。,五味子醇甲料液比1:25(g/mL),40min,60,60W,以甲醇为溶剂。,甘草苷料液比1:25(g/mL),40min,60,60W,以甲醇为溶剂。,4.定性分析成品中功效成分,5.定量分析成品中功效成分,分别取成品粉末各1g，按芍药苷、葛根素、五味子醇甲超声波提取法提取功效成分的工艺流程图提取，分别稀释250倍、125倍、85倍，各在230nm、251nm、254nm下测定吸光度值，分别为0.1906、1.5780、1.0762。计算公式：W=CVN/M其中W功效成分含量（）；C标准曲线查得的功效成分浓度(mg/mL)V样品所取的体积（mL）；N稀释倍数；M总质量。,6.方法学考察,（1）芍药苷表1芍药苷回收试验数据表,由表1可知，平均回收率为99.56%，RSD=2.57%。,（2）葛根素表2葛根素回收试验数据表,由表2可知，平均回收率为98.33%，RSD=0.34%。,（3）五味子醇甲表3五味子醇甲回收试验数据表,由表3可知，平均回收率为98.55%，RSD=0.67%。,（1）芍药苷表4芍药苷精密度试验数据表,结果表明：精密度试验RSD=0.265%，该方法精密度较高。,（2）葛根素表5葛根素精密度试验数据表,结果表明：精密度试验RSD=0.349%，该方法精密度较高。,（3）五味子醇甲表6五味子醇甲精密度试验数据表,结果表明：精密度试验RSD=0.349%，该方法精密度较高。,重现性试验,（1）芍药苷表7芍药苷重现性试验数据表,结果表明：重现性试验的RSD=0.308%，该方法的重现性较好。,（2）葛根素表8葛根素重现性试验数据表,结果表明：重现性试验的RSD=0.206%，该方法的重现性较好。,（3）五味子醇甲表9五味子醇甲重现性试验数据表,结果表明：重现性试验的RSD=0.150%，该方法的重现性较好。,（1）芍药苷表10芍药苷准确度试验数据表,（2）葛根素表11葛根素准确度试验数据表,（3）五味子醇甲表12五味子醇甲准确度试验数据表,三、实验结论,紫外分光光度法对测定原药材和成品标志性成分具有简便、快速、准确等优点。此方法用于白芍提取液的测定时，相对标准偏差为0.566，加标回收率95.7%102.0%，RSD=2.57%；用于葛根提取液的测定时，相对标准偏差为0.497，加标回收率98.06%98.88%，RSD=0.34%；用于五味子提取液的测定时，相对标准偏差0.623，加标回收率97.89%99.47%，RSD=0.67%。测定每100g成品中含800mg芍药苷，含800mg葛根素，含300mg五味子醇甲。,感谢指导教师张凤清老师，牛春颖学姐和实验室同学的大力帮助，使得实验顺