毕业论文答辩-从林蛙皮中提取胶原蛋白的方法比较.ppt

从林蛙皮中提取胶原蛋白的方法比较,学院：化学与生命科学学院专业：食品科学与工程姓名：指导老师：,目录,图1林蛙,一.研究意义,中国林蛙，属于两栖类珍稀动物，林蛙以其独特的营养价值与药用价值日益受到人们的重视。林蛙富含多种氨基酸、激素、微量元素和维生素等营养成分，在药用、滋补和美容等方面都具有非常高的利用价值。,我国林蛙资源十分丰富，近年来关于中国林蛙的相关研究也越来越多，但人们过于粗放式的大量采集蛤士蟆油的同时，将林蛙其他的宝贵资源作为废弃物丢弃十分可惜，既污染环境，又无法充分发挥林蛙的药用和保健价值。林蛙皮是摘取林蛙油后作为饲料或废弃物的物质，富含多种生物活性物质，具有很高的综合利用价值。从林蛙皮中提取胶原蛋白方法比较的研究必将拓宽中国林蛙开发和利用的新途径，不仅能丰富我国的药用资源，还将为带动林蛙产业的工业化生产带来贡献和影响。,二.研究内容,本试验研究的三个阶段,胶原蛋白的方法从林蛙皮中提取,三.实验部分,1.胶原蛋白的提取工艺方法,2.对二甲氨基苯甲醛法测定林蛙皮中胶原蛋白的含量,相关试剂0.75%氯化亚锡溶液氯胺T试剂对二甲氨基苯甲醛试剂羟脯氨酸标准储备液A，500g/ml：准确称取羟脯氨酸标准品50.0mg，用少量水溶解于100ml容量瓶中，加入一滴3mol/L硫酸，定容至刻度。羟脯氨酸标准储备液B，10g/ml：吸取5ml羟脯氨酸标准储备液A于250容量瓶中，用蒸馏水稀释定容至刻度。羟脯氨酸标准工作液：吸取2ml羟脯氨酸标准储备液A及40ml羟脯氨酸标准储备液B于100ml容量瓶中，用蒸馏水稀释定容至刻度。,羟脯氨酸标准曲线的绘制,表1羟脯氨酸标准曲线的绘制,取具塞试管24支，三支一组编号从0至7（每组三支为平行样），第0组作为对照组。按照表1所示加入相应试剂后，摇匀后迅速将试管移至60的水浴锅中，保温20min，再用流动的自来水冷却试管至少3min，室温下放置30min，最后用紫外可见分光光度计在560nm波长处测定吸光度，绘制标准曲线，建立线性回归方程。,胶原蛋白提取的含量测定,式中：W样品中胶原蛋白含量，mg/g；A标准曲线上相应的羟脯氨酸浓度，g/ml；11.1换算系数；m称取样品质量。,公式计算,根据公式可知，测定样品中胶原蛋白含量在称取等量样品且稀释倍数相同的情况下与羟脯氨酸含量成正比。,3.结论与讨论,图2对二甲氨基苯甲醛法测定胶原蛋白的标准曲线,羟脯氨酸标准曲线的绘制,胶原蛋白提取试验结果比较与讨论,表2五种方法提取胶原蛋白所得浸提液中羟脯氨酸含量,由于样品中胶原蛋白含量在称取等量样品且稀释倍数相同的情况下与羟脯氨酸含量成正比，因此羟脯氨酸含量最高的一组即为胶原蛋白含量最高的一组，该方法即为最佳提取方法。根据试验结果对五种方法浸提胶原胶原蛋白的数据进行处理，通过分析表明在同样提取条件下酸法提取羟脯氨酸含量最高，即酸法为从林蛙皮中提取胶原蛋白的最优方法。,4.最佳提取方法的工艺优化,单因素试验,实验结果表明，选取柠檬酸、盐酸、冰醋酸分别为提取剂，在相同条件下，用柠檬酸提取所得浸提液中羟脯氨酸含量最高，故本实验采用柠檬酸作为浸提溶剂。,1.提取溶剂的选择,图3提取溶剂对胶原提取的影响,2.液料比对胶原提取的影响,图4液料比对胶原提取的影响,实验结果表明，当液料比超过201时浸提液中羟脯氨酸含量在逐渐降低。可能是此时柠檬酸溶液对胶原的溶解已经趋于饱和，过多的柠檬酸用量不能有效增加提取率，反而因为柠檬酸用量的增多降低了胶原蛋白在溶剂中的浓度，使浸提液羟脯氨酸含量有所下降。,3.柠檬酸溶液浓度对胶原提取的影响,图5柠檬酸浓度对胶原提取的影响,实验结果表明，随着柠檬酸溶液浓度的提高，浸提液中羟脯氨酸含量逐渐升高，原因可能是随着提取剂浓度的增加，胶原蛋白的溶解度增加；但当柠檬酸浓度超过0.1mol/L时，浸提液中羟脯氨酸含量逐渐降低，可能是此时柠檬酸溶液对胶原的溶解已经趋于饱和，过高的柠檬酸浓度不能有效增加提取率，反而降低了胶原蛋白在溶剂中的浓度。,4.提取时间对胶原提取的影响,图6提取时间对胶原提取的影响,实验结果表明，随着浸提时间的增加，浸提液中羟脯氨酸含量逐渐增加。但当提取时间超过48h以后，浸提液出现变味酸败，蛙皮上有部分被霉菌感染，因此60h及72h两组试验均被直接否定。,5.提取温度对胶原提取的影响,图7提取温度对胶原提取的影响,实验结果表明，在37之前，浸提液中羟脯氨酸含量随温度上升而增高，但当温度超过37时，羟脯氨酸含量反而下降，这可能与胶原蛋白的溶解度有关。可能是低温时提高温度使分子动能增加，提高了溶质扩散的速率，导致胶原溶解度的增加；但当温度高于37时，由于反应是放热反应，溶解度随温度升高而减少。,正交试验,在单因素试验的基础上，选取四个主要影响因素：液料比、柠檬酸浓度、提取时间、提取温度，进行L9(34)正交试验，因素水平见表3，以浸提液中羟脯氨酸含量为指标，确定最佳提取工艺。,表3正交试验表,表4正交试验结果表,四.实验结论,本研究对从林蛙皮中胶原蛋白的提取方法进行了比较，分别利用热水法、酸法、碱法、酶法及盐法对林蛙皮中胶原蛋白进行了提取，通过使用等量林蛙皮，等量浸提液，并取等量部分浸提液利用对二甲氨基苯甲醛法对浸提液中胶原含量进行了测定，经试验表明酸法为最佳提取方法。在得出酸法为最佳提取方法后，对试验工艺进行优化，在单因素试验的基础上，经正交试验确定了酸法提取的最佳工艺条件：柠檬酸浓度0.1mol/L，提取温度37，提取时间48h，液料比为20:1。,本文是在导师邱芳萍老师悉心指导和大力支持下完成的。邱老师以其严谨求实的科学态度、实事求是的科研作风深深地感染和激励着我，她渊博的知识、开阔的视野和敏锐的思维给了我深深的启迪，令我终生受用。其次，感谢王志兵老师在论文试验和撰写过程中给出宝贵的意见和建议。王老师不仅是我求学路上的良师，更是我生活中的益友，在此对王老师四年来的帮助表示深深的感谢。再次，在整个试验的设计和实施过程中，