（内科学专业论文）青藤碱对肺癌细胞系ncih460增殖、凋亡的影响及其机制的研究.pdf

二、英文缩略语( 1 0 ) 三、论文 论文一青藤碱对肺癌细胞系n c i h 4 6 0 增殖和凋亡的影响 1 前言( 1 1 ) 2 实验材料与方法( 1 2 ) 3 实验结果( 附论文图片) ( 1 5 ) 4 讨论：( 1 8 ) 5 结论( 1 9 ) 论文二青藤碱诱导肺癌细胞系n c i h 4 6 0 凋亡的机制的研究 1 前言( 2 0 ) 2 实验材料与方法( 2 0 ) 3 实验结果( 附论文图片) ( 2 5 ) 4 讨论( 2 7 ) 5 结论( 2 9 ) 论文三地皿k e r k 和p 1 3 k a l 【t 信号通路参与青藤碱诱导n c i - h 4 6 0 细胞凋亡的研究 1 前言。( 3 0 ) 3 在学期间科研成绩( 6 3 ) 4 致谢( 6 4 ) 5 个人简介( 6 5 ) 中文论著摘要 青藤碱对肺癌细胞系n c i h 4 6 0 增殖、凋亡的影响及 其机制的研究 - 上! 蔓鱼， 刖吾 肺癌是严重威胁人类生命的疾病，最新统计资料显示，在世界范围内，肺癌 所引起的死亡占所有肿瘤引起的死亡的首位。尽管目前多种治疗方法，包括分子 靶向治疗，但肺癌治疗的效果始终不令人满意，其五年生存率低于1 5 。为了提 高其5 年生存率，更多的治疗方法正在被探索之中。目前中医药方法治疗肺癌受 到了日益的关注。 青藤碱( s i n o m e n i n e ，s i n ) 是抗风湿中药青风藤( s i n o m e n i n u ms c u t u l l lr e h d e t w i l s ) 的单体提取物，其分子式为c 1 9 h 2 3 n 0 4 ，分子量3 2 9 3 8 。青藤在中国应用 于治疗风湿病已经有上千年历史。其目前在应用上主要以其盐酸盐形式为主即盐 酸青藤碱为主。青藤碱具有抗炎、抗风湿、免疫抑制、镇痛、抗血管生成、抗心 律失常等广泛的药理作用。新近研究报导其具有一定的抗肿瘤作用。 细胞凋亡，又称程序性死亡，包括一系列生物化学事件，引起细胞发生特征 性形体变化和生物化学改变。一些药物通过诱导凋亡的方式抑制恶性肿瘤的增殖。 细胞凋亡主要有三种通路：一种是以f a s 和t n f r 为代表死亡受体信号转导途径， 凋亡发生过程中伴有c a s p a s e - 8 的活化； c y t o c 啪m ec 从线粒体释放到胞浆与 第二种是以线粒体为核心的凋亡途径， a p a f - 1 继而与c a s p a s e - 9 结合，引起 c a s p a s e 9 自身剪切激活，启动凋亡过程中伴有c a s p a s e 9 的活化；第三种是以内 质网为核心的凋亡途径，凋亡过程中伴有c a s p a s e 1 2 的活化。目前青藤碱对肺癌 细胞是否有抑制作用的研究尚未见报导。 本实验研究青藤碱对非小细胞肺腺癌细胞系n c i h 4 6 0 增殖和凋亡的影响， 并研究其机制，为深入研究青藤碱抗肿瘤机制提供实验基础，应用于临床治疗肺 癌提供理论依据。 ( t i 腻n e l ) 方法观察细胞的形态变化：采用扫描电镜观察细胞超微结构的变化。 二、青藤碱诱导肺癌细胞系n c i h 4 6 0 凋亡的机制的研究 采用罗丹明1 2 3 ( r h o d a m i n e l 2 3 ) 染色，通过流式细胞仪检测线粒体膜电位 ( a l p m ) ；采用分光光度法检测c a s p a s e 一3 、c a s p a s e - 8 和c a s p a s e 一9 的活性的变化；采 用w e s t e r nb l o t 方法检测s i n 对凋亡相关的蛋白如细胞色素c 、b c l 2 、b a x 的表 达的影响。 三、m e 姗r k 和p 1 3 l 淞k t 信号通路参与青藤碱诱导 n c i h 4 6 0 细胞凋亡的研究 采用w e s t e r nb l o t 法检测s i n 对n c i h 4 6 0 细胞的e r k l 2 、p e r k l 2 、a k t 、 p a k t 的表达的影响；采用流式细胞仪p i 单染的方法检测信号通路阻滞剂与青藤 碱联合对n c i h 4 6 0 细胞凋亡的影响。 结果；日木 一、青藤碱对肺癌细胞系n c i h 4 6 0 增殖、凋亡的影响： 随着s i n 浓度的加大和作用时间的延长，其对细胞的增殖有明显的抑制作用， 呈现明显的时间剂量效应关系。s i n2 4 0 l ，t g m l 作用7 2h ，其抑制率达到最大的 8 5 8 9 。流式细胞a n n e x i n v p i 检测细胞凋亡分析表明，s i n 作用4 8h ，随浓度的 增高，早期凋亡和晚期凋亡细胞的比例都逐渐增加，与对照组相比差异具有显著 性( p o 0 5 ) 。s i n2 0 0 咖l 组可见凋亡细胞细胞核的棕黄色着色，并可见细胞内 d n a 呈片段化的改变，而对照组没有相应的变化。通过透射电镜观察，对照组 n c i h 4 6 0 的细胞形态规整，细胞核较大，线粒体丰富，膜相结构完整；青藤碱组 凋亡细胞体积变小，胞质浓缩，胞浆内空泡增多，染色质固缩、边集或碎裂成不 规则块状，线粒体肿胀。 2 二、青藤碱诱导肺癌细胞系n c i h 4 6 0 凋亡的机制： 1 2 0 “g m l ，2 0 0 1 a g m ls i n 处理2 4h 后，结果表明c a s p a s e 一3 和c a s p a s e 一9 被活化， 从而参与细胞凋亡的发生。1 2 0 ，2 0 0 t g m ls i n 处理4 8h 后，处理的细胞内的a h o m 峰值下降，分布在去极化区域的细胞增多，与对照组比较有显著差异( p 0 0 5 ) ，细 胞内的甲m 峰出现有意义的向左移的趋势。s i n ( 8 0 ，1 2 0 ，1 6 0 ，2 0 0p t g m 1 ) 对 n c i h 4 6 0 细胞作用4 8h 后，结果可见细胞浆内细胞色素c 逐渐增多，而线粒体 内细胞色素c 逐渐减少，细胞色素c 由胞浆释放到线粒体中。经过s i n ( 8 0 ，1 2 0 ，1 6 0 ， 2 0 0 肛g m 1 ) 处理n c i h 4 6 0 细胞4 8h 后，w e s t e r nb l o t 方法检测结果显示，随s i n 浓 度的不断增加，b a x 蛋白表达水平逐渐升高，而b c l 2 蛋白表达水平随浓度的增加 逐渐降低，b a x b c l 2 的比值逐渐升高。 三、m e k e r k 和p 1 3 k a k t 信号通路参与青藤碱诱导 n c i h 4 6 0 细胞凋亡 随着s i n 处理时间的逐渐延长， e r k l 2 、p e r k l 2 、a k t 、p a k t 表达逐渐 上升。表明s i n 处理可以诱导m e k e r k 以及p 1 3 k a k t 通路的活化。 p d 9 8 0 5 9 + s i n 组、u 陀9 4 0 0 2 + s i n 组与单纯s i n 组相比，所诱导的凋亡明显升高， 与之相比有明显的统计学差异( p o 0 5 ) 。结果表明m e k e r k 以及p 1 3 k a k t 通 路抑制剂拮抗了其通路活化所发挥的抗凋亡作用，对青藤碱诱导的凋亡具有协同 作用。 结论拿日二 1 、青藤碱可以抑制肺癌细胞系n c i h 4 6 0 的增殖，这种抑制作用具有时间和 浓度依赖性。青藤碱抑制肺癌细胞系n c i h 4 6 0 的增殖是通过诱导其凋亡来实现 的。 2 、青藤碱可能通过线粒体途径诱导肺癌细胞系n c i h 4 6 0 的凋亡。青藤碱可 能通过调控b c l 2 家族蛋白的表达，改变线粒体膜通透性，导致c y t o c h r o m ec 从 线粒体释放入胞浆，从而激活线粒体途径而诱发的细胞凋亡。 3 、s i n 处理后诱导n c i h 4 6 0 细胞凋亡过程中，伴随着m e 刈e r k 以及 p 1 3 k a k t 通路的活化。应用m e k e r k 以及p 1 3 k a k t 通路的抑制剂可以拮抗其抗 4 2 信号转 一o n e ；s i nf i g u r e1 ) i sap r i n c i p a la l k a l o i di s o l a t e df r o mt h es t e ma n dr o o to fc h i n e s e m e d i c a lp l a n ts i n o m e n i u ma c u t u mr e h d e l 聊瓜( f a m i l ym e n i s p e r m a c e a e ) w h i c hh a s b e e ns u c c e s s f u l l yu s e df o rc e n t u r i e si nt h et r e a t m e n to fv a r i o u sa u t o i m m u n ed i s e a s e si n c h i n e s ef o l km e d i c i n e g e n e r a l l y , s i nh y d r o c h l o r i d ei st h em a i nc h e m i c a lf o r mf o r p h a r m a c e u t i c a lp u r p o s e s p r e v i o u sr e p o r t sh a v ed e m o n s t r a t e dt h a ts i nh a daw i d e r a n g e o f p h a r m a c o l o g i c a la c t i o n s ，i n c l u d i n g a n t i i n f l a m m a t o r y , a n t i r h e u m a t i c ， a n a l g e s i c ，a n t i a r r h y t h m i c ，a n t i - a n g i o g e n e s i s ，a n t i - l i p i d - p e r o x i d a t i o n a n d i m m u n o s u p p r e s s i v ee f f e c t s f u r t h e r m o r e ，t h ea n t i t u m o re f f e c to fs i n o m e n i n eh a sb e e n r e p o r t e di naf e wp a p e r s a p o p t o s i s ，o rp r o g r a m m e d c e l ld e a t hi sd e f i n e da sa na c t i v ep h y s i o l o g i c a lp r o c e s so f c e l ls e l f - d e s t r u c t i o nw i t hs p e c i f i cm o r p h o l o g i c a la n db i o c h e m i c a lc h a n g e s s o m e a g e n t ss u p p r e s s t h ep r o l i f e r a t i o no fm a l i g n a n tc e l l sb yi n d u c i n ga p o p t o s i s t h e m e c h a n i s mo fa p o p t o s i sm a i n l yi n v o l v e st h em i t o c h o n d r i a l ，e n d o p l a s m i c - r e t i c u l u m s p e c i f i c a n dc e l ld e a t hr e c e p t o r s i g n a l i n gp a t h w a y s t h ek e ye l e m e n t i nt h e m i t o c h o n d r i a lp a t h w a yi st h ee f f i u xo fc y t o c h r o m ecf r o mm i t o c h o n d r i at ot h ec y t o s o l ， w h e r ei ts u b s e q u e n t l yf o r m sac o m p l e x ( a p o p t o s o m e ) 州t ha p a f - 1a n dc a s p a s e 一9 ， 5 l e a d i n gt oa c t i v a t i o no fc a s p a s e 一3 t h ec e l ld e a t hr e c e p t o rp a t h w a yi s c h a r a c t e r i z e db y t h eb i n d i n go fc e l ld e a t hl i g a n d sa n dr e c e p t o r s ，w i t hs u b s e q u e n ta c t i v a t i o no fc a s p a s e - 8 a n dc a s p a s e 3 t h ee n d o p l a s m i cr e t i c u l u mp a t h w a yi sc h a r a c t e r i z e db yt h ea c t i v a t i o no f c a s p a s e 一1 2 i nt h ep r e s e n ts t u d yw ee v a l u a t e dt h ee f f e c t so fs i n o m e n i n eo nt h eg r o w t ho fh u m a n l u n gc a n c e rc e l ln c i h 4 6 0a n di n v e s t i g a t e di t sm e c h a n i s mi n v o l v e di nt h ea p o p t o s i s i n d u c e db ys i n o m e n i n e i tw i l ls u p p l ye x p e r i m e n t a lb a s i sf o r t h ef u t h e ri n v e s i t i g a t i o no f a n t i - t u m o rm e c h a n i s mo fs i n o m e n i n ea n dw i l lp r o v i d et h et h e o r e t i c a lb a s i sf o rc l i n i c a l t r e a t m e n to fl u n gc a n c e r m a t e r i a i sa n dm e t h o d s 1t h er e s e a r c ho nt h ee f f e c t so fs i n o m e n i n eo nt h ep r o l i f e r a t i o n a n d a p o p t o s i so fl u n g c a n c e rn c i - h 4 6 0c e l l s t h ee f f e c to fs i no nn c i h 4 6 0c e l lp r o l i f e r a t i o nw a sd e t e r m i n e db ym t ta s s a y a n n e x i nv f i t ca n dp id o u b l es t a i n i n gw a su s e dt oa n a l y z ea p o p t o s i s m o r p h o l o g i c a l c h a n g e so fc e l l sw a so b s e r v e db yt u n n e la s s a y c h a n g e so fc e l l u l t r a s t r u c t u r e s t u c t u r ew a so b s e r v e db yt r a n s m i s s i o ne l e c t r o nm i c r o s c o p y 2t h er e s e a r c ho nt h em e c h a n i s mo fl u n gc a n c e rc e l ll i n e n c i - h 4 6 0 a p o p t o s i si n d u c e db ys i n o m e n i n e t h em i t o c h o n d r i a lm e m b r a n ep o t e n t i a l ( 甲m ) s t a i n e dw i t hr h o d a m i n e 12 3w e r e e x a m i n e du s i n gf l o wc y t o m e t 巧c a s p a s e - 3 ，一8a n d 一9w e r ed e t e c t e db yc 1 1 r o m o g e m c s u b s t r a t ea s s a y t h ee x p r e s s i o no fa p o p t o s i s - r e l a t e dp r o t e i n s ，s u c ha sc y t o c h r o m ec 、 b c l 一2 、b a xw e r ee v a l u a t e db yw e s t e r nb l o t 3t h er e s e a r c ho nt h em e k e r k 和p 1 3 k a k ts i g n a lp a s s w a y i n v o l v e di nt h ea p o p t o s i si n d u c e db ys i n o m e n i n e t h ee x p r e s s i o no fe r k 1 2 、p - e r k1 2 、a k t 、p a k tw e r ee v a l u a t e db yw e s t e r nb l o t t h ea p o p t o s i si n d u c e db ys i g n a lp a s s w a yb l o c k e r sc o m b i n e dw i t hs i n o m e n i n ew e r e d e t e c t e db yp is t a i n i n gu s e df l o wc y t o m e t r y r e s u l t s 1e f f e c t so fs i n o m e n i n eo nt h ep r o l i f e r a t i o na n da p o p t o s i so fl u n g 6 c a n c e rn c i h 4 6 0c e l l s s i ni n h i b i t e dc e l l p r o l i f e r a t i o n i nn c i - h 4 6 0c e l ll i n e si nac o n c e n t r a t i o n - d e p e n d e n ta n dt i m e - d e p e n d e n tm a n n e r m a x i m a lp r o l i f e r a t i o ni n h i b i t i o nw a so b s e r v e d a t7 2hw i t h2 0 0 i r t g m ls i n ，w h i c hi n h i b i t e dp r o l i f e r a t i o ni n8 5 8 9 o f n c i - h 4 6 0c e l l s t of u r t h e rc o n f i r mt h ei n d u c t i o no fa p o p t o s i sb ys i n w es t a i n e dc e l l sw i t ha n n e x i nv p i ，t u n e la s s a ya n dt e m w e r ep e r f o r m e da tt h es a m et i m ea l s o t h ep r o p o r t i o no f a n n e x i nv p o s i t i v e c e l l si ns i n - t r e a t e dc e l l sw e r ei n c r e a s e di nad o s e - - d e p e n d e n t m a n l i e r ( 木p o 0 5v s t h ec o n t r o lg r o u p ) ，w h i c hs u p p o r t st h ef i n d i n gt h a ts i n - i n d u c e d n c i h 一4 6 0c e l ld e a t hb ya p o p t o s i s a sd e m o n s t r a t e db yt h er e s u l t s ，t r e a t m e n tw i t hs i n ( 1 2 0p , g m la n d2 0 0p g r r a ) f o r4 8hs i g n i f i c a n t l yi n d u c e dt h ea p o p t o t i cc e l ld e a t hw i t h c o n d e n s e dn u c l e ia n di n c r e a s eo ft u n e lp o s i t i v ec e l l s ，s u g g e s t i n gt h a tt h ed n a f r a g m e n t a t i o nw a so c c u r r i n gi nt h e s ec e l l s t h e r ew e r en oc o r r e s p o n d i n gc h a n g e si nt h e c o n t r o lg r o u p t e ma n a l y s i se x h i b i t e dd i f f e r e n tm o r p h o l o g i c a la l t e r a t i o n si n n c i h 4 6 0 c e l l sa f t e rt r e a t m e n tw i t hs i n ( 2 0 0l x g m 1 ) f o r4 8h i nt h ec o n t r o lg r o u p ，n c i - h 4 6 0 c e l lr e m a i n e dr e g u l a r i t ym o r p h o l o g yw i t hl a r g en u c l e u s ，r i c hi nm i t o c h o n d r i a ， m e m b r a n ep h a s es t r u c t u r a li n t e g r i t y c e l lv o l u m es h r i n k i n g ，i n t r a c y t o p l a s m i cv a c u o l e s i n c r e a s i n g ， c h r o m a t i nc o n d e n s a t i o na n dn u c l e a rf r a g m e n t a t i o nm i t o c h o n d f i m s w e l l i n gw e r eo b s e r v e di nt r e a t e dn c i - h 4 6 0 c e l l s 2t h em e c h a n i s mo fl u n gc a n c e rc e l ll i n en c i - h 4 6 0a p o p t o s i s i n d u c e db ys i n o m e n i n e t h ea c t i v i t i e so fc a s p a s e 一3 ，c a s p a s e 一8a n dc a s p a s e 一9w e r em e a s u r e du s i n g c a s p a s e 3 - 8 - 9a c t i v i t ya s s a yk i t a c t i v a t i o n o fc a s p a s e - 3a n dc a s p a s e - 9w e r e s i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e da f t e rs i n - t r e a t e d2 4h ，w h i l en oa l t e r a t i o no fc a s p a s e - 8a c t i v i t y w a so b s e r v e di ns i nt r e a t e dc e l l s i no r d e rt of u r t h e rc o n f i r mt h em i t o c h o n d r i a l i n v o l v e m e n ti ns i n i n d u c e da p o p t o t i cc e l ld e a t h ，w ee x a m i n e dd i s r u p t i o ni nt h e m i t o c h o n d f i a lm e m b r a n e p o t e n t i a l( ) a n dr e l e a s eo fc y t o c h r o m ecf r o m m i t o c h o n d f i ai n t oc y t o p l a s m a sc o m p a r e dw i t hc o n t r o l s ，t h ep r o p o r t i o no f d e p o l a r i z e d c e l l si ns i n t r e a t e dc e l l sw e r ei n c r e a s e di nad o s e - d e p e n d e n tm a n n e r ，c e l l ss h i f l e d t o w a r d sl e f ti nc a s eo fs i n ( 1 2 0 “m la n d2 0 0 g m 1 ) t r e a t m e n tf o r4 8h t h er e s u l t i n d i c a t e dt h a ts i nt r e a t m e n ti n d u c es i g n i f i c a n td i s r u p t i o no f m 佃w e s t e r nb l o t a n a l y s i sr e v e a l e da ni n c r e a s ei nc y t o s o l i cc y t o c h r o m eca f t e rs i nt r e a t m e n ti n 7 n c i - h 4 6 0c e l l s r e l a t i v ed e n s i t yo fc y t o c h r o m eci nm i t o c h o n d r i a lf r a c t i o nw a s d e c r e a s e df o rs i nt r e a t e df r a c t i o na sc o m p a r e dt oc o n t r 0 1 t h e s er e s u l t ss u g g e s tt h a t c ”o c h r o m ec r e l e a s ei si n v o l v e di ns i n - i n d u c e da p o p t o s i s t h ew e s t e r nb l o ta n a l y s i s w e s t e r nb l o ta n a l y s i ss h o w e dt h a ts i nt r e a t m e n tl e a d st od e c r e a s ei nb c l - 2l e v e l s ； i n c r e a s ei nb a xl e v e l sa sc o m p a r e dt oc o n t r o lc e l l s t h er a t i o so fb a x b c l 2i n c r e a s e d a st h ec o n c e n t r a t i o no fs i ni n c r e a s e d t h e s er e s u l t si n d i c a t e dt h a ts i nu p - r e g u l a t i o n b a xp r o t e i ne x p r e s s i o na n dd o w n r e g u l a t i o nb c l - 2p r o t e i ne x p r e s s i o n 3m e k e r k 和p 1 3 k a k t s i g n a lp a s s w a y i n v o l v e di nt h e a p o p t o s i si n d u c e db ys i n o m e n i n e w i t hg r a d u a le x t e n s i o no f t i m e ，t h ee x p r e s s i o no f e r k l 2 、p - e r k l 2 、a k t 、p - a k t w e r ei n c r e a s e da f t e rt r e a t e dw i t hs i n o m i n e n t h er e s u l t si n d i c a t e dt h a ts i n o m e n i n e c o u l di n d u c em e k e r ka n dp 1 3 k - a k tp a t h w a ya c t i v a t i o n p d 9 8 0 5 9 + s i ng r o u p ， l y 2 9 4 0 0 2 + s i ng r o u pc o m p a r e dw i t ht h ep u r es i n o m e m n eg r o u p ，t h ea p o p t o s i s s i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e d ( 木p 0 0 5v s t h ec o n t r o lg r o u p ) t h em e k e r ka n dp 1 3 k a k t s i g n a lp a s s w a yb l o c k e r sp e r f o r m e da n t i a p o p t o t i ce f f e c tb yi n h i b i t e dt h ea c t i v i t i o no f m e k e r ka n dp 1 3 k a k ts i g n a lp a s s w a ya n de n h a n c e dt h ei n d u c t i o no fa p o p t o s i s e f f e c tb ys i n o m e n i n e 。 c o n c l u s i o n 1s i n o m e n i n ec o u l di n h i b t e dt h ep r o l i f e r a t i o no fn c i h 4 6 0c e l ll i n e si na c o n c e n t r a t i o n d e p e n d e n ta n dt i m e - d e p e n d e n tm a n n e r s i n o m e n i n ei n h i b i tl u n gc a n c e r c e l ll i n en c i - h 4 6 0 p r o l i f e r a t i o nt h r o u g ht h ei n d u c t i o no fa p o p t o s i s 2s i n o m e n i n ei n d u c e dl u n gc a n c e rc e l ll i n en c i - h 4 6 0a p o p t o s i sb ym i t o c h o n d r i a l p a t h w a y s i n o m e n i n ep o s s i b l yr e g u l a t e dt h ee x p r e s s i o no fb c l - 2f a m i l yp r o t e i na n d c h a n g e dt h em i t o c h o n d r i a lm e m b r a n ep e r m e a b i l i t y c ”o c h r o m ecr e l e a s e df r o m m i t o c h o n d r i ai n t ot h ec y t o p l a s ma n da c t i v a t e dt h em i t o c h o n d r i a lp a t h w a ya n dt h e n i n d u c e d a p o p t o s i s 3s i n o m e n i n ei n d u c e da p o p t o s i so fn c i - h 4 6 0c e l l sf o l l o w e db yt h ea c t i v a t i o no f m e k e r ka n dp 1 3 k a k ts i g n a lp a s s w a y a p p l i c a t i o no fm e k e r ka n dt h e p 1 3 k a k tp a t h w a yb l o c k e r sc o u l da n t a g o n i z ei t sa n t i a p o p t o t i ce f f e c t sa n di m p r o v e t h es i n i n d u c e da p o p t o s i si nn c i h 4 6 0c e l l s 8 9 p a t h w a y , 英文缩略语 英文缩写英文全称 中文译名 s i ns i n o m e n i n e青藤碱 p i p r o p i d i u mi o d i d e碘化丙咤 d m s o d i m e t h y ls u l f o x i d e二甲基亚矾 m t t m e t h y lt h i a z o l yl t e t r a z o l i u m噻唑兰 f c m f l o w c y t o m e t e r流式细胞仪 d d p c i s p l a t i n 顺铂 t e r m i n a lt r a i l s f e r a s e m e d i a t e d末端转移酶介导的缺 n 小烈e l d u t pn i c k - e n d - l a b e l i n g口末端标记 r o h l 2 3r h o d a m i n e l 2 3罗丹明1 2 3 t e m t r a n s m i s s i o ne l e c t r o n透射电镜 m i c r o s c o p e m a p k s m i t o g e n - a c t i v a t e dp r o t e i n丝裂原活化蛋白激酶 k i n a s e s ， p 1 3 k p h o s p h o i n o s i t i d e 3 - k i n a s e 3 一磷酸肌醇激酶 e r k e x t r ac e l l u l a rs i g n a lr e g u l a t e d细胞外信号调节激酶 k i n a s e e c l e n h a n g c e dc h e m i l u m i n e s c e n c e增强的化学发光 t b s b t r i s b u f f e r e ds a l i n et w e e n - 2 0 t r i s 缓冲盐吐温2 0 p v d f p o l y v i n y l i d e n ef l u o r i d e (聚偏氟乙烯 s d s p a g e s d s p o l t a c r t l a m i d eg e l s d s 一聚丙烯酰胺凝胶 e l e c t r o p h o r e s i s 电泳 p m s f p h e n y l m e t h a n e s u l f o n y l f l u o r i d e苯甲基磺酰氟 t e m e d t e t r a m e t h y l e t h y l e n e d i a m i n e 四甲基二乙胺 l o 青藤碱对肺癌细胞系n c i h 4 6 0 增殖和凋亡的影响 吉 r - - = l - - 莉青 肺癌是严重威胁人类生命的疾病，最新统计资料显示肺癌所引起的死亡占所 有肿瘤引起的死亡的首位【l 】。尽管目前多种治疗方法，包括分子靶向治疗，但肺 癌治疗的效果始终不令人满意，其五年生存率低于1 5 1 2 1 。为了提高其治疗效果 和5 年生存率，更多的治疗方法正在被积极探索之中。目前中医药方法治疗肺癌 受到了日益的关注。 青藤碱( s i n o m e n i n e ，s r n ) 是抗风湿中药青风藤( s i n o m e n i n u ms o u t u mr e h d e t w i l s ) 的单体提取物，其分子式为c 1 9 h 2 3 n 0 4 ，分子量3 2 9 3 8 。青藤碱具有抗炎【3 】、 抗风湿【4 ，5 1 、免疫抑制6 1 、镇痛【7 】、抗血管生成【引、抗心律失制9 1 等药理作用。目 前对肺癌细胞是否有抑制作用的研究尚未见报导。本课题以非小细胞肺腺癌细胞 系n c i h 4 6 0 细胞为模型，采用m t t 的方法检测出青藤碱对肺癌n c i h 4 6 0 细胞活性 的影响；流式细胞术( f l o wc y t o m e t 巧，f c m ) 定量检测细胞凋亡率的变化；t u n n e l 检测以及透射电镜检测青藤碱对肺癌n c i h 4 6 0 细胞形态的影响，以确定青藤碱是 否能诱导肺癌n c i h 4 6 0 细胞凋亡，为进一步研究探讨青藤碱对非小细胞肺腺癌细 胞系n c i h 4 6 0 的影响提供了实验基础，为临床治疗肺癌提供新的方法。 o c h 3 , n c h 3 ， f i g u r e1 t h es n l j c n h eo fs i n o m e n i n e 实验材料与方法 一、实验材料 1 、细胞系及细胞培养： 人肺癌n c h i 4 6