（基础兽医学专业论文）猪肝脏、肌肉、尿液和血液中莱克多巴胺残留检测方法及残留消除的研究.pdf

中文摘要 b - 激动剂( f a d r e n e r g i ca g o n i s t ) 属于拟肾上腺素类药物，由于其具有促进动物生长、提高瘦 肉率的作用曾被作为饲料添加剂应用于动物养殖业中，然而肛激动剂在动物组织中的残留会严重 危害消费者的身体健康因此，建立p 激动剂残留检测的方法成为关系食品安全的亟待解决的问 题本文旨在建立猪肝脏、肌肉、尿液和血液中莱克多巴胺的高效液相色谱- 荧光检测方法，并将 其应用于连续饲喂莱克多巴胺2 8 天后猪样品中药物残留含量的测定同时还基于停药期间猪组 织和尿液样品中莱克多巴胺的残留含量对残留预测模型进行了初探 本研究建立了猪肝脏、肌肉，尿液和血液中莱克多巴胺的高效液相色谱荧光检测方法经提 取，浓缩和固相萃取净化后，采用反相高效液相色谱荧光检测法进行测定猪组织中药物的检测 限为ln g g ，尿液和血液为0 5n g m l 在2 5 0n g g 添加水平下，肝脏中药物平均回收率为 7 6 3 0 - 8 0 0 ，变异系数为8 2 - 1 i 3 ；肌肉中平均回收率为7 8 9 - 8 6 6 ，变异系数为 1 0 3 0 - 1 3 0 。在1 5 0n g m l 添加水平下，尿液中平均回收率为7 3 9 - 8 0 5 ，变异系数为 5 4 - 9 2 ；血液中平均回收率为8 7 5 - 9 3 8 ，变异系数为6 7 - 1 1 2 该方法完全符合兽药 残留检测方法的回收率要求和精密度要求。 本实验初步研究了连续饲喂莱克多巴胺2 8 天后猪肝脏、肌肉、尿液和血液中药物的残留消 除。5 0 头猪连续拌料饲喂含有1 8m g k g 莱克多巴胺的饲料2 8 天。给药期间莱克多巴胺在肝脏中 残留量为4 5 7 + 1 8 6 n g g ，肌肉中为4 0 1 0 n g g 。停药0 天( 给药2 8 天) 肝脏中药物含量为3 2 0 d ：2 1 2 n g g ，肌肉中为3 1 士1 0n g g 。肝脏中药物残留直至停药9 天时才检测不到，丽停药1 天时肌肉中 药物含量已低至检测限以下。尿液中，莱克多巴胺的含量在给药第7 天时达到最高( 6 5 0 1n g m l ) ， 停药0 天时的浓度为1 2 5 3 士4 7n g n 1 l ，直到停药第1 4 天时药物含量才低于检测限。血液中药物 浓度较低，给药期间达到7 2 ：1 ：3 0n g m l ，停药1 天时降至检测限以下停药0 天时，肝脏和肌肉 中药物的残留含量均低于f d a 和j e c f a ( j o n i n tf a o w h oe x p e r tc o m m i t t e eo rf o o da d d i t i v e s ) 建立的t o l e m n c 和m r l ( m a x i m u mr e s i d u el i m i t ) 同时还基于停药期间猪组织和尿液样品中莱克多巴胺的残留含量对残留预测模型进行了初 探。初步研究了停药时间点i ，2 ，3 ，7 ，9 ，1 4 天和猪样品( 肝脏、肾脏和尿液) 中莱克多巴胺残留浓 度的相关性，肝脏中药物含量和停药时间点的拟合方程为y l = 7 0 8 5 9 x e “”，r 2 = o 8 1 ；肾脏的拟 合方程为y k 一1 3 0 2 3 x 4 ”，r 2 = o 9 6 ；尿液的拟合方程为y u = 3 2 9 5 5 x 1 “，r 2 = o 9 3 。也对由 尿液中莱克多巴胺的含量推测组织中药物的水平进行了初步探索。肾脏和尿液中药物浓度的拟合 方程为y x = 4 2 6 5 1y u ”“，一值为o 9 6 ；肝脏和尿液中药物浓度的拟合方程为y l - 1 1 5 8 8y u “”， r 2 值为o 8 7 。结果表明由尿液中药物残留量推断肾脏中的药物水平比尿液推断肝脏中药物浓度更 接近真实情况对于拟合预测的结果和实测结果的t 检验显示，差异不显著( p 0 0 5 ) 因此，曲 线拟合和回归分析均满足统计学的要求。在停药0 天时肝脏和肾脏中莱克多巴胺的预测值均低于 f d a 建立的t o l e r a n 和j e c f a 建立的m r l 。 【关键词】：莱克多巴胺，猪，高效液相色谱，荧光，残留消除，残留预测模型 a b s t r a c t 争a d r e u e r g i ca g o n i s t s , b e l o n g i n gt oa d r e n o m i m e t i c ，h a v et h ee f f e c to f a n l m n c i n ga n i m a lg r o w t ha n d i n c r e a s i n gl e a nt i s s u ea c c r e t i o n , w h i c ha r cu s e da s , f e e da d d i t i v e si na n i m a lb r e e d i n g h o w e v e r , t h e r e s i d u e so f 争a d 删磁g i ca g o n i s t si na n i m a lt i s s u e sw o t d db eh a r m f u lt oc n s u m e r s h e a l t h t h u s , t h e r e s i d u ed e t e c t i o no f l b - a d r e n e r g i ca g o n i s t sw a sa l li m p o r t a n tw o r ka s s o c i a t e dw i t hf o o ds a f e t y t h e 砒j e c t i v 嚣o f t h i ss t u d yw e r et od e v e l o p8 1 1e f f i c i e n ta n ds e n s i t i v ea n a l y t i c a lm e t h o df o r t h ed e t e c t i o no f r a c t o p m m ei ns w i n el i v e r , m u s c l e ，u r i n e ，a n ds e r u n lb yh p l c f l d a n dt h e nt h ep r o c a x i n r ew a s a p p l i e dt om e a s u r et h ed r u gr e s i d u e si ns w i n ei n c u r r e ds a m p l e sa f t e rt r e a t m e n tw i t hd i e t a r yr a c t o p a m i u e f o r2 8c o n s e c u t i v ed a y s m e a n w h i l e t h ep r e l i m i n a r yr e s e a r c ho f r e s i d u ep r e d i c t i o nm o d e lw a s i n v e s t i g a t e db a s e du p o nt h ed a t ac o l l e c t e df r o ms w i n et i s s u ea n d u r i n es a m p l e s a ne f f i c i e n ta n ds e n s i t i v ea n a l y t i c a lm e 也o df o rt h ed e t e c t i o no f r a c t o p a m i n e ms w i n ef i v e r , m u s c l e u r m e ，a n ds e f l l mb yh p l c - f l dw a sd e v e l o p e d a f t e re x t m t i o n , c o n c e n t r a t i o n , a n ds o l i d - p h a s e c l e a n u po f t h es a m p l e s ，r a c t o p a m i n er e s i d u e sw e d e t e r m i n e db yl i q u i dc h r o m a t n g r a p h y ( l c ) w i t h f l u o r e s c e n c ed e t e c t o r t h el i m i t so f d e t e c t i o n ( l o d ) f o rt i s s u e s , u r i n e , a n ds e r u mw e i rln g 刍0 5 n g m l , a n d0 5r i g m e r e s p e c t i v e l y r e c o v e r i e sr a n g e df i o m7 6 3 - 8 0 o w i t hc o e f f i c i e n to f v a r i a t i o n o f 8 2 1 1 3 f o r l i v e r , 7 8 9 - 8 6 6 w i t h c o e 伍c i e n t o f v a r i a t i o n o f l 0 3 - 1 3 0 0 f o r m u s c l e f o r t i f i e d a t2 - 5 0f l g 僖r e c o v e r i e sr a n g e df r o m7 3 9 - 8 0 5 w i t hc o e f f i c i e n to f v a r i a t i o no f 5 4 - 9 2 f o ru r i n e ， 8 7 5 - 9 3 8 w i t h c o e f f i c i e n t o f v a r i a t i o n o f 6 7 1 1 2 f o r $ e r u m f o r t i f i e d a t l - 5 0 n g m l t h e l o d l o q ，r e c o v e r i e sa n dc v i nt h i sp a p e rw e r ea c c e p t a b l ef o rt h ed e v e l o p m e n ta n de s t a b l i s h m e n tf o ra b i o a n a l y t i c a lm e t i o d r e s i d u ed e p l e t i o no fr a c t o p a m i n ei ns w i n ei n c u r r e ds a m p l e sa f t e rh e a t m e n tw i t hd i e t a r yr a c t o p a m i n e f b f2 8c o n s e c u t i v ed a y sw a si n i t i a l l ya p p r o a c h e d f i f i yp i g sw f e dt w i c ed a i l yf o r2 8 “m 鞠c i n i v e d a y sw i t hf e e d sc o n t a i n i n g 1 8m g k gr a c t o p a m i n eh c i t h er e s i d u ec o n c e n t r a t i o n si nl i v e rw f f f e 4 5 7 ：t ：1 8 6 n g g a n d 4 o ：t ：i 0 n g g i n m u s c l ed u r i n g t h e f e e d i n g p e r i o d r e s i d u e s m l i v e r w e r e3 2 0 j ：2 1 2 n g ga n d3 1 士1 0n g gi nm u s c l ea tt h ew i t h d r a w a lp e r i o do f 0d a y i tc a nn o tb ed e t e c t e di l ll i v e ru n t i l t h e9 w i t h d r a w a lp e r i o d a n dj u s ta tt h ew i t h d r a w a lt i m eo f1d a yj l lm u s c l e t h eh i g h e s tr e s i d u e si n u r i n ew e 阳6 5 0 1n g n 1 la tf e e d i n gp e r i o do f 7d a y , 1 2 5 3 士4 7n g m l a tw i t h d r a w a l t i m eo f 0d a y a n di t c o u l dn o tb ed e t e c t e du n t i lt h e1 4 tw i t h d r a w a ld a y r a c t o p a m i n er e s i d u e s 妯mw e r l gm u c hl o w e r , w h i c hw e r e7 2 - + - 3 0n g m ld u r i n gt h ef e e d i n gp e r i o d , a n dj u s tu n t i lt h ew i t h d r a w a lp e r i o do f1d a yi t w a sb e l o wt h el o d t h er e s i d u ec o n c e n t r a t i o n sa tw i t h d r a w a lp e r i o do f od a y ml i v e ra n dm u s c l ew e r e b o t hl o w e rt h a nt h et o l e r a n c ev a l u e se s t a b l i s h e db yt h ef d aa n dm r l ( m a x i m u mr e s i d u el i m i t ) v a l u e sl i s t e db yt h ej e c f a ( j o n i n tf a o w h oe x p e r tc o m m i t t e eo nf o o da d d i t i v e s ) m e a n w h i l e , t h ep r e l i m i n a r yr e s e a r c ho f r e s i d u ep r e d i c t i o nm o d e lw a si n v e s t i g a t e db a s e du p o nt h ed a t a n c o l l e c t e df r o ms w i n et i s s u ea n du r i n es a m p l e s t h ec o r r e l a t i o nb e t w e e nt h ew i n d r o wt i m ep o i i i ta n dt h e c o n c e n t r a t i o no f r a c t o p a m i n ei ns w i n em a t r i c e s ( 1 i v e r , k i d n e ya n du r i n e ) w a si n i t i a l l yi n v e s t i g a t e d t h e f i t t i n ge q u a t i o nf o rr a c t o p a m i n er e s i d u e sa n dt h ew i t h d r a wt i m ep o i n tw a y l = 7 0 8 5 9 一“w i t hr 2o f 0 8 1f o rl i v e r , y g = 1 3 0 2 3 x 札卯7 w i t hr 2o f 0 9 6f o rk i d n e ya n dy u 一3 2 9 5 5 x l w i t hr 2o f 0 9 3f o r m i n e a n dt h ep r e d i c t i o no f r a c t o p a m i u er e s i d u e si ns w i n et i s s u e sb yt h ec o n c e n t r a t i o no f t h ed r u g m e a s u r e di nu r i n ew a sa l s op r i m a r i l ya p p r o a c h e d t h ef i 壮h l ge q u a t i o no f r a c t o p a m i n er e s i d u e sf o rl i v e r a n du r h l e w a s y = 1 1 5 8 8 x o ”w 曲r 2 0 f 0 8 7 a n d y t l 1 5 8 8 x o 5 。5 w i t hr 2 0 f 0 9 6 f o r k i d n e y a n d u r i n e i ta p p r o v e st h a tt h ep r e d i c t i o no f r a c t o p a m i n er e s i d u e si nk i d n e yw a sm o l ec l o s et ot h er e a l s i t u a t i o nt h a nt h a ti nl i v e rb yt h ec o n c e n t r a t i o no f t h ed r u gi nu r i n et h ett e s to f t h er e s i d u ep r e d i c t i o n a n a l y s i ss h o w e dt h a tt h er e s u l t sb e t w e e np r e d i c t e da n dm e a s u r e dr a c t o p a m i n er e s i d u e sw e 辑n o t s i g n i f i c a n tf f , o 0 5 ) t h u s ，t h ef i t t i n gc u r v ea n dr e g r e s s i o na n a l y s i sb o t hs a t i s f i e dt h es t a t i s t i c a l r e q u i r e m e n t t h ep r e d i c t e dr e s i d u ec o n c e n t r a t i o n sa tw i t h d r a w a lp e r i n do f od a yi nl i v e ra n dk i d n e y w e r e b o t h l o w e r t h a n t h e t o l e r a n c e v a l u e s e s t a b l i s h e d b y t h e f d a a n d m r l v a l u e s l i s t e d b y t h e j e c f a k e yw o r d s ：r a c t o p a m i n e ；s w i n e ；h p l c - f l d ；r e s i d u ed e p l e t i o n ；r e s i d u ep r e d i c t i o nm o d e l l l i 英文缩写 p e a s r c t h p l c i a c g c m s l c m s e l i s a r j a t r f i a f 认 m 口 f l d s p e m r l g l p l d 5 0 a d i l o d l o q c v w t m c x h s a 脒 j e c 1 a p b p k 缩略语表 英文全称 p h e n e t h y l a m i n e s r a c t o p a m i n e 1 1 i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y i m m u n o a f f m i t yc h r o m a t o g r a p h y g a sc h r o m a t o g r a p h y n m s ss p e c t r o m e u 7 l i q u i dc h r o m a t o g r a p h y m a s ss p e c t r o m e u y e n z y m el i n k e di m m u n o s o r b e n ta s s a y r a d i o a c t i v ei m m u n o a s s a y t i m er e s o l v e df l u o r o i m m u n o a s s a y f l u o r e s c e n c ei n d i c a t o ra d s o r p t i o nm e t h o d m o l e c u l a r l yi m p r i n t e dp o l y m e r f l u o r e s c e n d e t e c t i o n s o l i dp h a s ee x n a c o n m a x i m u mr e s i d u el i m i t g o o dl a b o r a t o r yp r a c t i c e h a l f l e t h a ld o s e5 0 a c c e p t a b l ed a i l yi n t a k e l i m i to f d e t e c t i o n l i m i to f q u a n t i t a t i o n t o e 伍c i e n to f v a r i a t i o n w i t h d r a w a l t i m e m i x e d - m o d ec a t i o ne x c h a n g e h u m a ns e m ma l b u m i n f o o da n d & u ga d m i n i s t r a t i o n j o i mf a o w h oe x p e r tc o m m i t t e e o n f o o d a d d r i v e s p h y s i o l o g i c - b a s e dp h a r m a c o k i n e t i cm o d e l 中文全称 苯乙胺类药物 莱克多巴胺 商效液相色谱 免疫亲和色谱 气相色谱质谱联用 液相色谱质谱联用 酶联免疫吸附法 放射免疫法 时间分辨荧光分析法 荧光指示剂吸附法 分子印迹聚合物 荧光检测 固相萃取法 最高残留限量 药品安全性试验规范 半数致死量 每日允许摄入量 检测限 定量限 变异系数 休药期 混合型阳离子交换剂 人血清白蛋白 食品与药物管理局 食品添加剂专家联合 委员会 生理一药代动力学模型 图l - l b - 激动剂的通用结构式 图l - 2 菜克多巴胺的结构式“ 图1 3 莱克多巴胺代谢物a ，b 和c 的结构式 图i - 4 莱克多巴胺代谢物d 的结构式 图表目录 田 图2 - 1 空白猪肝脏、肌肉、尿液和血液中添加莱克多巴胺的液相图谱“ 图2 - 2 不同的提取液提取猪肾中1 0 n g g 莱克多巴胺的液相色谱图 图2 - 32 氨化甲醇乙酸乙酯的洗脱分布图 图3 - 1 各种样品中药物的消除代谢过程 图3 - 2 给药2 8 天时尿液中b 葡萄糖苷酶添加体积的研究 4 图3 - 3 尿液中添加和不添加 葡萄糖苷酶药物含量的比较 1 7 2 0 2 6 2 7 图3 4 猪肝脏中莱克多巴胺的休药期( 残留量低于j e c f a 的m r l 4 0 n g g - 9 5 置信区甸) 一2 8 图3 - 5 猪肾脏中莱克多巴胺的休药期( 残留量低于j e c f a 的m r l 9 0 n g g - 9 5 置信区间) 。2 9 图3 - 6 猪肌肉中莱克多巴胺的休药期( 残留量低于j e c f a 的m r l l 0n g g - 9 5 置信区间) 图3 - 7 肾脏和屎液中莱克多巴胺残留消除的比较 表 表l l 莱克多巴胺的最高残留限量( t l ) 表2 - l 猪肝脏、肌肉、尿液和血液中莱克多巴胺的l o d 和l o q 表2 - 2 空白猪肝脏、肌肉、尿液和血液中添加莱克多巴胺的回收率和批内变异系数恤昌6 ) 1 4 1 5 表2 - 3 猪肝脏、肌肉、尿液和血液中添加莱克多巴胺的平均回收率和批间变异系数( n - 3 ) 1 8 表2 - 4 空白和添加样品中争葡萄糖苷酶酶解前和酶解后莱克多巴胺的残留含量“ 表3 - 1 饲料的组分和比例“ 表3 - 2 经酶解后实测样品中莱克多巴胺的残留消除( i 严3 ) 表3 - 3 经b - 葡萄糖苷酶酶解前和酶解后尿液中莱克多巴胺的残留古量“ 表3 4 猪肝脏和肾脏中莱克多巴胺残留消除的研究 表3 - 5 猪组织中莱克多巴胺的残留消除” 表4 1 猪组织和尿液样品中莱克多巴胺的残留含量( 舻3 ) 表们停药时间点和猪样品中莱克多巴胺含量的拟合方程 表4 3 猪样品中莱克多巴胺含量的拟合值和实测值比较 表4 _ l 尿液中莱克多巴胺浓度和组织中药物含量的拟合方程 表4 5 由尿液预测肝脏和肾脏中药物的残留含量和实铡值的比较 v 3 0 3 l 3 3 3 4 。3 5 挎 趋 为 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书 而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示了谢意 研究生签名：碾蜘时间：2 0 0 7 年占月j 咽 关于论文使用授权的说明 本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留 送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复 制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、 传播学位论文的全部或部分内容。 ( 保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 研究生签名：磊坎京易 时间：2 0 0 7 年月胡 导师签名： i 记戤 髓阃：2 0 0 7 6 只l 逻 第一章引言 本章对p 一激动剂类药物和莱克多巴胺的理化性质、药理活性与毒性作用、药物代谢动力学、 残留消除和残留检测方法进行综述，并对本文的研究内容、方法、目的和意义进行阐述 1 国内外研究现状 1 1p 一激动剂和莱克多巴胺概述 苯乙胺类药物( p h e n e t h y l a m i n e s , p e a s ) 是天然儿茶酚胺类药物的化学合成衍生物，药理效应属 于拟肾上腺素类药物按选择性结合的肾上腺素受体亚型分菟可分为衅肾上腺受体激动荆和b - 肾上腺受体激动剂p e a s 多属于争肾上腺素受体激动剂，简称肛激动剂( 争a g o 血s t s 尹4 1 争激动剂 的通用结构式见图1 1 川 b c a n r h o h 图1 - 1 激动剂的通用结构式苯环上表明舟和p - 的是相对于睇原子的邻位和对位 f i g m c1 - 1 t h eg m lm e o f 争鹋o n i 船 按照分子母核中苯环上取代基的差异，可以将b _ 激动剂分为苯胺型( a n i l i n e q y p e ) 和苯酚型 ( p h e n o l - t y p e ) 苯胺型分子结构中具有芳伯胺基，典型的药物如克伦特罗( c l e n b u t e r 0 1 ) 、溴布特 罗( b r o m o b u t e r 0 1 ) 、马布特罗叫a b u t e r o d 和塞曼特罗( c i m a t e r 0 1 ) 等。苯酚型分子结构中一殷具有邻 ( 间) 苯二酚或苯酚结构，在c - 3 或c - 5 位置有1 或2 个酚羟基苯酚型药物又可分为邻笨二酚 型( 儿茶酚型，如肾上腺素( m a b u t e r 0 1 ) 和异丙肾上腺素( i s o p r e n a l i n e ) ) 、间笨二酚型( 雷索酚型， 如特布他林( t e r b u t a l i n e ) 和非诺特罗( f e n o t e r 0 1 ) ) 和水杨醇型( 如沙丁胺醇( s a l b u t a m 0 1 ) 和吡布特罗 ( p i r b u t e r 0 1 ) ) 5 1 莱克多巴胺属于争激动剂中雷索酚型，具有营养再分配作用【6 1 分子式为c 1 s h n 0 3 ，分子 量为3 0 1 。莱克多巴胺为灰白色或浅黄色粉末，熔点为1 6 4 至1 6 5 7 。由于莱克多巴胺分子中 含有仲胺( p n8 8 5 ) 、对羟甲基酚( p h 9 2 1 ) 和碱性酚c p h1 1 0 1 ) 3 个电离基团，其水溶液呈碱性，p h 为9 4 【5 】。它易溶于有机溶剂，室温下避光保存能够保持稳定莱克多巴胺分子结构中有2 个手 性中心，分别为1 、3 位( 图1 - 2 ) ，因而有r s 、s r 、r r 、s s 4 种异构体作为饲料添加剂应用的 盐酸莱克多巴胺是其4 种异构体的混合物，其中s r 、s s 没有生理活性, r r 生理活性最强, r s 次 之p 】。在甲醇中最大紫外吸收波长为2 2 5 和2 7 7n m 由于酚羟基的存在，莱克多巴胺具有荧光性 质。激发波长为2 2 6a m ，发射波长为3 0 5n m 莱克多巴胺分子结构中，伸氨基和酚羟基是进行化 学反应和结构修饰的活性部位，乙醇胺基是与陡受体结合的有效部位 1 2 药理作用 h 图i - 2 莱克多巴胺的结构式 f i g u r e1 - 2 t h es t l u c t o f co f r a c t o p m n i n e b - 激动剂首先被应用于人医l 临床，因其可与支气管细胞膜上的b ：受体结合，引起支气管平 滑肌松驰从而缓解喘息，并且有较强的抗过敏作用和明显增强支气管纤毛活动的作用，可促进痰 液排出除松弛支气管平滑肌外，该药也激动机体其他部位的bz 受体，如子宫、骨骼肌和血 管平滑肌因此最初是作为平滑肌松驰剂用于治疗支气管哮喘、哮喘性慢性支气管炎、阻塞性肺 炎及肺气肿等呼系统疾病及平滑肌痉挛和休克等症 莱克多巴胺由美国e l i l i l l y 公司研制成功，并于2 0 0 0 年被美国f d a 批准作为新型饲料添加 剂应用于动物生产。莱克多巴胺，克伦特罗、塞曼特罗和沙丁胺醇己被证实能够促进动物生长， 提高饲料转化率，酮体瘦肉率和蛋白质合成，降低体内脂肪的分解代谢 9 1 通过一系列动物试验 证明：当b - 激动剂添加到饲料中的药量超过推荐治疗剂量的5 1 0 倍时，就达到“同化剂量”，一些 b _ 激动剂能使多种动物( 牛、猪、羊、家禽) 体内的营养成份由脂肪组织向肌肉组织转移高剂 量的隆一激动剂通过与靶组织细胞膜& 受体结合，促使g s 蛋白激活腺苷酸环化酶，催化三磷酸腺 苷( a t p ) 转化为环磷酸腺苷( c a m p ) ，进而激活胞内环磷酸腺苷依赖性激酶及蛋白激酶，引起肌 肉中环磷酸腺苷和乳酸浓度的快速升高，肌糖元浓度下降，加快肌肉蛋白质的合成速度而后发挥 生理效应长期连续使用能增加肌肉组织的含量、增加体重，称为“再分配效应棚”。 莱克多巴胺的效应与动物种属有关，对猪的效应尤为明显，其次是牛l “1 g m t i ”1 在猪日粮 中添加莱克多巴胺2 0p 晚，4 周后测定背最长肌中c a m p 、r n a 的浓度和d n a 的转录活性结 果表明，莱克多巴胺可显著提高猪背最长肌中c a m p 的浓度, c a m p 能促进基因转录与翻译过程。 进而促进蛋白质的合成。研究发现，在莱克多巴胺的作用下，猪股二头肌中n a + 和k + - a t p a s e 的活 性得到提高，进而提高了细胞内外n a + 、k + 的梯度，促进氨基酸向细胞膜内转运，为蛋白质的合成 提供更多的底物；同时，在莱克多巴胺作用下，肌肉和肝细胞中c a ”浓度降低，减少了蛋白质的降 解。此外，药物还可与细胞膜上艮受体结合，使皮下脂肪中的c a m p 浓度升高，c a m p 作为第二信 2 使刺激脂肪分解。抑制脂肪合成。陈洪亮【l ”等报道饲料中的蛋白水平可以影响莱克多巴胺对猪的 生长性能，研究结果表明在饲料中含有1 8 的蛋白含量时。可以增加6 0 - 9 0l 【g 育肥猪的平均日增 重，降低料重比，而蛋白水平为1 3 5 时，添加莱克多巴胺则对生长性能无影响但在两种蛋白 水平时，都可改变胴体的组成，使瘦肉率增加，脂肪率下降。莱克多巴胺用于猪的商品名为 p a y l e a n ，推荐对屠宰前4 0 公斤体重的猪连续给予5 - 2 0m g k g 浓度的药物，以提高酮体瘦肉率 用于牛的商品名为o p t a f l e x x 回，推荐对屠宰前2 8 至4 2 天的牛给予1 0 - 3 0m g k g 浓度的药物，以 提高饲料转化率和酮体瘦肉率1 1 7 1 然而，由于这些药物用作促生长剂时具有的合成代谢作用，它们对于人和动物都具有一定的 毒副作用i l q 来源于给药动物的肉类产品中的莱克多巴胺残留可能对消费者产生潜在的危害，主 要以哮喘和心脏疾病为主i l ，】一次性摄入量过大可使人体出现多种毒副作用，可导致体内聚胺浓 度升高而继发心脏肥大和心动过速，对心律失常的病人更容易发生心脏反应，严重时可出现心肌 梗死同时激活了n a + i c 依赖式a t p 酶( 钠泵) ，使c 进入细胞内引起血钾降低，造成低血钾症， 从而导致心律失常而且通过增加肌塘元的分解，引起血乳酸、丙酮酸升高，生成更多的酮体， 容易引起糖尿病人代谢紊乱，导致酮症酸中毒和乳酸中毒 2 0 l 。因此，美国尚未批准莱克多巴胺作 为促生长剂用于除猪和牛以外的其他动物1 2 1 1 而由于克伦特罗残留造成的食物中毒事件，中国和 欧盟同样禁止作为饲料添加剂使用莱克多巴胺。 1 3 药物代谢动力学 莱克多巴胺在动物体内的药动学过程曾被做过深入的研究。口服或注射给药均易吸收大鼠 中o ”，莱克多巴胺的代谢产物被命名为a ，b 和c ( 图1 3 ) 代谢产物a 和b 当中，主要以r r , s s 和r s ，s r 异构体存在，葡萄糖醛酸苷主要结合于莱克多巴胺的a 环上而在代谢产物c 当中， 葡萄糖醛酸苷主要结合于莱克多巴胺的b 环，以异构体的混合物存在 殴o hh f 9 口o k h l h r o d 图1 3 莱克多巴胺代谢物a ，b 和c 的结构式 f i g u r e1 - 3 mm 咖o f m e t a b o l i t e sa ，b ，& co f r w p a m i n e 大鼠中对于莱克多巴胺生物利用度的研究田表明给药0 5 小时后达到血清和血浆药物峰值。 雄性大鼠给药2 0 和2 0 g g 后半衰期为7 9 和1 4 7 小时，而雌性大鼠中半衰期为5 0 和7 0 小 时。莱克多巴胺在体内的代谢和消除速度非常快队4 ，4 天内药物即可达到稳态。 在猪体内进行的对比排泄研究表明p 6 ”，以2 0 m g k g 未作标记的盐酸莱克多巴胺饲喂后，7 天收集时间内排泄出的盐酸菜克多巴胺数量上逐步增加，9 1 从尿排泄，9 从粪便捧泄。掺在对 比饲料中一次性给4 0m g 的以”c 标记的莱克多巴胺后，前三天以“c 标记的莱克多巴胺的排泄 量为9 5 ，给药后第一天的排泄量为8 5 。对口服莱克多巴胺在犬体内的捧泄进行了研究口q ，犬 以o 0 5 ，0 5 ，5m g k g 的剂量胃管给药后达峰时间为给药后l 一2h ，但雌犬以5m g k g 给药其达峰时 间为4 8h ，血浆及全血中药物消除半衰期约为6 h 。犬以o 1 2 5m g k g 的剂量口服1 c 标记的莱克 多巴胺后，7 2 h 内莱克多巴胺的回收率分别为7 9 和7 0 猪体内的莱克多巴胺代谢物要比大鼠体内的复杂猪肝脏、肾脏中有三种代谢产物存在，分别 为r c t - 单葡萄糖苷酸、r c t - 葡萄塘苷酸硫酸扼化物、r c t - 硫酸酯，其中r c t - 单葡萄糖苷酸为其 主要代谢产物。猪饲喂以1 c 标记的莱克多巴胺的研究表明动物的肝脏和肾脏含三种主要的代谢 产物：代谢物a ，b ，c ( 图i - 3 ) 猪尿液中也分离出相同的三种代谢物，鉴定为莱克多巴胺的单葡 萄糖苷酸结合物可提取的肝脏药物残留中，3 0 - 5 0 n 6 为莱克多巴胺，其余部分为莱克多巴胺的结 合物。肾脏中结合物的量稍高6 4 ，莱克多巴胺的量稍低2 0 3 0 2 9 1 犬体内的研究表明含与猪 体内相同的三种代谢物，这三种代谢物也为犬尿液中主要的药物残留f 刈。 对牛体内莱克多巴胺的代谢过程也进行了研究。莱克多巴胺在牛体内代谢为a 、b 、c 和d 四种产物( 图1 4 ) 。牛肝和肾中以代谢物c 量最高，代谢物d ( 图1 - 4 ) 量次之，a 和b 最低1 4 1 4 残留消除的研究 图l - 莱克多巴胺代谢物d 结构式 f i g u r e1 - 4 t h em n k 自no f m e t a b o l i t edo f r a c t o p m i n e d a l i d o w i c z , j e 1 3 2 1 曾报道对1 6 头猪( 8 头公猪，8 头母猪：每头近5 0 公斤体重) 饲喂含2 0m g k g 的莱克多巴胺药物【采用1 标记) 连续7 天停药2 4h , 4 8h 和7 2h 肝脏中药物及其代谢物残留含 量分别为0 1 0 6 4 - 0 0 3 0 ，0 0 7 3 = l - 0 0 2 8 和0 0 5 6 4 - 0 0 1 0p g ，g ；肾脏中药物及其代谢物残留含量分别为 0 1 1 6 4 - 0 0 1 4 ，0 0 4 8 ：t o 0 0 7 和0 0 3 6 士0 0 0 1 g g 。对于未标记的莱克多巴胺的残留消除( 原形药物 的测定，不经酶解过程) 也有相关报道1 3 3 】4 8 头猪( 2 4 头公猪，2 4 头母猪) 饲喂含2 0p g ，g 的盐酸 莱克多巴胺药物连续7 天，然后分别在停药1 2 小时，l 、2 、3 、4 、5 天进行宰杀停药0 、1 、2 、 3 、4 、5 天肝脏中药物残留含量分别为1 i 1 士8 2 、5 幽6 、3 4 ：t ：1 3 、1 7 ：t ：1 1 、1 6 d ：o 8 和如5n g g ； 肾脏中药物残留含量分别为3 1 84 - 2 6 9 、1 2 74 - 1 1 6 、6 74 - 2 5 、3 0 士2 2 、2 2 士1 5 和 5 3 ，根据k 值评 价标准可以确定莱克多巴胺为轻度蓄积药物 1 5 3 亚慢性毒性 在蒋志伟9 1 的研究中，大鼠连续用药4 5 天和9 0 天，精神状态良好，采食、饮水正常。各剂 量组增重、采食量与对照组无明显差异。血象和血清生化指标测定结果表明各组之间无显著差异 ( p o 0 5 ) 各剂量组大鼠心、肝、肾、肺，脾、脑、肾上腺、甲状腺，胃、肠、睾丸、卵巢等 经组织切片光镜检查，均未发现明显病理变化c o l b e r t l 3 。】等进行了莱克多巴胺对小鼠、大鼠和狗 的亚慢性毒性试验研究，小鼠日粮中以2 5 、1 7 5 、1 2 5 0 m g k g d 的剂量添加莱克多巴胺，连续饲喂3 个月，发现试验小鼠的睾丸出现剂量依赖性的重量减少，心脏重量有所增