过敏性鼻炎儿童血清维生素D水平与T淋巴细胞亚群的相关性研究.doc

过敏性鼻炎儿童血清维生素D水平与T淋巴细胞亚群的相关性研究 何玉英曹梅馨周宁陈园园 【摘要】目的探讨过敏性鼻炎儿童血清维生素D水平与T淋巴细胞亚群之间的关系。方法 选择海珠区妇幼保健院1岁以上的过敏性鼻炎患儿200名（实验组）及正常儿童200名（对照组），应用串联质谱仪检测其血清维生素D水平，采用流式细胞技术检测患儿血中CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD28-、CD28+T淋巴细胞亚群的表达情况。统计对比维生素D水平与T淋巴细胞亚群、IgE相关性。结果 实验组总维生素D及维生素D3水平低于对照组（p0.05），两组维生素D2水平无显著性差异（p0.05）。随着维生素D水平的下降，IgE显著升高，CD8+变化不明显，CD8+CD28+及CD28+的百分比逐渐上升，CD8+CD28-的百分比则在不断的下降。结论过敏性鼻炎儿童血清维生素D水平比正常儿童偏低，且以维生素D3水平偏低为主。维生素D缺乏越严重，CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD28-、CD28+T淋巴细胞亚群失衡越厉害，IgE水平也越高。 【关键词】过敏性鼻炎儿童维生素DT淋巴细胞亚群 doi:10.3969/j.issn.1671-332X.xx.11.012 过敏性鼻炎（AllergicRhimitis,AR）的定义是人体接触特定致敏源后引发的由IgE介导的炎症介质的释放，同时有各种炎症细胞及细胞因子参与的鼻黏膜炎症反应性疾病。我国大中城市AR发病率高达8%24%，对于儿童，发病率也随着年龄增长而逐渐增高，67岁发病率为15%，1314岁接近40%1-2，已成为儿科中易发疾病之一。该病的发病机理目前仍未明确，大量的实验均围绕Th1/Th2比例失衡理论展开，认为是Th2细胞过度分化是导致过敏性疾病的重要原因3-4。维生素D3是维生素D的活化形式，其对人体骨钙的调节已为大家所知。最近，越来越多的研究表明，维生素D能作用于各种免疫细胞表面的维生素D受体（VDR）调节免疫系统5，尤其是T淋巴细胞，维生素D能诱导其增值分化6。儿童过敏性鼻炎是一种免疫失衡的疾病，本研究主要探讨过敏性鼻炎儿童血清维生素D水平与T淋巴细胞亚群之间的关系。 1对象与方法 1.1对象 选择xx年2月xx年8月在海珠区妇幼保健院就诊的1岁以上过敏性鼻炎患儿200名组成实验组及正常儿童200名组成对照组。两组平均年龄分别为(4.131.33)、(4.311.25)岁,男/女为0.96、1.04，BMI指数分别为(15.42.3)与(15.62.1)，均无统计学差异（p0.05），具有可比性。 1.2方法 1.2.1维生素D检测 实验抽取研究对象5ml血清，采用国际先进的AppliedBiosystems公司高效液相色谱串联质谱（HPLC-MS/MS）仪，进行血清中25OHD2、25OHD3及其总量的检测。与传统免疫发光方法相比具有特异性强、灵敏度高等特点。 1.2.2T淋巴细胞亚群检测及总IgE测定 入选儿童于早晨空腹取血1ml，EDTA抗凝并于4h内处理标本，应用BD流式细胞分析仪，根据CD8-PC5、CD28PE单抗说明书进行操作，应用流式细胞仪检测确定CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD28和CD28+T细胞亚群，同时应用ELITE4.5软件进行定值分析。总IgE测定运用免疫发光方法进行检测，试剂Beckman公司。 1.3统计学方法 应用SPSS17.0，进行组间比较，采用t检验，数据分析检验水平为=0.05。 2结果 2.1两组间血清维生素D水平比较 对照组总维生素D水平为(32.874.67)ng/ml，其中维生素D2水平为(3.844.21)ng/ml，维生素D3水平为(30.165.52)ng/ml；过敏性鼻炎组总维生素D水平(232)ng/ml，其中维生素D2水平(3.623.04)ng/ml，维生素D3水平(20.382.32)ng/ml。两实验组总维生素D及维生素D3水平均存在统计学意义（见图1）。 2.2两组间T淋巴细胞亚群及IgE对比 实验组CD8+CD28+及CD28+分布明显高于与对照组，p0.01。而实验组CD8+CD28-百分比明显低于对照组,p0.01。IgE作为反映过敏的敏感指标，实验组明显高于对照组，p0.01。见表1。 2.3维生素D水平与T淋巴细胞亚群、IgE相关性 将实验组根据维生素D水平不同分为三组，维生素D缺乏组（15ng/ml）、维生素D不足组（15ng/mlVitD25ng/ml），维生素D充足组（25ng/ml），对比维生素D水平与T淋巴细胞亚群、IgE相关性，结果显示随着维生素D水平的下降，IgE显著升高，CD8+变化不明显，CD8+CD28+及CD28+的百分比逐渐上升，CD8+CD28-的百分比则在不断的下降（见表2）。可见CD8+与维生素D水平无相关性，IgE、CD8+CD28+，CD28+淋巴细胞亚群百分比与维生素D水平呈负相关，CD8+CD28-则与维生素D水平呈正相关，见表3。 3讨论 变应性鼻炎(AllergicRhinitis,AR)也称为过敏性鼻炎，为儿科常见疾病，全球平均发病率10%25%。近几年来AR和哮喘的发病率有明显增加的趋势，尤其是在生活水平较高的工业化发达国家7。而我国目前污染日益严重，大气污染合并各种反常气候的刺激大大增加AR的发病率，不均衡饮食也是AR的重要病因8。维生素D被证实可以通过调节免疫治疗多种自身免疫病，如可以调节免疫防治哮喘、治疗桥本甲状腺炎、型糖尿病、多发性硬化等9，而过敏性鼻炎的发病机理与哮喘类似，本研究通过对比研究发现过敏性鼻炎与血清维生素D水平确实存在相关性，患有常年过敏性鼻炎的儿童血清维生素D水平普遍偏低，且以维生素D3偏低为主，其主要原因可能为食物摄入不足及没有足够的阳光照射10。 通过炎症激活T细胞是过敏性鼻炎的关键环节，在各种激活T细胞中激活Th2细胞的因子更占主导作用，CD8+T细胞根据CD28是否表达进一步划分，其中CD28-为抑制性T细胞（TS），CD28+为杀伤性T细胞（TC），TC细胞能识别抗原特异性，直接杀灭病毒和被病毒感染的细胞11。TS细胞则通过抑制T细胞及B细胞的起到免疫抑制作用，从而控制抗体的产生及外部抗原引起的各种细胞增殖12。本研究过敏性鼻炎患儿与对照组CD8+CD28+及CD28+分布为(21.82.8)%、(65.57.6)%和(18.33.1)%、(43.36.4)%，前者明显高于后者，而CD8+CD28-百分比过敏性鼻炎患儿为(6.02.1)%，明显低于对照组的(8.22.3)%，与曹建伟报道一致13。 众多研究发现维生素D明显下调CD4+细胞数量同时上调CD8+细胞数量，与各种免疫疾病相关。已经被证实能改善如多发性硬化、炎症性肠病、2型糖尿病、湿疹、哮喘等多种自身免疫病及过敏性疾病14-17。本研究发现维生素D水平与过敏性鼻炎发生率密切相关，且免疫失衡是重要原因。随着维生素D水平的下降，CD8+CD28+及CD28+的百分比逐渐上升，CD8+CD28-的百分比则在不断地下降。维生素水平越低，这种免疫失衡就越严重，IgE水平也随之同时上升。 维生素D具有很好的免疫调节作用，可以通过食物及户外晒太阳获得，因此对于儿童，更应增加户外活动的时间，及注意饮食均衡，把维生素D水平检测纳入常规的体检项目，如发现不足即可进行针对性补充，这样就可以有效调节免疫，预防各种过敏性疾病的发生。 参考文献 1ZHANGL,HAND,HUANGD,etal.Prevalenceofself-reportedallergicrhinitisinelevenmajorcitiesinchinaJ.IntArchAllergyImmunol,xx,149:47-57. 2KONGWJ,CHENJJ,ZHENGZY,etal.Prevalenceofallergicrhinitisin3-6-year-oldchildreninWuhanofChinaJ.ClinExpAllergy,xx,39:869-874. 3ROBINSONDS.Th-2cytokinesinallergicdiseaseJ.BrMedBull,2000,56:956-968. 4潘刚强,袁岳沙,陈杰,等.Th1/Th2细胞因子在过敏性鼻炎患者表达水平研究J.检验医学与临床,xx,7(22):2472-2473. 5BORGESMD,MARTINILA,ROGERROMM,etal.CurrentperspectivesonvitaminD,immunesystem,andchronicdiseaseJ.Nutrition,xx,27(6):399-404. 6MAALOUFNM.ThenoncalciotropicactionsofvitaminD:recentclinicaldevelopmentsJ.CurrOpinNephrolHypertens,xx,17(4):408-415. 7LINNEBERGA,NIELSENNH,MADSENF,etal.IncreasingprevalenceofallergicrhinitissymptomsinanadultDanishpopulationJ.Allergy,1999,4:1194-1198. 8韩德民.变应性鼻炎临床诊疗手册M.北京:人们卫生出版社,xx:14-20. 9HERRC,GREULICHT,KOCZULLARA,etal.TheroleofvitaminDinpulmonarydisease:COPD,asthma,infection,andcancerJ.RespirRes,xx,12:31.doi:10.1186/1465-9921-12-31. 10周宁,曹梅馨,黎冬梅,等.过敏性鼻炎儿童血清维生素D水平的临床研究J.中国医药导报,xx,9(17):180-181. 11BATLIWALLAFM,RUFERN,LANSDORPPM,etal.OligoclonalexpansionsintheCD8+CD28-Tcellslargelyexplaintheshortertelomeresdetectedinthissubset:analysisbyflowFISHJ.HumImmunol,2000,61(10):951-958. 12NOCIARIMM,TELFOADW,RUSSOC.PostthymicdevelopmentofCD28-CD8+Tcellssubset:ageassociatedexpansionandshiftfrommemorytonativephenotypeJ.JImmunol,1999,162(6):3327-3335. 13曹建伟,丁俊彩.CD8+CD28+/CD8+CD28-T细胞在过敏性鼻炎患儿外周血中的表达J.广东医学,xx,33(24):3797-3798. 14BARONIE,BIFFIM,BENIGNIF,etal.VDR-dependentregulationofmastcellmaturationmediatedby1,25-dihydroxyvitaminD3J.LeukocBiol,xx,81(1):250-262. 15JEFFERYLE,BURKEF,MURAN,etal.1,25-DihydroxyvitaminD3andIL-2binetoinhibitTcellproductionofinflammatory